两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较

目的比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能。方法用Trizol提取法和QIAamp Vira lRNA Min iKit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒（Murine Norovirus,MNV）的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对分离的核酸样品进行一步法RT—PCR扩增。结果Trizol提取法提取小肠组织的RNA浓度高于QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法;QIAamp Viral RNA Mini Kit提取得到的细胞培养物RNA浓度高于Trizol提取法。经QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的两种核酸样品均能扩增出特异条带,而Trizol提取的核酸样品未见特异条带。结论在MNV的检测中,QIAampViralRNAKit更适合组织样品中MNV病毒核酸的提取。     

小量快速RNA,DNA提取研究耐药株中GSTπ及癌基因的表达

本文采用一种小量快速RNA制备法(硫氰酸胍-酚,氯仿/耳戊醇-液氮)和DNA-RNA联合提取法(硫氰酸胍-酚,氯仿/异戊醇-液氮法),提取RNA和同一样本中DNA与RNA,同时采用一种快速液相杂交法,通过标记探针与样品DNA或RNA经变性-复性杂交、凝胶电泳、凝胶抽干、放射自显影。经用本法研究P388/ADR耐药株中的GSTπ及三种癌基因表达表明:耐药株中的GSTπ较敏感株增加1.56倍(p<0.05),而c-myc、v-erb-B、N-ras癌基因的扩增分别减少1.33,1.38和1.69倍(P<0.05)。     

细菌DNA的一种大量提取方法

本文介绍了一种大量提取细菌DNA的方法。该法是用60℃裂解菌体,以氯仿-苯酚去除蛋白,用Rnase去除RNA,用1倍体积95%乙醇沉淀DNA,省略了异丙醇沉淀步骤。而且该方法操作方便,对仪器要求不高。该法改进结果是:可稳定地得到50—60%的DNA回收率。可用于革兰氏阴性和阳性细菌的DNA提取。有些菌株用Marmur法和Zaslott法提取,DNA回收率在10%以下,采用本法仍能得到50%的回收率。每次提取的DNA量在毫克数量级。特别适合用于Tm法测定DNA G+C mol%含量所需DNA样品的制备。     

琯溪蜜柚汁胞RNA提取方法的比较

比较了3种从琯溪蜜柚汁胞中提取RNA的方法,通过琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计检测,对提取所得RNA的完整性、纯度及浓度进行分析。试验结果表明,Trizol法适合琯溪蜜柚汁胞RNA的提取,能有效获得纯度高、完整性好的RNA样品,而且Trizol法步骤简单,RNA得率与质量均较高。通过RT-PCR检验表明该RNA适于后续分子生物学操作。     

文心兰RNA不同提取方法比较

目的:为了得到高效的文心兰RNA提取方法和高质量的RNA,为后续文心兰分子生物学研究奠定基础.方法:选取文心兰“黄金2号”(Oncidium Gower Ramsey‘Gold2’)叶片和根组织为材料,对SDS-LiCl法、改良CTAB-NaAC法和改良CTAB-LiCl法和总RNA提取效果进行了比较研究.结果:改良CTAB-LiCl法得到的RNA样品纯度较高,完整性好,经电泳检测条带清晰无明显降解,28S条带的亮度是18S条带亮度的2倍,从叶片和气生根组织中提取RNA的OD260/OD280比值分别为1.797和1.787,提取率分别为33.07μg/g、29.07μg/g.以此RNA为模板进行RT-PCR反应,能获得特异条带.结论:改良CTAB-LiCl法是一种高效的文心兰RNA提取方法,所得样品RNA适合进一步的分子生物学研究.     

一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法

在总核酸提取方法(PS法)的基础上,经多次实践改进,得出一种以高盐低pH的HAc-NaAc缓冲体系提取总核酸的简便方法,可以从富含多糖、多酚时猕猴桃叶片和花蕾中提取同时含有DNA和RNA的总核酸.所得的总核酸在LiCl溶液中选择性沉淀RNA,从而有效地分离出DNA和RNA样品.紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳分析表明,所提取的DNA和RNA具有较高的纯度和完整性.通过样品DNA的PCR和样品RNA的RT-PCR,认为所提取的DNA样品和RNA样品能够满足分子生物学试验的基本要求.     

Trizol RNA提取法在雪貂组织的流感病毒H3N2定量PCR检测中优于RNeasy mini kit（Qiagen）柱子法

目的比较RNeasy mini kit（Qiagen）柱子法和Trizol法提取RNA在雪貂肺和肠组织H3N2 SYBRGreen PCR定量中的去干扰作用,从而找到适合该定量体系的RNA提取方法。方法比较Trizol法,RNeasy minikit柱子法,改良RNeasy mini kit柱子法1和改良RNeasy mini kit柱子法2提取肺肠组织RNA的质量,RNA逆转录成cDNA后,利用SYBR Green PCR方法检测样品中H3N2的载量,比较产物的特异性,综合评价RNA提取方法。结果 4种方法提取的肺和肠组织的RNA质量不相同,紫外分光光度仪测得RNeasy mini kit柱子法提取的RNA的A260/280低于1.8,其余3种方法的A 260/280在1.8～2.1之间,A 260/230只有Trizol法能达到2.0左右,其余3种方法均远低于2.0。电泳可见Trizol法提取的RNA有3条带：28 s、18 s和5 s,而RNeasy mini kit柱子法的RNA除了有28 s、18 s外,还有基因组DNA,改良RNeasy mini kit柱子法1和2提取的RNA只有28 s和18 s带。RNA逆转录后进行荧光定量PCR,从溶解曲线看,不论是鼻甲刮取物还是肺肠组织的样品模板,4种方法获得的样品与标准品均为单一峰溶解曲线峰,并且波峰位置重叠。而鼻甲刮取物定量的产物跑琼脂糖凝胶电泳均为单一的特异性条带,而肺肠组织的产物电泳发现：Trizol法获得的模板定量产物与标准品一致,为单一的特异性条带,而其它3种方法获得的模板则均有非特异性条带。结论鼻甲刮取物的病毒定量选用RNeasy mini kit柱子法提取定量结果与Trizol法一样可靠,说明对于简单样品该体系及引物非常适用,结果可信。对于组织样品肺和肠,Trizol法获得的样品定量结果比其它3种方法可靠。     

一种从PAXgene全血RNA管内提取基因组DNA的方法

目的:从同一生物样本同步提取RNA和DNA,能提高样本的利用率,而且对于基因组学、转录组学和表观遗传学检测数据之间的比对和匹配分析也十分重要。本研究在不影响RNA样品制备的前提下,建立一种从PAXgene全血RNA管内提取基因组DNA的方法。方法:取一定量PAXgene全血RNA管血液样本,使用QIAamp DNA试剂盒提取血细胞基因组DNA,系统优化提取过程中的离心参数、洗脱量以及初始血液样本量等实验参数,并对提取的基因组DNA质量进行检测。结果:用PAXgene全血RNA管3 mL血液样本能够提取出8.918±1.100μg基因组DNA,紫外分光光度计检测DNA样品的OD 260/280比值为1.89±0.09,琼脂糖凝胶电泳结果显示DNA样品完整无降解。结论:利用本方法提取的DNA样品能够满足下游DNA芯片、DNA甲基化测序等实验要求。该方法有助于从有限的临床血液样本中获取全面的遗传信息,并且提高后续不同实验方法所生成数据之间的可比性和匹配度。     

提取山羊免疫组织总RNA两种方法的比较研究

采用山羊不同免疫组织作为原料,以氯化钠-柠檬酸钠法与苯酚-稀盐法进行RNA提取的比较;分别确定两种方法对于不同免疫组织(肝脏、脾脏和淋巴)最大提取率分别为0.156%、0.150%、0.182%和0.142%、0.127%、0.164%。采用华特生公司蛋白质浓度检验试剂盒BCA法测定蛋白含量。定磷法测DNA含量,地衣酚显色法测RNA含量,样品用紫外分光光度计进行扫描,苯酚-稀盐法提取淋巴组织,RNA紫外吸收OD260:OD280=2.042077;氯化钠-柠檬酸钠法提取淋巴组织RNA紫外吸收OD260:OD280=2.1098。     

何首乌总RNA提取方法的比较及改进

目的：探讨不同提取方法对提取何首乌总RNA的质量影响,寻找适于何首乌成熟叶组织RNA的提取方法。方法：以何首乌成熟叶组织为材料,采用SDS／酸酚法、常规CTAB法及改良的TRIzol试剂法分别进行实验,并对所提取RNA的质量进行验证。结果：采用3种方法都能提取出RNA,但质量差异较大。其中改良的TRIzol试剂法能有效抑制次生物质的影响,提取的RNA产量可达70-110μg／g,纯度高于其他2种方法,D260nm／D280nm值为1．85～1．97。结论：改良的TRIzol试剂法操作简便,提取的RNA完整性和纯度较高,可以满足下一步实验的要求。     

猕猴桃RNA提取与RT-PCR

为了从富含多糖和多酚等物质的猕猴桃幼叶中提取和分离出高质量的RNA,用多个不同品种的猕猴桃叶为材料,比较了3种不同的RNA提取方法所提取的总RNA。结果表明,用胍-酚酸-DEPC法提取的RNA质量最好,提取率达到682.9~780.8μg?g(FW),其R值(A260?A280)接近1.90。用所提取的RNA样品进行RT-PCR,其扩增产物在琼脂糖凝胶上出现明显清晰的扩增cDNA带,说明RNA样品在纯度和浓度上都可以满足PCR等分子生物学实验的基本要求。     

一种大量提取红豆杉中总RNA的方法研究

旨在确定高质量红豆杉中总RNA的提取和纯化工艺条件。以湖南长沙红豆杉叶为材料,以Trizol和CATB两种植物RNA通用提取方法为基础,以RNA的浓度、OD_(260)/OD_(280)及OD_(260)/OD_(230)的比值为标准,考察提取方法、提取试剂、提取时间等因素对RNA提取率的影响,优化了红豆杉叶中总RNA的提取方法;通过对比PVP法、β-巯基乙醇法、高盐沉淀法、低浓度乙醇沉淀法、凝胶柱层析法五种不同纯化方法来探讨对红豆杉RNA的影响。考虑到成本的问题,选择使用Trizol法提取红豆杉总RNA,确定了较优的提取条件:红豆杉叶与Trizol提取液的作用体积确定为3∶40;裂解时间确定为5 min;氯仿与水液的作用体积确定为1∶5。实验表明凝胶柱层析法能显著的提高红豆杉总RNA的纯度并能得到富含mi RNA的小分子RNA。最终可得到浓度约为1 000μg/m L,OD_(260/)OD_(280)在2.00-2.20之间及OD_(260/)OD_(230)大于1.7的高质量RNA样品。与现有的提取方法相比,本方法提取的红豆杉总RNA具有很高的质量和纯度,且大大降低了提取成本,并首次实现了植物总RNA的大量提取。     

一种简便的从石蜡包埋组织中提取RNA的方法

目的:建立一种从石蜡包埋组织提取高质量RNA的简便、经济的方法。方法:运用TRIzol法和改进的AGPC(酸-异硫氰酸胍-苯酚-氯仿)法等2种提取方法,从50例石蜡包埋组织中提取RNA,用紫外分光光度仪测定RNA的产率和纯度;用管家基因β-肌动蛋白做RT-PCR,检测RNA的质量。结果:TRIzol法提取RNA的成功率为96%(48/50),AGPC法为94%(47/50),2种方法所得RNA的吸光度值及得率在统计学上均无明显差异。结论:AGPC法和TRIzol法的提取效率相似,且提取费用只有TRIzol法的一半左右,是一种简便、经济、适合大量提取石蜡包埋组织中的RNA的方法,可用于临床。     

槟榔黄化病组织RNA提取方法的比较

为了从发生黄化病的槟榔茎、叶、花中提取到完整的RNA,采用了CTAB法、Trizol法和异硫氰酸胍法提取槟榔黄化病组织RNA。从RNA的完整性、产率和纯度方面对这几种方法进行了比较,结果表明,异硫氰酸胍法所得RNA完整性较好,条带清晰无明显降解,OD260/OD280介于1.8-2.0之间,RNA得率较高,为120μg/g以上,并能成功进行反转录制备cDNA,表明该RNA可以进行后续分子生物学操作。     

石斛总RNA提取方法的研究

采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

一种适用于RT-PCR的杉树类植物中总RNA提取的方法

杉树类植物含大量的多糖、多酚类物质,这使得此植物的总RNA提取较困难。研究通过比较几种有代表性的提取植物总RNA的方法,建立了一种酸酚法和PEG8000沉淀法相结合的改良的CTAB法。此方法操作简单,使用的试剂均为常规试剂,成本低,能够有效去除植物组织中多糖和多酚类等次生物质,从而得到高质量的RNA。使用这种改良的方法制备的总RNA产物对P450基因成功地进行了反转录聚合酶链式反应(reverse transeriptase-polymerase chain reaction,RT—PCR),证明此方法是一种适用于RT—PCR的杉树类植物组织中总RNA提取的方法。     

从荞麦中提取总RNA的有效方法

介绍了一种简单快速的从荞麦中提取总RNA的方法。经SDS、KAc和异丙醇等常规试剂提取高纯度的荞麦RNA,对产物进行琼脂糖凝胶电泳分析表明,其28S RNA与18S RNA的比值约为2：1,紫外吸收值A260/A290为1.91-2.06,产率为69.2-87.5μg RNA/g植物材料。用该法提取的总RNA可满足RT-PCR和cDNA文库构建等的需要,是一种高效的荞麦RNA提取法。     

烟草碱法提取基因组DNA的改进

为能够快速高效的对大量转基因烟草样品进行DNA提取,对碱法提取烟草组织DNA的方法进行了改进。采用0.01mol/L的Na OH溶液为提取液,破碎转基因烟草叶片组织后无需经过加热煮沸中和等步骤,上清液可直接用作PCR反应的模板。结果表明,0.01-0.1 mol/L之间的Na OH溶液制备的DNA模板均能成功扩增,该方法制备的DNA模板不依赖特殊的反应条件,多种品牌的PCR Mix均能成功进行扩增反应。与传统SDS提取法和试剂盒提取法获得的DNA相比,PCR结果没有明显差异。此提取方法在小麦、高粱、水稻、玉米等作物上也取得了很好的实验效果。通过本方法制备的DNA模板,其PCR扩增的产物可直接用来测序分析。该方法使用仪器少,样品消耗少,快速、简便、成本低,没有交叉污染,能够在短时间内处理大量样品,因此能够对大量的转基因烟草样品进行DNA的快速提取和鉴定。     

一种简单有效的植物RNA提取方法

在提取缓冲液中加入皂土有效地去除了蛋白质并抑制RNAse,建立了一种高效的植物RNA提取方法。以麻疯树幼叶为材料,分别用TRIZOL,异硫氰酸胍法,SDS-KAc法和新创皂土法提取总RNA进行比较和验证,琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱分析结果表明,只有皂土法能提出质量高,完整性好的RNA。进一步以皂土法提取的18S rRNA为模板的RT－PCR结果分析表明, 用该法提取的RNA 能用于分子克隆与基因表达分析等后继分子生物学实验。该方法简便,快速,不失为一种经济高效的RNA提取方法。     

草坪草总RNA几种提取方法的比较

分别采用DEPC水法、TRIzol法、CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法以及异硫氰酸胍法等6种方法提取草坪草总RNA,通过检测对各种方法的提取效果进行比较分析。结果表明,DEPC水法是最经济、操作最简单的一种方法,并且提取的RNA质量较好、可靠性高、易于大量制备,是提取草坪草RNA比较理想的方法之一,建议使用该方法。利用TRIzol法提取到的28S rRNA亮度约为18S rRNA的两倍,效果较好,操作简单,符合分子生物学实验要求。CTAB-LiCl沉淀法、SDS-酚法、SDS提取液抽提法也获得较高质量的RNA,但存在不同程度的DNA污染。异硫氰酸胍法提取RNA有明显的蛋白质污染,且RNA部分降解,此种方法不予采用。