棒状杆菌2,5—二酮基—D—葡萄糖酸还原酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的克隆？…

从棒状杆菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．ＳＣＢ３０５８）初步纯化得到两个２,５－二酮基－Ｄ－葡萄糖酸（２,５－ＤＫＧ）还原酶,在此基础上利用ＰＣＲ技术,以基因组ＤＮＡ为模板,扩增得到含有２,５－ＤＫＧ还原酶Ⅰ基因的片段,定向连接到ＰＧＥＭ３Ｚｆ（＋并转化大肠杆菌ＤＨ５α,是到阳性克隆ｐＧＥＭ８１３。     

催乳素对大鼠前列腺上皮细胞内雄激素受体和5α－还原酶活性的影响

本实验建立了无血清培养的大鼠前列腺上皮细胞内雄激素受体（ＡＲ）的测定方法,并研究了催乳素（ＰＲＬ）对细胞内ＡＲ数量和５α－还原酶活性的影响。结果表明：ＰＲＬ使前列腺上皮细胞内ＡＲ数量显著增加,其中１０ｎｇ／ｍｌＰＲＬ的作用最强,但高剂量的ＰＲＬ则失去对ＡＲ的刺激作用。ＰＲＬ还能拮抗雄激素引起的其自身受体的下调作用,使受体的数量回升至对照组水平。对５α－还原酶的催化产物双氢睾酮（ＤＨＴ）的测定结果显示ＰＲＬ对ＤＨＴ的产生无明显影响,提示ＰＲＬ对５α－还原酶的活性无显著影响。     

人红细胞NADH－细胞色素b5还原酶的分离纯化与鉴定

 人红细胞ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶的分离纯化与鉴定黄长晖,朱忠勇,唐玉钗（南京军区福州总院全军医学检验中心实验科,福州３５０００１）ＮＡＤＨ细胞色素ｂ５还原酶（Ｃｙｔｂ５Ｒ,Ｅ．Ｃ．１．６．２．２．）是红细胞内催化高铁血红蛋白还原为血红蛋白的关键酶...     

八角枫挥发油化学成分研究

八角栎是八角枫科八角枫属药用植物,分布较广。用气相色谱／质谱／计算机联用技术（ＧＣ／ＭＳ／ＤＳ）分析了水蒸气蒸馏得到的八角枫挥发油,鉴定出５９种化学成分,其主要成分为：１,８－桉叶素（４３．３２５％）、β－侧然（１０．７１３％）、丁香酚甲醚（７．０８８）、α－松油醇（７．０１７％）、α－蒎烯（５．８３０％）等５种化合物。被鉴定的５９种成分,共占挥发油总量的９７．０４％。     

大鼠20α羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的表达

利用谷胱甘肽Ｓ－转移酶（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ　Ｓ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ,ＧＳＴ）融合基因表达系统,大鼠２０α羟类固醇脱氢酶（２０αＨｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄＤｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ,２０αＨＳＤ）在大肠杆菌中得以成功地表达。亲和层析和Ｔｈｒｏｍｂｉｎ消化,可从融合蛋白中回收和纯化重组２０αＨＳＤＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和酶活性测定显示,重组２０αＨＳＤ具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性,其对ＮＡＤＰ的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为９．５μｍｏｌ／Ｌ、３３４ｎｍｏ１／（ｍｉｎ·ｍｇ）,对底物２０α羟孕酮（２０αＨｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ,２０αＯＨＰ）的Ｋ＿ｍ值和Ｖ＿（ｍａｘ）分别为５．９μｍｏｌ／Ｌ和３４７ｎｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍｇ）,利用该表达系统大量制备大鼠重组２０αＨＳＤ,为深入研究２０αＨＳＤ的生理活性和功能创造条件。     

细胞色素b5还原酶缺乏症的分子病理机制

细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症的分子病理机制凌光鑫（广东医学院,湛江５２４０２３）关键词细胞色素ｂ_５还原酶缺乏症,突变酶接触某些药物或化学制品,或是先天性ＮＡＤＨ－细胞色素ｂ５还原酶（ｂ５Ｒ）缺乏,均可造成高铁血红蛋白（ＭＨｂ）血症。一组从事ｂ５Ｒ研究的...     

蓝黄红菇的化学成分

从野生真菌蓝黄红菇Ｒｕｓｓｕｌａ ｃｙａｎｏｘａｎｔｈａ Ｓｃｈａｅｆｆ．Ｆｒ．子实体中分得６个化合物,经光谱法分别鉴定为４个麦角甾醇：５α,８α－ｅｐｉｄｉｏｘｙ－（２２Ｅ,２４Ｒ）－ｅｒｇｏｓｔａ－６,２２－ｄｉｅｎ－３β－ｏｌ １,５α,８α－ｅｐｉｄｉｏｘｙ－（２４Ｓ）－ｅｒｇｏｓｔａ－６－ｅｎ－３β－ｏｌ ２,（２４Ｓ）－ｅｒｇｏｓｔａ－７－ｅｎｅ－３β,５α,６β－ｔｒｉｏｌ ３,     

急性低氧诱导大鼠皮层和海马区自由基增殖

实验模型采用麻醉大鼠人工吸入１０．５％－１１．０％氮氧混合气体（相当于５０００ｍ海拔高度），于低氧前５ｍｉｎ由股静脉注入α－苯基－Ｎ－叔丁基甲亚胺－Ｎ－氧化物（ＰＢＮ，α－ｐｈｅｎｙｌ－ｔｅｒ－ｂｕｔｙｌｎｉ－ｔｒｏｎｅ）。结果发现低氧１５ｍｉｎ后，皮层和海马ＰＢＮ－自旋加合物电子自旋共振（ＥＳＲ，ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｓｐｉｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）信号强度显著大于常氧对照组（ｎ＝５，Ｐ〈０．０１）。     

D—葡萄糖苷酶抑制剂的研究

用高灵敏度的荧光法研究了１３种糖类化合物对α或β－Ｄ－葡萄糖苷酶的抑制作用,实验结果表明：５－氨基－５－脱氧－Ｄ－吡喃葡萄糖－１－磺酸铵盐（１）、５－氨基－５－脱氧－Ｄ－吡喃葡萄糖－１－磺酸（２）、５－氨基－５－脱氧－Ｄ－葡萄糖－１－亚硫酸加成物（３）等三种氮杂糖对α或β－Ｄ－葡萄糖苷酸均呈现竞争性抑制作用,化合物（１）的Ｋ＝３７２μｍｏｌ／Ｌ;Ｋｉ＾β＝６．３８μｍｏｌ／Ｌ,化合物（２）的Ｋｉ＾     

大鼠20α羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中的表达

利用谷胱甘肽Ｓ－转移酶融合基因表达系统,在鼠２０α羟类固醇脱氢酶在大肠杆菌中得以成功地表达,亲和层析和Ｔｈｒｏｍｂｉｎ消化,可从融合蛋白中回收和纯化重组２０αＨＳＤ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和酶活性测定显示,重组２０α ＨＳＤ具有天然蛋白质相同分子量、相似的抗原性和酶催化活性,其中ＮＡＤＰ的Ｋｍ和Ｖｍａｘ分别为９．５μｍｏｌ／Ｌ、３３４ｎｍｏｌ／（ｍｉｎ．ｍｇ）,对底物２０α羟孕酮的     

产鸟苷的枯草杆菌缺失GMP还原酶活性突变株的选育

以枯草杆菌ＳＭ－１２－２为出发菌株,经物理化学诱变剂连续处理,获得一株８－氮杂鸟嘌呤（８－ＡＧ）,缺失鸟苷酸（ＧＭＰ）还原酶性的突变株Ｇ－２０５。该突变株肌苷酸（ＩＭＰ）脱氢酶活性比亲株高,在培养基中积累５．１７ｍｇ／ｍｌ鸟苷,９．８４ｍｇ／ｍｌ肌苷。     

胸腺肽的合成及抗衰老作用研究

我们采用Ｍｅｒｒｉｆｉｌｄ固相法合成了胸腺生成素Ⅱ的活性片段ＴｈｙｍｏｐｏｉｅｔｉｎⅡ３２～３６（Ｔｐ－５）和胸腺素α１的活性片段Ｔｈｙｍｏｓｉｎ２３～２７（（Ｌｙｓ２３）α１－５）,用０．１,１,１０,１００,１０００ｕｇ／ｋｇ体重的Ｔｐ－５和（Ｌｙｓ２３）α１－５分别腹腔注射小鼠,连续１０天,能使小鼠肝、脑、脾和胸腺组织中丙二醛含量显著降低,可以促进免疫活性和抑制体内脂质过氧化物的生成,最适剂量集中在１～１００μｇ／ｋｇ体重,Ｐ＜０．０１。     

佛波酯对NIH3T3细胞整合蛋白α_5亚基表达的影响

１００ｎｍｏｌ／Ｌ佛波酯（１２－Ｏ－ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏｂｏｌ１３－ａｃｅｔａｔｅ,ＴＰＡ）作用于ＮＩＨ３Ｔ３细胞２４ｈ,流式细胞仪检测到细胞表面整合蛋白α５亚基含量增加５２．３％．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法测定结果亦表明整合蛋白α５亚基ｍＲＮＡ量增加,于２ｈ时达到高峰,为对照的４．１４倍．蛋白激酶Ｃ（ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ,ＰＫＣ）的活性增加趋势与之基本一致．运用ＰＫＣ的抑制剂鞘氨醇（ｓｐｈｉｎｇｏ－ｓｉｎｅ）和酷氨酸激酶（ｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）抑制剂４,５,７－三羟基异黄酮（ｇｅｎｅｓｔｅｉｎ）进一步研究,发现两者均可抑制佛波酯对整合蛋白α５亚基表达的上调作用．提示佛波酯对ＮＩＨ３Ｔ３细胞整合蛋白α５亚基表达的调控与ＰＫＣ和ＴＫ均有关．     

构建基因工程菌发酵产生维生素C的前体2-酮基-L-古龙酸

从棒状杆菌ＳＣＢ３０５８克隆得到两个２,５－ＤＫＧ＾＊＊还原酶基因后,构建了两个能够表达２,５－ＤＫＧ还原酶的基因工程大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）ＰＥＴ９ａⅡ和ＤＨ５α（ｐＢＬ４）和一个基因工程欧文氏菌ＥＲ９７。２,５－ＤＫＧ还原酶基因分别受控于ＰＬ或Ｔ７启动子,通过加入ＩＰＴＧ或提高温度进行诱导,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和酶活测定确定它们在诱导后得到了高表达,用细胞抽提液在加入辅酶ＮＡＤＰＨ的体外实验中转     

8%—9%和12%—13%低氧气体诱导大鼠左右心室肌自由基增殖

α－苯基－Ｎ－叔丁基甲亚胺－Ｎ－氧化物（ＰＢＮ,α－ｐｈｅｎｙｌ－ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌｎｉｔｒｏｎｅ）由股静脉注入ＳＤ大鼠体内,鼠暴露于８％－９％Ｏ２（ｉｎＮ２）１５ｍｉｎ,左心肌ＰＢＮ－自旋加合物电子自旋共振（ＥＳＲ,ｅｌｅｃｔｒｏｎｓｐｉｎ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ）信号明显增强（与常氧组比,ｎ＝５,Ｐ〈０．０５）。,而右心肌变化不明显（ｎ＝５,Ｐ〉０．０５）。暴露于１２％－１３％Ｏ２（ｉｎＮ２）的     

小鼠胎肝间充质干细胞在缺血脑组织中迁移机制的研究

目的：探讨小鼠胎肝间充质干细胞（flMSCs）在缺血脑组织中迁移的机制。方法：分离和培养小鼠flMSCs,制备小鼠脑缺血再灌注模型,RT-PCR方法检测小鼠flMSCs表达的趋化因子受体及其唯一配体基质细胞来源因子1α（SDF-1α）在缺血损伤脑组织中的n1RNA表达;Westernblot检测SDF-1α蛋白在缺血损伤脑组织中的表达;免疫组织化学检测SDF-1α在缺血损伤脑组织中的表达和分布;Boydenchamber法进行SDF-1α诱导flMSCs迁移的体外实验。结果：flMSCs经RT-PCR检测表达趋化因子受体CR1,CR3,CXCR1,CXCR2,CXCR3,CXCR4。脑缺血损伤侧脑组织SDF-1αmRNA表达显著增高,与正常脑组织SDF-1αmRNA比,具有显著差异（P〈0．01）,Westernblot检测显示缺血侧脑组织SDF-1α蛋白表达量在12、24、48h分别为0．35±0．05,0．88±0．04,0．74±0．07,与正常脑组织SDF-1α蛋白（0．22±0．04）比,差异有显著性（P〈0．01）。免疫组织化学检测显示,缺血损伤后24h,缺血侧脑皮质,海马等缺血边缘区SDF-1α表达显著增高,缺血对侧及正常脑组织未见明显SDF-1α表达。体外迁移实验显示SDF—1α体外可以趋化flMSCs发生迁移,CXCR4阻断抗体可以阻断SDF—1α诱导flMSCs发生的迁移。结论：SDF-1α可以诱导flMSCs发生迁移,趋化因子受体CXCR4及其配体SDF-1α的相互作用是flMSCs在缺血损伤脑组织中迁移的机制之一.     

万丈深的化学成分

万丈深（ＣｒｅｐｉｓｐｈｏｅｎｉｘＤｕｎｎ）为菊科还阳参属植物,分布于云南等地。有祛风散寒、消炎解毒的作用,用于治疗感冒,上呼吸道感染,支气管炎等。其化学成分尚未见报道。对该植物地下部分的化学成分进行研究,分离得到８个化合物。经分析鉴定为：蒲公英赛醇（ｔａｒａｘｅｒｏｌ,１）,α－香树素乙酸酯（α－ａｍｙｒｉｎａｃｅｔａｔｅ,２）,β－香树素乙酸酯（β－ａｍｙｒｉｎａｃｅｔａｔｅ,３）,α－香树素（α－ａｍｙｒｉｎ,４）,β－香树素（β－ａｍｙｒｉｎ,５）,β－谷甾醇（β－ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ,…     

双乙酰还原酶的分离纯化研究

比较了５种细菌、４种酵母菌和鸡肝中双乙酰还原酶含量,其中粪肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏ－ｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）ＡＳ１．５９５中含量较高,为９．６ＩＵ／ｇ湿菌体。并对ＡＳ１．５９５菌酶和鸡肝酶进一步经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００和ＤＺＡＥ柱分离纯化,提纯倍数分别为４５、８９３,最后收率分别为１８．５％、５．１％。     

两种光敏化合物对斜纹夜蛾超氧物歧化酶影响的比较研究(英文)

室内测试了斜纹夜蛾Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ Ｆ． ４龄幼虫超氧物歧化酶的活性,并就α－三噻吩（α－ｔｅｒｔｈｉｅｎｙｌ）和化合物５,即１－苯基－４－（３,４－亚甲基二氧）苯基－丁二炔等两种光敏化合物对其产生的影响进行了比较研究。结果表明,近紫外光照（３００－４００ｎｍ）基本不影响对照幼虫超氧物歧化酶活体（ｉｎｖｉｖｏ）活力,但对其离休（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）活力有抑制作用。经光敏化合物处理后,在紫外光照下,超氧物歧化酶活体活力基本不受化合物５的影响,但能被α－三噻吩抑制。离体情况下,两种化合物均促进其活力,α－三噻吩尤甚。表明无论在离体还是活体情况下,幼虫对α－三噻吩均比化合物５具有更高的光敏性。对两种光敏化合物可能的作用机理进行了探讨。     

宝兴卫矛甾体成分研究

从宝兴卫矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｍｕｐｉｎｅｎｓｉｓ Ｌｏｅｓ ｅｔ Ｒｅｈｄ）中分离得到６个化合物,分别鉴定为：豆甾－４－烯－３,６－二酮（１）,ｓｔｉｇｍａｓｔａｎｅ－３β,６α－ｄｉｏｌ（２）,ｓｔｉｇｍａｓｔａｎｅ－３β,５,６α－ｔｒｉｏｌ（３）,３β－ｈｙｄｒｏｘｙ－５α,８α－ｅｐｉｄｉｏｃｙｅｒｇｏｓｔａ－６Ｅ,２２Ｅ－ｄｉｅｎｅ（４）,β－谷甾醇（５）,胡萝卜甙（６）,化合物１￣４