原肌球朊分子的穩定性与其結構

最近从肌原纖维中发现的蛋白质——原肌球朊,具有非常特殊的性质与结构。例如:其侧链中63％是极性的,分子长短轴比值近於25,它兼具结晶与聚合成纖维的能力:所以它是极性最高,最不对称的蛋白质分子之一,又是球朊与線状朊间的桥樑。     

不同來源的核酸原肌球朊的電泳行为及其所含戌醣核酸的核鹼組成

關於原肌球朊的許多未解決的問題之中,一項關鍵性的問題便是與核酸絡合的實質。Bailey的古典原肌球朊不含核酸;Hamoir用共沉澱法自鯉肉製得的原肌球阮合戊醣核酸達10—20％,曹利用鹽液自兔横紋肌,猪心心肌與牛子宫平滑肌製得結晶的原肌球朊,其核酸含量各為4％,16％,16％;盛与曹比較全面地研究了各種動物     

不同來源的原肌球朊化學結構的比較研究 Ⅰ.氨基酸組成與氨基末端結構

在前此的工作中,我們研究了各種不同動物中横紋肌、平滑肌或心肌原肌球朊的抽提、淨化、結晶及與核酸絡合的情况;並比較了幾種原肌球朊的若干物理化學性質。這些工作顯示了從不同種屬動物或不同功能結構的肌肉製備的原肌球朊,在分子大小、溶解度、結晶形狀與核酸絡合的量、聚合能力等多種物理化學性質上,有着細微或顯著的差異。雖然目前還沒找到原肌球朊有任何酶的活力,以與其他肌肉蛋白區分,但就可逆聚合、結晶能力、高度不對稱性、對有機溶劑的穩定性等性質上看,作為一類的蛋白質,原肌球朊是有其特徵的。為了更進一步比較它們在結構上微觀的異同,並深入了解     

肌動朊、肌球朊与腺嘌呤核苷三磷酸在溶液中的相互作用

绪言 1939年和发现“肌球朊”具有腺嘌吟核苷三磷酸酶活力,同时底物水解所产生的能量,又用来供应肌肉的伸缩。这种结构与功能统一的观点,奠定了肌肉伸缩的生理化学基础。其後Straub发现了肌动朊,证实旧时所谓“肌球朊”实是肌球朊与肌动朊的络合体。目前研究肌肉     

朊毒体研究进展

朊毒体是一种有别于传统病原微生物概念的特殊致病因子。目前公认其化学本质是一种具有蛋白酶抗性的蛋白质分子。朊毒体又称为传染性蛋白颗粒或朊病毒,是人和动物的传染性海绵状脑病的病原体。本文从朊毒体结构特点、感染机制、动物模型及应用、病理变化及疾病诊断、研究前景等方面作一综述。     

一個新的肌肉結構蛋白之抽提与淨化

過去幾年在我們研究原肌球朊的過程里,經常注意到在粗製製劑中,有一在pH7時緩慢電泳的蛋白成份伴隨。這種蛋白質對热不穩定,其一般性質不類已知的肌肉蛋白。我們試驗了一系列的抽提與淨化的方法,企圖分離這種蛋白質,最後找到了一個簡便的製備步驟。其要點即將絞碎的肉末放紗布袋中,用自來水激流冲洗,去除水溶性肌     

Prion名词的争议

Prion是protein和infection的缩写,是一种蛋白质侵染因子,引发致命性的脑病如人克雅病、疯牛病等,它与类病毒不同的是纯由蛋白质因子组成而不含有核酸。也就是说,尽管此病原不含核酸,但仅是蛋白质分子即可引发疾病,故称之为朊病毒（Prion）,它是一种科技创新的内含,这种蛋白质侵染因子（Prion）可被蛋白酶完全分解。Prion在我国最早音译叫普里昂,后科技名词委员会有关病毒学专家研究,将其译为朊病毒,而后多年引发争论不止。其实,普里昂和朊病毒均可,不用另立新词如朊粒等等。不过要特别提醒的是,不要把“朊”写成“肮”,在我国有些工具书如英汉生物学词典等将Prion译成中文名为肮病毒,朊与肮在汉字中是否通用,未做研究。     

脂筏的结构与功能

脂筏是膜脂双层内含有特殊脂质及蛋白质的微区.小窝是脂筏的一种类型,由胆固醇、鞘脂及蛋白质组成,以小窝蛋白为标记蛋白.脂筏的组分和结构特点有利于蛋白质之间相互作用和构象转化,可以参与信号转导和细胞蛋白质运转.一些感染性疾病、心血管疾病、肿瘤、肌营养不良症及朊病毒病等可能与脂筏功能紊乱有着密切的关系.     

鲢鱼骨骼肌肌球蛋白重链基因的cDNA克隆与表达

肌球蛋白分子含有2个约200kD的重链亚基和4个约20kD的轻链亚基,重链亚基由球状的头部(S1)和α-双螺旋的杆部(Rod)组成1。在鱼类肌肉蛋白质的组成中,肌球蛋白约占肌原纤维蛋白的50%以上,并且其基因在生物进化过程中的变异性很大,以致肌原纤维蛋白性质的变化主要是由肌球蛋白的变化引起的2。       

高等植物中的收缩蛋白

动物肌肉的收縮已經証明是由一种收縮蛋白——肌动球蛋白与ATP相互作用引起的。动物細胞的运动、鞭毛运动、变形虫运动等也存在着类似肌肉收縮的机制。后来Loewy,Tso等及中島宏通在低等植物粘菌(Myxomycete)的原貭团(Plasmodium)中发現一种对ATP敏感的蛋白质,具有类似肌动球蛋白的性质,Tso等命名为粘菌肌球     

酿酒酵母Sup35朊蛋白结构域的自组装机理及其应用的研究进展

Sup35是酿酒酵母的翻译终止因子,其朊蛋白结构域在体内外都能形成淀粉样蛋白纤维。由于其高度有序的交叉β-片层构象与其他物种中的淀粉样蛋白纤维相似,因此,Sup35的分子自组装机理的研究可以作为蛋白质错误折叠性疾病及朊病毒生物学等相关研究的理想模型。而Sup35朊蛋白结构域自组装成纳米线的能力在生物技术和纳米材料等方面已得到广泛的应用。     

信号蛋白质14—3—3研究进展

14－3－3信号蛋白质家族是一组高度保守,分布十分广泛的多功能真核生物蛋白质,具有7个亚型,与各种信号肽分子包括激酶、磷酸酶、膜转移受体等结构,参与细胞内信号传导包括有丝分裂信号转导、细胞周期调节、细胞凋亡等,并对朊蛋白病有重要诊断价值。     

家兔腓肠肌构筑及肌纤维型的实验研究

根据家兔（Ｏｒｙｃｔｏｌａｇｕｓｃｕｎｉｃｕｌｕｓｄｏｍｅｓｔｉｃａ）腓肠 肌构筑和神经代价 应特征,将该肌外侧头分为内侧,中间,外侧业体,内侧头无肌亚体。用家兔８例１６例腓肠肌,按上述３个亚体及内侧头分别取材,做冰冻横切片,肌动球朊ＡＴＰ酶染色,将肌纤维分为ＳＯ型、ＦＯＧ型和ＦＧ型。     

朊病毒蛋白的三维结构

朊病毒病是一类引起人和动物的中枢神经组织退化的疾病,属于蛋白质构象病,涉及蛋白质分子肽链的错误折叠和空间结构的变化。这类疾病的临床表现为进行性共济运动失调、震颤、姿势不稳、痴呆或知觉过敏、行为反常等中枢神经系统症状,100％死亡。人们期望通过对朊病毒蛋白的三维结构的研究来了解其致病机制,以达到预防和治疗的目的。     

蛋白质错误折叠循环扩增技术

目前发现有多种人类及动物疾病是由体内蛋白质的错误折叠引起的,其中朊毒粒病因具有传染性而备受关注.朊毒粒病研究的核心问题之一是正常细胞朊蛋白（PrPc）向异常致病朊毒粒（PrPsc）转变的机制.蛋白质错误折叠循环扩增技术（protein misfolding cyclic amplification,PMCA）就是最新发明的在体外诱导朊蛋白（PrPc）产生错误折叠生成朊毒粒（prpsc）的技术.该文将概要介绍此项技术的原理、技术要点及在诊断与基础研究方面的应用前景.     

蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备

蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景。但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限。因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量。首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His_6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000。蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好。最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础。     

朊病毒病相关细胞凋亡

朊病毒病是一组蛋白质折叠异常的蛋白质构象病,由正常朊蛋白PrP^C转化为具蛋白酶抗性的异常朊蛋白PrP^Sc并在中枢神经系统聚集引起.其主要的病理变化为神经元的丢失,脑组织的海绵样变及神经胶质细胞增生.目前认为其神经元丢失的主要原因为凋亡及自噬等,而神经元的凋亡涉及多种因素及途径,机制较为复杂.对神经元凋亡的研究将有助于揭示朊病毒病的发病机制.     

朊粒,生命与病原体

朊粒的本质是蛋白质。但能自我复制 ,与环境进行能量交换 ,是一种耗散结构 ,从分子生物学、生物物理学以及热力学的观点来看 ,都表明朊粒具有生命现象。同时朊粒具有传染性、致病性 ,因此它能作为一种独立的病原体存在。     

朊病毒病治疗方法的研究进展

朊病毒是一种由体内正常朊蛋白转化形成的传染性蛋白质,朊病毒病是由朊病毒引发的致命性神经退行性疾病。目前临床虽然尚无治疗朊病毒病的方法,但是大量的研究者已从多个角度进行研究,并取得了一定进展。对近期有关传统化学药物、基因治疗方法、免疫学治疗方法和同源朊蛋白的朊病毒病治疗方法进行了综述,并重点分析了新型靶向细胞内信号通路药物以及有潜在利用价值的线粒体相关朊病毒胞内作用信号通路,旨在为朊病毒新的研究方向提供理论依据,从而促进朊病毒病治疗方法应用于临床。     

朊蛋白PrP~C与神经元的凋亡和存活

朊病毒是不含核酸的一种蛋白质感染颗粒,感染宿主后可诱导细胞固有的同类朊蛋白(PrPC)构象改变、转化成具有蛋白酶抗性的致病性朊粒蛋白(PrPSc),导致可传播性海绵状脑病的发生.PrPC既作为朊病毒复制和疾病发生的分子基础,又是正常的细胞膜蛋白,作为细胞信号转导的参与者调控多条信号通路.因此,揭示PrPC在各条信号途径中发挥的作用将有助于深入了解PrPC的生理功能,进一步理解疾病发生发展过程,为今后的诊断治疗奠定基础.