毒品快速定量测试方法的探讨

阐述了毒品金免疫层析试条的定量测试机理,推导出浓度值与吸光度之间的测试模型,并对主要干扰因素及消除方法进行分析。最后验证了毒品快速定量测试方法的可行性。     

蚊净香草快速繁殖研究

以蚊净香草嫩叶和叶柄为外植体进行培养,筛选合适的外植体与诱导、增殖和生根的最佳培养基。结果表明,叶片外植体在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L培养基最适于诱导愈伤组织和不定芽;MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L培养基有利于不定芽增殖;无根苗在含有低浓度无机盐和生长素水平的生根培养基上易生根,生根率高达100%。     

叶绿素的快速提取与精密测定

Arnon法是叶绿素提取和测定最经典、最常用的方法, 此法虽经多次改进, 但仍存在着检测波长误差大、计算公式有误、提取速度慢、测定结果不够准确以及操作步骤繁琐等缺陷。该文提出了二甲基亚砜(DMSO)高温提取、80%丙酮稀释的两步快速浸提法, 使叶绿素提取和测定过程缩短至3小时以内。通过对提取温度、提取时间、稀释比例及吸收光谱等进行系统分析, 筛选出了叶绿素的最佳提取条件和叶绿素含量的准确计算公式, 并用多种类型的植物材料验证了改进后的提取方法, 证明该方法具优越性和可靠性。具体测定方法是将植物材料切成1 mm宽的细丝或细段, 取50-100 mg材料于10 mL具塞试管中; 加入2 mL DMSO, 使植物材料浸没其中, 65°C高温避光提取至植物材料变白或透明; 冷却后加入8 mL 80%丙酮, 混匀, 测定663.6和646.6 nm处的吸光度。用公式计算叶绿素浓度: C_a (mg∙L^-1)=12.27A_663.6-2.52A_646.6; C_b (mg∙L^-1)=20.10A_646.6-4.92A_663.6; C_T (mg∙L^-1)=C_a+C_b=7.35A_663.6+17.58A_646.6。     

一种快速提取组织外泌体的分离富集方法

本文提供一种快速提取组织外泌体的分离富集方法。通过将目标组织用机械法切碎,加入组织消化酶进行组织解离和过滤,将获得的组织细胞悬液依次进行差速离心、超离、尺寸排阻和超滤,实现组织高质量外泌体的富集纯化。组织解离方法比较试验中,采用组织消化酶解离组织得到的蛋白质含量更高,获得的外泌体组织来源的蛋白质污染小。富集小鼠心组织、小鼠肝组织、小鼠肾组织、人结肠癌组织、人乳腺癌组织和动脉粥样硬化组织的外泌体,并对其进行纳米粒径追踪和透射电镜观察。结果显示,外泌体的粒径均在30~150 nm内,结构清晰明确。对小鼠肝组织富集的外泌体进行蛋白质印迹分析。结果显示,阳性蛋白质标志物CD9、ALIX和CD63的表达,TSG101弱表达,阴性蛋白质标志物Calnexin无表达。本方法集合多种分离措施,能够达到分离纯化外泌体的作用,同时简化了分离组织外泌体的步骤,相对于其他方法,全程只需要4~5 h,节省了富集时间,所富集的外泌体纯度高、可溶性杂蛋白质污染小,实用性更加广泛。使用微量组织样本富集的外泌体即可满足后续纳米粒径追踪、蛋白质印迹、透射电镜和转录物组等分析。     

斯氏按蚊总RNA的提取与标本保存方法的研究

本研究利用Tripure试剂盒,成功地提取了斯氏按蚊总RNA,并对不同方法保存的标本所提RNA的质量进行了比较,结果显示新鲜标本所提RNA质量最高,将标本在Tripure提取液中匀浆后置于4℃保存的方法,较其它两种方法保存效果更好,此方法保存的标本5天内进行RNA提取,能够保证质量。     

大肠杆菌质粒的快速提取

质粒的提取是生物学中的常规技术之一 ,但常规法提取质粒十分复杂 ,繁琐并且费时。国外公司的试剂盒大大简化了此过程。但价格使国内大多数实验室难以承受。我们利用自制的玻璃粉提取质粒 ,大大简化了提取过程 ,同时相对于进口试剂盒而言 ,实验成本也大大降低     

红掌的离体组织培养与快速繁殖

本研究从红掌组培的实用化生产出发,在不同激素成份及浓度水平下,以MS为基本培养基,红掌的叶片或叶柄为外植体进行组培快繁试验。实验结果表明:MS+6-BA1mg/L+2.4-D0.1mg/L为最佳诱导培养基,诱导率可达89%以上,红掌的叶片诱导效果比叶柄较为理想。最适分化培养基为:MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L,其分化率为93%;继代增殖培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L,增殖系数达7.1;适合生根诱导培养基为l/2MS+NAA0.2mg/L,生根率达96.5%以上。生根苗田间移栽后成活率可达95%以上。     

冬青的离体培养与快速繁殖

1植物名称冬青(IlexchinensisSims),别名四季冬青。2材料类别顶芽和带腋芽的茎段。3培养条件芽诱导培养基:(1)MS+6-BA1.0mg·L-1(单位下同)+NAA0.05;增殖培养基:(2)MS+6-BA0.5+NAA0.05;生根培养基:(3)1/2MS(MS大量元素减半)+NAA0.4。以上培养基均添加0.6%琼脂粉,蔗糖除生根培养基为25g·L-1外,其余均为30g·L-1,pH5.8。培养温度(25±2)℃,光强约为40μmol·m-2·s-1,光照时间为12h·d-1。4生长与分化情况4.1芽的诱导10月上旬,剪取冬青生长健壮的枝条,流水冲洗30min。置于超净工作台上,用75%的乙醇处理30s,无菌水冲洗2～3次,再用0…     

巴拉巴按蚊人工交配中雄蚊蚊龄与受精率的关系

自McDaniel和Horsfall(1957)介绍了伊蚊的人工交配法后,许多原来在实验室内不易自然交配,因而无法繁殖的蚊种,已可在室内大量繁殖以供实验研究之用。1966年Esah和Scanlon用人工交配法,在室内饲养巴拉巴按蚊获得成功。国内四川医学院及成都生物制品研究所亦于1976年在室内同时建立了海南白沙巴拉巴按蚊品系。由于工作的需要,我们通过人工交配对该蚊种进行了饲养繁殖。但在多次人工交配中,雌蚊受精率常不一致,有时只有30％左右,有时则可高达80％以上。这种受精率的不稳定是否与雄蚊蚊龄有相应关系?为此,我们用羽化后12天以内不同日龄的雄蚊,分别进行了人工交配,以观察雄蚊日龄与其对雌蚊授精率之间,有无必然的相应关系。     

木薯离体培养与快速繁殖

选取3个木薯品种的腋芽作为外植体,分别接种于MS基本培养基上进行离体培养及快速繁殖。结果表明, 6-BA不同浓度对木薯品种不定芽诱导效果不一,在MS+6-BA 0.5~1.0mg/L中,3个品种均可诱导产生幼芽;在MS+6-BA 3.0mg/L中,3个品种的幼芽诱导率高达100%;MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1mg/L对继代效果较好;MS+NAA 0.1mg/L对生根效果最佳。     

独脚金离体培养与快速繁殖

采用茎段作为外植体,建立独脚金Striga asiatica的组织培养快速繁殖方法。结果显示,0.1%升汞溶液处理7~9 min是较有效的消毒方法;诱导不定芽增殖培养基适宜配方为MS+6-BA 3.0 mg·L~(-1)+IBA 0.1mg·L~(-1);生根培养基配方为MS+NAA 0.1 mg·L~(-1)+IBA 0.5 mg·L~(-1),培育周期为3个月。     

单个原生质体融合系中变异体的不断形成

亲缘品种间原生质体的融合可产生有用的体细胞杂种植株。然而,远缘品种间原生质体的融合常常导致遗传不亲和性,这可能引起亲本之一染色体的快速消失。日本京都大学和京都医科大学的T.Endo等人发现,单个族间融合产物产生的愈伤组织系可能是连续遗传不稳定性的一个来源。他们分离出了由Duboisia hopwoodii细胞悬浮培养原生质体与烟草叶肉原生质体之间融合产生的单个杂种细胞。从融合产物长出了愈伤组织,从这些愈伤组织产生了10个     

蚊净香草的离体培养和植株再生

1 植物名称蚊净香草(Pelargonium odoratissmum). 　　2 材料类别一年生幼苗的叶片. 　　3 培养条件诱导芽培养基:(1)MS 6-BA 0.3～0.6 mg*L-1(单位下同) NAA 0.3～0.6; (2)MS 6-BA 0.2 NAA 0.2; (3)MS 6-BA 0.5 NAA 0.2.芽增殖培养基:(4)1/2MS 6-BA 0.3～0.6 NAA 0.3～0.6.生根培养基:(5)1/2MS; (6)1/2MS NAA 0.5; (7)1/4MS; (8)1/4MS AC 0.5%.以上培养基琼脂含量皆为0.75%,芽诱导培养基中蔗糖均为2.5%,生根培养基中蔗糖均为2.0%, pH 5.0～5.8.培养时温度为(25 2)℃,光照12～14 h*d-1,光照度2 000 lx.……     

花生总DNA的快速提取与纯化研究

优化了花生总DNA的提取条件。用3.50ml细胞提取液,2.50ml饱和KCl溶液,0．25倍样液体积的酚／氯仿／异戊醇(21：28：1)溶液,0.30倍样液体积的氯仿／异戊醇溶液,0.60倍体积的异丙醇,可从1．0g花生芽中提得4．0mg纯DNA。用该法提取总DNA的产率高,时间短,DNA的纯度高。     

棉叶中棉酚的快速提取与测定方法研究

棉酚(G)及其相关物甲氧基半棉酚(DHG)、半棉酚酮(HGQ)、半棉酚(HG)、杀实夜蛾素(H1-4)等是棉花中重要的抗虫性萜烯类次生物质.利用高效液相色谱法(HPLC)对棉酚及其相关物进行了分离,测定了棉叶中的棉酚含量,讨论了不同的提取方法和测定条件对结果的影响,给出了一套简便、快速的分析测试方法,同时与紫外-可见分光光度法(苯胺法)的结果进行了对比,认为对于棉花的抗虫性的研究来说,HPLC是比较适宜的方法.     

小麦总RNA的快速提取

Rneasy Kits用于从小量小麦中分离总RNA。它为同时和多次制备各种生物样品提供了一种快捷而简便的方法-整个过程可以在30分钟内完成。而且Rneasy方法中不再涉及使用有毒物质,如酚类、氯仿等。通过此方法纯化的RNA可用于各种标准的下游技术,如RT-PCR、polyA^ RNA选择、差异显示技术、Northern点杂交和狭线杂交、引物延伸、cDNA合成、陈列表达分析和表达芯片分析等。使用这个盒子,我们多次成功的进行了小麦总RNA的分离,其中的三次在本文中进行了分析。OD260nm/OD280nm介于1.7-2.0之间,OD260nm/OD230nm大于2.0.说明RNA纯度很高,未被蛋白质、苯酚等物质污染。     

脂肪组织总RNA的快速提取

脂肪组织具有贮存能量、隔热保温和产生释放激素等多种生物学功能[1]。人和动物的脂肪组织有黄色和白色两种。后者与脂肪酸、葡萄糖等代谢密切相关。成熟的白色脂肪细胞特异地转录出与肥胖相关的基因──肥胖基因（obesegene）的mRNA[2.3.4],其翻译产物苗条素（leptin）在调节肥胖及其相关疾病如糖尿病、高血压、高血脂等方面起到重要作用[5,6]。由于脂肪组织细胞组成复杂,脂肪细胞中充满大量脂滴使得细胞核被挤向贴近胞膜[4],从中提取核酸有一定困难。为研究中国人的肥胖基因,本文在参考前人工作经验的基础上改进建立了适合脂肪组织…