胞内抗体及其研究进展

胞内抗体是指在细胞内表达并被定位于亚细胞区室的一类新的工程抗体。目前胞内抗体的研究主要集中于ScFv,ScFv基因结构简单,易导入细胞内表达且便于体外重组操作。胞内抗体作为一种新的基因治疗工具,在肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗的实验研究及潜在的临床治疗方面展示了广泛的应用前景。同时,胞内抗体可以用作分析靶蛋白功能的研究工具,是对传统的“基因剔除”转基因动物的一种有效补充。现从胞内抗体的设计及载体选择、肿瘤基因治疗、人艾滋病基因治疗等方面对胞内抗体的研究进展进行综述。     

功能性抗HBsAg人—鼠嵌合抗体在昆虫细胞中的高效表达

经同源重组我们构建了同时含抗乙肝病毒表面抗原嵌合抗体重、轻链基因的双重组 ＢａｃＨＬ４．２。利用双重感染和双重组病毒感染秋粘虫Ｓｆ９细胞,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果说明嵌合抗体重、轻链同时在胞内得到了表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表明两种情况均能在胞内组装成Ｈ２Ｌ２完整免疫球蛋白分子。ＥＬＩＳＡ和功能性免疫迷检测证明重组嵌合抗体与父本鼠源单抗ＯＨ３一样能特异性识别具有天然构象的ＨＢｓＡｇ,而不识别经     

结核分枝杆菌Rv0733 6His抗原羊驼单域重链抗体的筛选与鉴定

单域重链抗体是目前中和胞内病原体抗原的重要分子之一,研究以结核分枝杆菌Rv0733-6His融合抗原为靶标,对羊驼非免疫单域重链抗体库进行了3轮淘洗,通过ELISA和测序方法,从1024个克隆中筛选出10个独立单域重链抗体序列,继而用原核表达并鉴定了1株Rv0733-VHH-Fe-6His抗体。免疫印迹和免疫荧光结果均显示Rv0733-VHH—Fe-6His抗体可以特异性地结合Rv0733抗原。提示Rv0733-VHH抗体可能具备结合胞内菌相关抗原的潜力。     

胞内抗体技术及医学应用

胞内抗体技术是近年来随抗体工程技术发展起来的一项新型基因治疗方法．它将单链抗体表达于非淋巴细胞内,并使之定向分布于细胞核、细胞浆或内质网等部位,特异性阻断、干扰分布于该部位的大分子物质生物活性或加工分泌过程．实验证明该技术能抑制生长因子受体的表达,灭活原癌基因蛋白,抑制病毒复制．在生物科学及医学研究中具有很大应用潜力．     

有关检测雌激素、孕激素、雌激素受体和孕激素受体水平的技术性探讨

应用兔抗雌二醇抗体、兔抗孕酮抗体,鼠抗雌激素受体和鼠抗孕激素受体抗体来检测乳腺癌等病例,结果显示,兔抗雌二醇抗体和兔抗孕酮抗体所标记的病例的阳性物主要见于癌细胞胞浆,应用石蜡切片且不经任何方法处理的结果为最好。应用鼠抗雌激素受体抗体和鼠抗孕激素受体抗体和鼠抗孕激素受体抗体的病例,阳性物见于癌细胞的胞核上,但需要用隔水热抗原修复法经较长时间的处理后,方能获得最佳结果。     

抗大肠癌噬菌体单链抗体的筛选及初步鉴定

 应用 3种方法 (肿瘤细胞膜表面和胞内、裸鼠体内和组织切片 ) ,从全人源化的抗大肠癌噬菌体初级抗体库中筛选肿瘤特异性的噬菌体单链抗体 (Sc Fv) .在肿瘤细胞经过 3轮亲和选择 ,回收结合胞膜和内化进入胞内的噬菌体 ,得到抗肿瘤噬菌体单链抗体的富集倍数为 430倍 ;荷瘤裸鼠体内注入初级抗体库后 ,在不同时刻点处死裸鼠 ,回收肿瘤组织内的噬菌体 ,其回收率在 2 4 h时最高 ;初级抗体库与大肠癌组织切片亲和选择后 ,从冰冻组织切片上比从石蜡组织切片上回收得到的噬菌体高出约 1 .6倍 .从上述方法挑选单克隆 ,经 ELISA筛选抗大肠癌阳性噬菌体克隆株 ,分离得到 5个对大肠癌细胞反应较好的单克隆噬菌体单链抗体 .进一步用细胞 ELISA检测对各种肿瘤细胞的特异性反应 ,其中 4个对大肠癌细胞有很好的特异性 ,1个克隆对所有肿瘤细胞均有反应 .因此 ,3种方法用于筛选抗大肠癌噬菌体初级抗体库是有效的 ,具有推广和应用价值 .     

再循环抗体的研究进展

单克隆抗体因其与抗原结合具有高度特异性与强亲和力,已成为抗体药物研发的主要类型。但随着天然单克隆抗体的深入研究,它的诸多缺陷也浮出水面,如与抗原结合次数有限、带来非预期的抗体清除效应和抗原累积效应。人们不再局限于天然抗体的筛选,而是想通过改造提升抗体药物的药效。近年来,一类新型再循环抗体的问世,很好地解决了天然单克隆抗体发展的瓶颈。再循环抗体可以在胞外结合抗原,在细胞内与抗原解离,使抗体结合抗原次数最大化,减少抗原介导的抗体清除效应和抗体介导的抗原累积效应,并且再循环抗体可以通过进一步的Fc改造来加强与Fc受体的亲和力。文中综述了再循环抗体的研究进展,包括其特点、改造方法及展望。     

肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的构建及大肠杆菌中的表达

为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结构能力,在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究,表达产物均以包涵体形式存在;对复性后的单链抗体以细胞ＥＬＩＳＡ及竞争抑制流式细胞仪法进行检测,表明人源化单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是：大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设     

评价抗SSA、抗SSB 和抗a- 胞衬蛋白抗体在诊断干燥 综合征中的价值

目的：评价SSA、SSB 和胞衬蛋白在诊断干燥综合征(SS)中的价值。方法：用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测47 例确诊为SS 患者、20 例其它自身免疫病(类风湿关节炎7 例、SLE6 例、自身免疫性肌炎7 例)和20 例体检健康者血清抗SSA、SSB 和a- 胞衬 蛋白抗体,分析三种自身抗体阳性率。结果：抗SSA抗体、抗SSB 抗体和抗a-胞衬蛋白抗体敏感性分别为76.6%、38.3%、42.6%; 特异性分别为72.5%、95.0%、82.5%;三种抗体联合检测后敏感性为89.4%,特异性50.0%。结论：抗a- 胞衬蛋白抗体与抗SSA、 SSB 抗体联合检测时可提高阳性率,对症状不典型的SS 患者诊断有一定的补充意义。     

抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体抗病毒作用的研究

本文报道在内质网和细胞浆内稳定表达抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体,研究抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体抗病毒作用及其抗病毒作用机理。在获得稳定表达抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体的细胞系的基础上,用MTT法检测细胞内表达抗汉坦病毒单链抗体对细胞增殖的影响,证实细胞内抗体的表达不会影响到细胞的生长。不同时间收集病毒感染毒后细胞培养培养上清和细胞裂解物,用ELISA方法检测细胞内外病毒结构蛋白含量的变化,结果表明定位于细胞内质肉和细胞浆内的抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体均能不同程度降低感染细胞上清中的核蛋白含量,但是不能或轻微抑制细胞内汉坦病毒核蛋白的合成。利用病毒微量滴定免疫荧光方法,对细胞内抗体与病毒的增殖关系进行了研究,证实无论在内质网还是在胞质,抗核蛋白细胞内抗体都能够抑制病毒的增殖,具有抗病毒活性。抗汉坦病毒核蛋白细胞内抗体不能抑制病毒结构蛋白的合成,其抗病毒效果是通过抑制病毒的包装而实现。     

基因工程抗体的类型与研究方法的近况

本文介绍了基因工程抗体的主要类型（包括嵌合抗体、人源化ＣＤＲ移植抗体、亚分子抗体和双特异性抗体）、研究方法和用途;克隆可变区（Ｖ）基因的策略,从正常或免疫Ｂ细胞获得Ｖ区基因和抗体基因库技术;在大肠杆菌中、噬菌体内和哺乳类细胞中高效表达抗体及其片段研究方法的新进展。     

黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体制备及其ELISA检测方法的建立

目的:制备黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体,建立其酶联免疫吸附分析(ELISA)的检测方法.方法:分别以黄瓜细菌性白枯病菌胞内蛋白和菌体为免疫原,制备两再种抗体,优化间接ELISA检测条件.结果:间接ELISA法测定两种纯化的菌体抗体(J4)和胞内蛋白抗体(P2)效价分别为1:32000和1:4000,二抗的最佳稀释度为1:3000,方阵试验表明J4的工作浓度为1:16000,抗原的最佳包被浓度为10<'6>cfu/ml,P2的工作浓度为1:2000,抗原的最佳包被浓度为10<'7>cfu/ml,两种抗体的灵敏度均为10<'5>cfu/ml,与黄瓜细菌性角斑病菌等26个菌株无交叉反应,特异性强.结论:成功制备了黄瓜细菌性白枯病菌特异性抗体,建立了ELISA检测方法.     

肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的表达

为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结合能力,在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究,表达产物均以包涵体形式存在;对复性后的单链抗体以细胞ELISA及竞争抑制流式细胞仪法进行检测,表明人源化单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是：在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDR的天然构象,表达的人源化单链抗体提供了免疫原性评价及临床应用的基础。     

肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的克隆与表达

为探讨肝癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因的表达策略并比较二者的结合能力,在3种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究;对复性后的单链抗体以抗原捕获ELISA法进行检测。结果表明,在3种载体中表达的鼠源及人源化单链抗体都是包含体,诱导物浓度及培养温度不影响表达形式;抗原捕获细胞ELISA表明人源化的单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是:在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDRs的天然构象,表达的人源化单链抗体提供了免疫原性评价及临床应用的基础。     

细胞内抗体研究进展

细胞内抗体研究进展关键词内抗体具有高特异性和高亲和性的免疫球蛋白分子,在生物学领域中,作为体外鉴定、纯化和抗原研究工具,已有很长历史。近来有文章报道,细胞内抗体具有以高度特异的方式干扰生物过程的能力。细胞内抗体较其它基因失活方式更简单有效,做为抗癌和...     

内抗体——一种新的基因功能研究工具

细胞内抗体是指能够在细胞内特定区域特异性中和靶蛋白功能的抗体.内抗体技术是一种翻译后水平上抑制靶蛋白质功能的技术,已经成为一种功能基因组学研究的重要工具.本文综述了细胞内抗体转运和作用机制,分析了细胞内抗体技术和其他靶向敲除技术的优、缺点,以及细胞内抗体技术存在的问题及解决途径.     

抗体重链可变区框架Ⅰ区对抗体分泌的影响

抗体重链可变区框架Ⅰ区(FR-Ⅰ)对抗体在原核细胞中的分泌表达具有显著的影响,单个氨基酸的改变即可导致抗体分子分泌能力的丧失.为了探索抗体在哺乳动物细胞中的高效表达,我们对一株不能有效分泌的人源抗狂犬病病毒抗体pCMV-RV/VH的FR-Ⅰ区氨基酸编码基因进行定点突变研究.实验显示,抗体重链可变区FR-Ⅰ区H6位的氨基酸由Glu突变为Gin之后,抗体的分泌表达水平得到了显著的提高,并且与抗原特异性结合的能力也明显增强.通过免疫荧光法对抗体在细胞内的转运过程进行了初步的探讨,发现能够有效分泌的抗体与无分泌表达的抗体都能够在细胞内进行正常的转录和翻译,进入内质网并转运至高尔基体,而且胞内表达水平基本一致.我们认为分泌能力的不同可能是FR-Ⅰ区影响抗体分子的折叠与装配所致,其中该区H6位氨基酸的性质能够显著影响抗体在哺乳动物细胞中的分泌.本研究以抗体重链可变区FR-Ⅰ区氨基酸为焦点,对基因工程抗体在真核细胞中高效表达的影响因素进行了探索,为改进抗体规模化生产提供了依据.     

抗体形成细胞发育的免疫电镜研究

用包埋前免疫电镜技术,研究以辣根过氧化物酶二次免疫后2、3、5、8和10天豚鼠腘淋巴结中抗体形成细胞的发育和分化。按照细胞的不同发育阶段和抗体阳性反应特征,可将它们分为四类细胞:(1)Ⅰ类细胞(淋巴细胞),核位于细胞中央,胞质很少,核周腔呈阳性反应,细胞质中有大量均匀分布的阳性颗粒;(2)Ⅱ类细胞(前浆细胞),核质比减低,有的核偏位,胞质中出现大量颗粒状短或棒状阳性反应物,其中有一些呈平行排列;(3)Ⅲ类细胞(前浆细胞),胞质中显示大量平行排列的阳性反应物;(4)Ⅳ类细胞(浆细胞),胞质中平行排列的阳性反应物连结成网状。根据细胞的形态以及胞质中阳性反应物从颗粒状、短棒状到平行排列的片层和连结成网状的变化,显示出从淋巴细胞经前浆细胞发育为成熟浆细胞,不断合成并累积抗体的动态过程。     

铜绿假单胞菌感染的非抗生素治疗研究进展

铜绿假单胞菌是引起多种人体感染的常见致病菌,目前主要采用抗生素治疗铜绿假单胞菌感染.由于铜绿假单胞菌能对多种抗生素产生抗性,导致传统的抗生素治疗面临非常大的挑战.因而铜绿假单胞菌感染的非抗生素治疗方法受到了广泛重视,并取得了可喜的研究进展.本文从抗原抗体免疫疗法、噬菌体疗法、抗毒力因子疗法三个方面就铜绿假单胞菌的非抗生...     

嗜麦芽假单胞菌hCG结合蛋白抗体制备及其特性研究

用纯化的嗜麦芽假单胞菌ｈＣＧ结合蛋白制备多克隆抗体,间接免疫沉淀实验证明,该抗体能识别细菌ｈＣＧ结合蛋白ｈＣＧ复合物;配体印迹分析及免疫印迹分析发现,该蛋白能与ｈＣＧ发生特异的结合,其结合位置与抗体识别一致,为７０ｋＤ蛋白带;同时,该抗体不能特异地抑制细菌ｈＣＧ结合蛋白、大鼠睾丸或卵巢组织细胞膜制剂与ｈＣＧ结合。