位点2蛋白酶的结构域、功能与作用机制研究进展

膜内蛋白酶对跨膜蛋白的不可逆性切割过程在跨膜信号转导途径中起着重要作用。位点2蛋白酶(site-2 proteases, S2P)属于膜内蛋白酶中的金属蛋白酶家族。基于进化树的序列分析,S2P及其同源物可以分为亚组Ⅰ至亚组Ⅳ,亚组Ⅰ包括了绝大多数真核生物和细菌的S2P及其同源物,亚组Ⅲ则为少数原核生物如枯草芽孢杆菌和古细菌如詹氏甲烷球菌的S2P同源物。由于S2P参与的信号转导从细菌到人类均具有保守性,本文以亚组Ⅰ和亚组Ⅲ的S2P为例进行综述,阐明S2P及其同源物对跨膜蛋白的切割过程,并展望尚待研究的方向。     

蛋白酶及其抑制剂关键活性位点研究进展

蛋白酶广泛存在于生物体中,参与分解蛋白质,维持生物体正常的生命活动.蛋白酶抑制剂通过与蛋白酶活性位点结合调控靶蛋白酶活性,从而影响蛋白质代谢.蛋白酶及其抑制剂关键氨基酸的突变,可以影响其生理功能、稳定性、催化活性、抑制特异性等.通过挖掘自然界蛋白酶及其抑制剂的各种突变体,分析它们的关键活性位点,并运用蛋白质工程手段改造...     

食线虫菌物胞外蛋白酶基因工程研究进展

在病原线虫的生物防治中 ,利用食线虫菌物在侵染过程中分泌的胞外蛋白酶 (重要毒力因子 )固定线虫并降解线虫体壁显示出巨大的潜力。综述了近年来食线虫菌物胞外蛋白酶的研究概况、目前开展蛋白酶基因工程研究存在的问题及解决策略;对真菌胞外蛋白酶应用于线虫生防和生物医药领域中的前景也进行了评述。     

慈菇蛋白酶抑制剂A和B中Trp残基周围构象与酶抑制专一性的关系

通过定点诱变结合荧光光谱学方法研究了慈菇蛋白酶抑制剂A和B(APIA和APIB)Trp残基周围构象与酶抑制专一性之间的关系。研究表明APIB中的两个Trp残基 (93和 12 2位 )所处环境的疏水性要比APIA中的强。Trp定点诱变研究表明 ,在APIB中 ,Trp12 2 周围环境的疏水性要比Trp93 强。用Ser和Leu分别替代 82位Leu和 87位Arg ,使APIB中色氨酸荧光特性变得与APIA的基本相同 ,同时还发现其酶的抑制专一性也变得趋近APIA的 ,暗示Trp周围的构象与酶抑制剂的抑制专一性有关。     

病毒—基因工程的重要工具

长期以来,病毒一直被人们视为恶魔,这是因为病毒作为一种传染因子对生物有极大的危害:它可以使家畜大批致病死亡,使农作物大幅度减产,使人类患各种严重疾病,如肝炎、脑炎、恶性癌肿及艾滋病等,有的目前还是不治之症.其实,自然界也有许多病毒不致病甚至可以造福于人类,如现在全世界已基本上消灭了烈性病毒病天花就是痘苗病毒的功劳.还有昆虫核型多角体病毒是当代生物防治害虫的有效杀虫剂,已广泛大面积应用于农林业生产中.由于现代病毒学和分子生物学及其技术的发展,即使某些有害的病毒也     

纤维素酶的底物专一性

天然纤维素的有效酶解取决于外切葡聚糖纤维二糖水解酶（ＣＢＨ）和内切葡聚糖水解酶（ＥＧ）的协同作用。ＥＧ随机水解纤维素无定形区分子链内的β－１,４－糖苷键;ＣＢＨ则由分子链的还原性末端水解出纤维二糖。这种底物专一性差别的原因在于ＣＢＨ呈“桶状”的活性部痊表面存在２个“ｌｏｏｐ”结构,只能容许纤维素分子链的末端伸入到活性裂隙中。ＥＧ无“ｌｏｏｐ”结构在存在,对底物是充分可及的。ＥＧ催化结构域中底物结合     

酵母产生干扰素——基因工程研究的新成果

干扰素是同病毒病和癌症作斗争的有力工具,有所谓“妙药”之称。人干扰素一般采用细胞培养方法籍助诱导剂产生的,但需要大量血液,价格昂贵,而且干扰素还表现严格专一性,因此,临床应用就受到很大的限制。为此,基因工程制取干扰素获得成功为     

整合型碱性蛋白酶基因工程菌中抗性基因的敲除*

要：利用大肠杆菌载体pET—韶a和穿梭载体PHY3肋队构建了敲除载体p10c,通过DP4A变性技术和同源重组技术成功地敲除了整合型碱性蛋白酶基因工程茵BP旧1中的卡那霉素抗性基因(M),得到11株敲除卡那霉素抗性基因的阳性克隆,并使产酶水平保持稳定。该方法的建立为基因敲除技术在工业微生物研究中应用提供了经验,并为微生物来源的转基因产品安全性的研究提供了模型。     

枯草杆菌蛋白酶基因工程的研究进展

本文介绍了枯草杆菌蛋白酶（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）的研究现状,即利用定位诱变和体外重组等技术改变酶的性质,包括催化活性、底物特异性、稳定性、低温适应性以及酶在有机相中的性能等。对枯草杆菌蛋白酶的成功改造不仅有可观的商业价值,而且为蛋白质工程的发展作出了重要的贡献。     

枯草杆菌蛋白酶的基因工程改性

枯草杆菌蛋白酶（Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ）是一种工业上应用很广的酶,在洗涤剂、制革、丝绸等多种行业上有着广泛的用途。特别是用于生产加酶洗涤剂,帮助去除血渍、奶渍、汗渍及可可等各种蛋白污垢。１９６０年,丹麦人首先利用地衣芽孢杆菌生产了被称为Ｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ的碱性蛋白酶,随后该酶被用于生产加酶洗涤剂,目前有资料称国外市场上９０％是加酶洗涤剂。国内１９９０年枯草杆菌蛋白酶产量约为１．３万吨,加酶洗衣粉占洗涤剂总量约１０％。枯草杆菌蛋白酶的生产菌和研究对象主要是地衣芽孢杆菌、解淀粉芽…     

枯草杆菌蛋白酶基因工程的研究进展

本文介绍了枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)的研究现状,即利用定位诱变和体外重组等技术改变酶的性质,包括催化活性、底物特异性、稳定性、低温适应性以及酶在有机相中的性能等。对枯草杆菌蛋白酶的成功改造不仅有可观的商业价值,而且为蛋白质工程的发展作出了重要的贡献 。     

红花菜豆凝集素的糖结合专一性

经肼解、Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－２柱层析、ＮａＢ＾３Ｈ４和ＮａＢＨ４还原,制备各种来源的、氚标记在还原末端的、还原末端为Ｎ－乙酰氨基葡萄糖醇的混合寡糖,经Ｂｉｏ－Ｇｅｌ Ｐ－４凝胶柱分离,以及用糖苷酶酶解,制备了各种不同类型的氚标记的寡糖。这些寡糖在固定化的ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上亲和层析,根据各种类型寡糖在ＰＣＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ柱上的层析行为,确定红花菜豆（矮生红花变种）凝集素（ＰＣＬ）的     

竹叶青蛇毒丝氨酸蛋白酶的分子克隆和序列比较

利用逆转录酶与聚合酶链反应相结合的RT—PCR法,扩增出5个竹叶青(Trimeresurus stejnegeri)蛇毒丝氨酸蛋白酶的cDNAs;将扩增的cDNA片段克隆入pGEM-T载体中,筛选得到它们的基因,分别命名为TSSP-1、TSSP-2、TSSP-3、TSSP-4和TSSP-5。经末端终止法测定核苷酸序列,推导出5个丝氨酸蛋白酶的全序列;结合纯化的蛋白酶N-末端序列测定结果,推导TSSP-2、-3和-4分别编码凝血酶样酶stejnobin、纤溶酶stejnefibrase 1和2。5个丝氨酸蛋白酶分别含有1～6个N-型糖基结合位点,表明它们的计算分子量与纯化蛋白表观分子量之间的差异是由糖含量的不同造成,而其氨基酸序列相似度在60％～90％。TSSP-1和-2编码的成熟蛋白酶由236个氨基酸残基组成,TSSP-3、-4和-5的则由234个氨基酸残基组成。TSSP-1编码的蛋白酶在组成丝氨酸蛋白酶三联体催化活性中心产生了His^41-Arg^41的天然突变,这与其他自然界已发现的丝氨酸蛋白酶明显不同。     

蛋白酶抑制剂在抗虫基因工程中的应用

简要介绍了蛋白酶抑制剂的种类及其在抗虫基因工程中的应用,并根据当前的研究情况,对蛋白酶抑制剂的研究前景和方向做了一些探讨。     

蛋白酶抑制剂及其在抗虫基因工程中的应用

蛋白酶抑制剂可以抑制昆虫的生长和发育,近年来在抗虫基因工程得广泛的应用。本文综述了蛋白酶抑制剂及其抗虫性,蛋白酶抑制剂转基因植物的研究概况,同时探讨了蛋白酶抑制剂在抗虫基因工程中的利用前景、存在问题和解决途径。     

蛇毒丝氨酸蛋白酶多样性──底物专一性免疫化学及序列比较研究

本文报道烙铁头（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｍｕｃｒｏｓｑｕａｍａｔｕｓ）蛇毒纤维蛋白原溶酶（ＴＭＶＦｇ），眼镜王蛇（Ｏｐｈｉｏｐｈａｇｕｓｈａｎｎａｈ）蛇毒纤维蛋白原溶酶（ｏｈＳ１），竹叶青（Ｔｒｉｍｅｒｅｓｕｒｕｓｓｔｅｊｎｅｇｅｒｉ）蛇毒专一纤溶酶原激活剂（ｓｖ－ｐＡ）对５种小分子多肽底物的底物专一性，及这些蛇毒丝氨酸蛋白酶对各种凝血因子（第Ｘ因子、凝血酶原、纤溶酶原、蛋白Ｃ）的作用，并和其它蛇毒丝氨酸蛋白酶如矛头蝮（Ｂｏｔｈｒｏｐｓａｔｒｏｘ）蛇毒凝血酶样酶（Ｂａｔｒｏｘｏｂｉｎ）、铜头蝮（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎｃｏｎｔｏｒｔｒｉｘｃｏｎｔｏｒｔｒｉｘ）蛇毒蛋白Ｃ激活剂ＡＣＣ－Ｃ、蝰蛇（Ｖｉｐｅｒａｒｕｓｓｅｌｌｉ）毒第Ⅴ因子激活剂ＲＶＶ－Ｖ进行比较研究。通过酶标偶联免疫反应研究了抗ｓｖ－ＰＡ抗体与各种丝氨酸蛋白酶的免疫交叉反应，并对蛇毒丝氨酸蛋白酶及相应功能的哺乳动物蛋白酶进行了序列比较分析。从底物专一性多样性及已知序列结构分化上对这一类蛇毒丝氨酸蛋白酶的结构与功能进行了探讨和研究。     

有关酶的高效性与专一性实验的探讨

高中生物学新教材 (第 1册 )通过“[实验五 ]比较过氧化氢酶和 Fe3 +的催化效率、[实验六 ]探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的水解作用”这两个实验来探讨酶的高效性和专一性。这两个实验需要的材料用具较多 ,而且都是对照实验 ,要求操作快速而准确。对于高中学生而言 ,有一定难度。根据教学过程中学生存在的一些问题 ,我把实验过程进行归纳和总结 ,以表格的形式反映出来 ,让学生根据表格当中的步骤来操作 ,表格如下 :[实验五 ]比较过氧化氢酶和 Fe3 +的催化效率1试管编号 122滴加 3%过氧化氢溶液 2 m L 2 m L3滴加催化剂 2 0 %新鲜肝脏磨液 2滴 3…     

基因工程抗体的研究进展

基因工程抗体以其独特的优点（免疫原性低、可按人的意愿加以改造等）正逐渐取代动物源性单抗。随着基因工程和蛋白质工程等生物技术在抗体研制领域的广泛应用,适应不同需要的基因工程抗体的种类日趋多样化,构建日趋合理化,在体内的生物学效应与日臻完善,使之较天然单抗的治疗效果更好,范围更广,并在初步临床试用中展示了光辉的前景。     

表面电荷突变与胰蛋白酶底物专一性的改造

分别利用酶切重组和“３＋１”引物ＰＣＲ定点突变的方法构建了三个胰蛋白酶表面电荷双突变体;Ｒ６２Ｄ＋Ｋ９７Ｅ,Ｒ６２Ｄ＋Ｋ１７５Ｅ和Ｋ９７Ｅ＋Ｋ１７５Ｅ。对三在Ｅ．ｃｌｏｉＸ９０菌中的表达产物进行了动力学测定,分别得到了三种双突变体在两种ｐＨ条件下,水解ＴＡＭＥ,ＴＬＭＥ两种底物的动力学数据。     

功能蛋白酶催化及应用进展

蛋白酶广泛存在于动物、植物及微生物体内,在生物体内的代谢和合成过程中发挥着重要作用,也是一种重要的工业酶制剂,其中,微生物蛋白酶几乎占据着全球商业蛋白酶的三分之二。随着生物技术的兴起,蛋白酶在各个领域的应用日益广泛,通过酶工程改造和基因工程菌株构建获得高稳定性的蛋白酶是其工业应用的关键。本文首先对功能蛋白酶的来源进行了分析,进一步对功能蛋白酶的类型、功能及其作用机制进行了阐述;然后综述了部分重要功能蛋白酶的酶工程改造和基因工程菌株构建方法;最后总结了功能蛋白酶的应用领域并提出了未来重要功能蛋白酶的应用方向。