应用2,4,6-三硝基苯-1-磺酸(TNBS)法测定玉米种子中的有效赖氨酸

本文报道一个经过改进的测定玉米种子中赖氨酸的方法。改进的方法是经济、准确和快速的,已经用来测定大量玉米谷物中的有效赖氨酸。从在水冷式研磨机中磨成粉的样品中抽提得到的蛋白质足以代表总体蛋白质。样品中蛋白质多于15%时,氢氧化钠-乙醇抽提液体积需加倍。玉米样品含油15-30%时,用20毫升丙酮抽提脂肪,含油量少于15%时,用15毫升丙酮抽提。对改进的2,4,6,-三硝基苯-1-磺酸(TNBS)法二段取样的变化是很小的。氨基酸分析仪和TNBS法测定90个opaque-2样品的赖氨酸值之间的相关系数是高的(γ=0.806)。TNBS法的差变系数是6.5%,微生物学法(MBA)是12.6%,这表明MBA法比TNBS法在测定时差异大。     

适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法

目的:建立适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法。方法:采用酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法、三氯乙酸-丙酮沉淀法和硫酸铵沉淀等3种方法制备水稻悬浮细胞外分泌蛋白,并进行双向电泳分析;利用Western印迹对候选方法提取的外分泌蛋白进行纯度检测。另外,还利用质谱技术对从双向电泳胶上随机挑选的9个蛋白点进行测定,并用SignalP 3.0 Server对测定的蛋白点进行信号肽预测。结果:酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法提取的外分泌蛋白得率最高,且双向电泳图谱清晰,并能检测到最多的蛋白点;Western印迹表明利用该法所提取的外分泌蛋白未被细胞内蛋白质污染。利用质谱技术鉴定了随机挑选的9个蛋白点,SignalP 3.0 Server分析表明其中6个蛋白含有信号肽。结论:酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法是一种适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法。     

用氯仿-甲醇抽提法测定鱼体脂肪含量的研究

脂肪含量的测定,是鱼类能量学及营养学的重要环节1。目前最常用的测定方法,是用氯仿一甲醇(2:1)混合液(下面简称C-M液)抽提1。这一方法的基本步骤见图1。不同研究者采用的具体步骤有所差异。如崔奕波1引用的方法系将样品用C-M液匀浆后直接离心,而Hopkins等2对样品不匀浆,仅用C-M液浸泡半小时后离心。这一方法最初是用于医学检验;在生态学研究中。常需要测定大量样品,故方法的简化尤为重要。本研究的目的是探讨不同抽提步骤对测定结果的影响,以期对原方法进行简化;同时将C-M抽提法与我国常用的索氏乙醚抽提法进行比较。       

LIGHT及IFN-γ对MIN6细胞凋亡和Bax表达的影响

目的研究细胞因子LIGHT及IFN-γ对小鼠胰岛素瘤细胞株MIN6细胞凋亡及促凋亡基因Bax蛋白表达的影响。方法体外培养MIN6细胞,将细胞分为4组:(1)未处理组(细胞对照组);(2)LIGHT组;(3)IFN-γ组;(4)LIGHT+IFN-γ组,用LIGHT与IFN-γ分别单独或联合刺激MIN6细胞24 h。采用MTT法检测细胞存活率,激光共聚焦显微镜观察MIN6细胞核形态,流式细胞仪测定细胞凋亡率。利用Western blot分析基因Bax蛋白表达变化,将Bax(siRNA)转染入MIN6细胞,用LIGHT和IFN-γ刺激24 h,Western blot检测Bax蛋白表达,MTT法检测细胞存活率变化。结果 LIGHT或IFN-γ单独刺激仅能引起MIN6细胞存活率轻微下降,但LIGHT与IFN-γ联合刺激能显著降低细胞存活率(P0.05),细胞核可见凋亡小体,细胞凋亡率(28.80%)明显高于LIGHT或IFN-γ组(4.42%和6.70%),且Bax蛋白含量增加。Bax siRNA降低了MIN6细胞Bax基因的表达,Bax siRNA+LIGHT+IFN-γ组的细胞存活率显著高于LIGHT+IFN-γ组和阴性对照siRNA+LIGHT+IFN-γ组(P0.05)。结论 LIGHT与IFN-γ联合刺激能促进MIN6细胞凋亡,且与促凋亡基因Bax表达上调有关。     

光学方法同步记录成群前庭神经节细胞膜电位

目的 :采用电压敏感染料和多位点光学成像系统研究前庭神经节细胞 (vestibularganglioncells ,VGCs)电生理特性。方法 :自新生小鼠内耳分离并培养的VGCs ,用吸光性电压敏感染料RH15 5染色后 ,多个或成群VGCs被同时成像于 16× 16记录单元Photodiodearrays (PDA)光学成像系统。 结果 :用高钾溶液灌流刺激时发现当VGCs膜电位变化时 ,膜表面的光吸收增强 ,光吸收度为 0 .2 3%± 0 .0 8%。并且所记录的光学反应具有波长特性。另外 ,在本实验条件下 ,光损伤和染料的药毒性副作用不明显或者可忽略不计。结论 :光学记录可以同步观测多个和成群VGCs膜电位变化 ,是电生理研究的新方法     

蛴螬乳状杆菌的芽孢染色法

<正> 乳状杆菌是地下害虫蛴螬的主要病源菌,种类较多,形态各异。在实验中要经过染色后,用显微镜观察。目前一般常用的染色法不够理想,经作者反复试验,以吉姆萨(Giemsa)的染色法为好。可以使芽孢着色,并与伴孢体分开。具体方法为:吉姆萨染料(粉末)1克,甲醇、纯甘油各66毫升。将染料溶于甘油,加热至50—60℃,每隔1小时摇荡一次,约摇7—8次,再加甲醇混和均匀,静置一夜便可使用。将待观察     

软脂酸对胰岛β细胞凋亡及Akt途径的影响

目的：探讨软脂酸（PA）对胰岛β细胞（MIN6细胞）凋亡及Akt信号途径的影响。方法：细胞采用小鼠胰岛素瘤细胞株MIN6,不同浓度PA（0-1．6mmol／L）干预24、48h,MTT、法测定各组细胞存活率。干预48h后Hoechst-PI染色法和Annexin—V／PI双标流式测定法测定各组细胞凋亡率,Western-blot法测定p-Akt、Akt、Bax、Bcl-2。结果：随着PA浓度的增高①MIN6细胞存活率逐渐减小、凋亡率逐渐增大;②MIN6细胞中p-Akt和Bcl-2的表达逐渐减少,而Akt、Bax无明显改变。结论：长时间PA作用引起MIN6细胞凋亡,并呈现一定的量效关系;这一效应可能是通过Akt／Bcl-2产生作用的。     

3T3-L1脂肪细胞对MIN6胰岛素细胞中Kir6.2表达的抑制作用

为明确脂肪细胞对胰岛素细胞中KATP通道表达的直接影响,MIN6胰岛素细胞被分为两组：一组为对照组,一组与分化的3T3-L1脂肪细胞共培养1周。运用半定量RT-PCR方法测定MIN6细胞中KATP通道蛋白Kir6．2的表达变化,Fura-2荧光方法测定MIN6细胞内钙浓度的变化,放射免疫测定方法明确MIN6细胞的胰岛素分泌功能。结果显示,与3T3-L1脂肪细胞共培养1周后,MIN6细胞中Kir6．2的表达明显减少,其表达水平降低为对照组的65．3％。对照组MIN6细胞在0．1mmoi／L甲苯磺丁脲(KATP通道关闭剂)的刺激下,表现为细胞内钙水平显著性升高和胰岛素分泌显著性增加,而共培养组MIN6细胞则失去了甲苯磺丁脲刺激所引起的细胞内钙升高及胰岛素分泌反应。以上实验结果表明,3T3-L1脂肪细胞可以通过分泌一些活性因子直接降低MIN6细胞中KATP通道蛋白的表达和合成,损害MIN6细胞的胰岛素分泌功能。实验结果提示脂肪细胞直接参与2型糖尿病中胰岛β细胞功能障碍的发生。     

分化的骨骼肌细胞的不同固定和化学染色方法比较

该文比较了几种不同固定和化学染色方法对分化的骨骼肌细胞的效果及优缺点,并探讨了用化学染色法进行骨骼肌细胞形态学分析的可行性。骨骼肌前体细胞系C2C12经肌分化诱导3天后分别使用4%多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)、甲醇(methanol)、卡诺氏(Carnoy)固定液固定5 min、10 min和15 min,以确定最适固定方法;然后分别用改良苯酚品红(modified phenol fuchsin)、吉姆萨(Giemsa)、苏木精–伊红(hematoxylin-eosin,HE)三种不同的染液进行染色。结果表明,4% PFA固定5 min或10 min较其他方法更好地保持了肌管的形态;对于分化的骨骼肌细胞包括形成肌管的细胞和未形成肌管的细胞,HE染色优于其他几种染色方法,但以上几种方法均不如免疫荧光染色方法。     

天花粉中总黄酮提取工艺研究

本研究优化了天花粉中总黄酮的提取工艺,采用Al(NO3)3-Na NO2比色法测定了天花粉中总黄酮的含量。在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验,以天花粉中总黄酮提取率为指标,探讨了甲醇体积分数、料液比、提取温度、提取时间对天花粉中总黄酮提取率的影响。结果表明最佳提取工艺参数为:甲醇体积分数50%、料液比1∶15、提取温度70℃、提取时间90 min。在最佳工艺条件下测得天花粉中总黄酮平均含量为0.1184 mg/g。该方法操作简单,稳定性和重复性好,本实验首次测定了天花粉中总黄酮含量,为天花粉药材质量控制提供了依据。     

Investigation of the mechanism of temperature sensitivity of the electroreceptors of ampullae of lorenzini

In experiments on Black Sea skates (Raja clavata), the potential of the receptor epithelium of the ampullae of Lorenzini and spike activity of single nerve fibers connected to them were investigated during electrical and temperature stimulation. Usually the potential within the canal was between 0 and –2 mV, and the input resistance of the ampulla 250–400 k. Heating of the region of the receptor epithelium was accompanied by a negative wave of potential, an increase in input resistance, and inhibition of spike activity. With worsening of the animal's condition the transepithelial potential became positive (up to +10 mV) but the input resistance of the ampulla during stimulation with a positive current was nonlinear in some cases: a regenerative spike of positive polarity appeared in the channel. During heating, the spike response was sometimes reversed in sign. It is suggested that fluctuations of the transepithelial potential and spike responses to temperature stimulation reflect changes in the potential difference on the basal membrane of the receptor cells, which is described by a relationship of the Nernst's or Goldman's equation type.I. P. Pavlov Institute of Physiology, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. I. M. Sechenov, Institute of Evolutionary Physiology and Biochemistry, Academy of Sciences of the USSR, Leningrad. Pacific Institute of Oceanology, Far Eastern Scientific Center, Academy of Sciences of the USSR, Vladivostok. Translated from Neirofiziologiya, Vol. 12, No. 1, pp. 67–74, January–February, 1980.     

Principles of organization and evolution of systems of regulation of functions

Evolution of living organisms is closely connected with evolution of structure of the system of regulations and its mechanisms. The functional ground of regulations is chemical signalization. As early as in unicellular organisms there is a set of signal mechanisms providing their life activity and orientation in space and time. Subsequent evolution of ways of chemical signalization followed the way of development of delivery pathways of chemical signal and development of mechanisms of its regulation. The mechanism of chemical regulation of the signal interaction is discussed by the example of the specialized system of transduction of signal from neuron to neuron, of effect of hormone on the epithelial cell and modulation of this effect. These mechanisms are considered as the most important ways of the fine and precise adaptation of chemical signalization underlying functioning of physiological systems and organs of the living organism