1-磷酸鞘氨醇(S1P)对H9c2心肌细胞肥大反应的保护作用

目的:研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)对H9c2心肌细胞肥大反应的影响。方法:将培养的H9c2心肌细胞随机分为4组,即正常对照组、S1P(1μmol/L)处理组、苯肾上腺素(PE,100μmol/L)处理组、PE(100μmol/L)加S1P(1μmol/L)处理组,每组设3个复孔。处理24 h后应用Actin-Trakcer Green免疫荧光染色检测各组心肌细胞形态大小;Real-Time PCR技术测定各组H9c2心肌细胞中肥大标志物ANP、BNP及β-MHC的转录水平;Western印迹法测定各组中ANP的蛋白表达情况。然后将H9c2心肌细胞随机分为5组,即正常对照组、PE(100μmol/L)组、PE(100μmol/L)加低浓度S1P(0.1μmol/L)组、PE加中浓度S1P(1μmol/L)组、PE加高浓度S1P(10μmol/L)组,每组设3个复孔。处理24 h后应用Western印迹法测定低、中、高浓度S1P干预下磷酸化的Janus激酶2(JAK2)及信号转导和转录激活子3(STAT3)的蛋白表达水平。每项试验独立重复三次。结果:与正常对照组比较,PE组的H9c2心肌细...     

丙泊酚对过氧化氢诱导人红细胞氧化应激状态下一氧化氮通路的影响

目的:一氧化氮(nitric oxide,NO)作为体内的一种细胞信使分子,在心血管活动中起重要作用.NO水平及其在体内的合成代谢通路与临床麻醉、危重症、术后恢复等密切相关、本实验通过使用H2O2在体外诱导人红细胞氧化应激反应,观察红细胞NO,eNOS,NO3-和NO2-水平的变化,及丙泊酚对这一变化的影响.方法:健康成年人红细胞制成2％红细胞悬液,分为10组:对照组(C组)、H2O2组(H组)、丙泊酚12.5 μmol/L组,丙泊酚25 μmol/L组,丙泊酚50 μmol/L组,丙泊酚100 μmol/L组,丙泊酚12.5μmol/L+ H2O2组(P12.5+H组)、丙泊酚25 μmol/L+ H2O2组(P25+H组)、丙泊酚50 μmol/L+H2O2组(P50+H组),丙泊酚100μmol/L+ H2O2组(P100+H组).各组H2O2的反应浓度均为200 μmol/L,孵育30 min,测定红细胞NO,eNOS,NO3-和NO2-水平的变化.结果:P50组(4.97± 0.58)NO水平高于其余各组(P＜0.05);H组(4.96± 0.52)NO水平高于其它组(P＜0.05);与C组(1.34±0.29)相比,P50组(2.23±0.33)和H组(2.33± 0.39)eNOS水平升高(P＜0.05);NO3-水平H组(43.78± 2.13)比C组(52.06±2.14)低(P=0.017);NO2-水平H组(13.32± 2.04)比C组(34.14± 1.48)低(P=0.025).结论:丙泊酚和H2O2能够使红细胞NO和eNOS水平的升高;H2O2引起红细胞NO升高和NO3-,NO2-的降低.我们推断,H2O2使体内产生的过量NO,会对机体产生害影响,而丙泊酚通过清除自由基、抑制H2O2诱导的红细胞硝酸盐-亚硝酸盐-一氧化氮通路向氧化相移动来维持NO水平,实现维持NO生物利用率及保护人红细胞抵抗氧化损伤.     

甘草次酸通过PI3K-AKT途径抑制H2O2所致大鼠心肌细胞氧化损伤

目的:研究甘草次酸对H_2O_2所致大鼠心肌细胞氧化损伤的影响及其可能机制。方法:采用H_2O_2处理建立H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型后,比较模型中ROS生成和细胞凋亡比例,使用不同浓度的甘草次酸孵育H9c2细胞24、48h后,通过流式细胞仪检测ROS的生成量,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测凋亡率,蛋白质印迹法检测检PI3K、AKT1、p-AKT蛋白的表达。结果:H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型中ROS生成和细胞凋亡率分别为(49.33±3.23)%和(33.89±1.45)%,与对照组相比有显著差异;100μmol/L和200μmol/L的甘草次酸作用24 h后,H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型中表达ROS细胞的比例(35.39±1.24)%和(30.46±0.95)%,凋亡细胞比例分别为(29.47±3.15)%和(23.17±1.46)%,当作用48 h后,H9c2大鼠心肌细胞氧化损伤模型中表达ROS细胞的比例(42.67±1.89)%和(35.49±1.63)%,凋亡细胞比例分别为(40.22±3.06)%和(35.26±2.78)%,与对照组相比有显著性差异;使用渥曼青霉素后,各甘草次酸组的与对照组无显著性差异。结论:甘草次酸可能通过PI3K-AKT途径抑制H_2O_2所致大鼠心肌细胞氧化损伤。     

ERK1/2信号通路对黄芪苷Ⅳ抗H_2O_2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用

目的:研究黄芪苷Ⅳ(AST)是否通过细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路发挥对H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用。方法:用200μmol/L的H2O2处理细胞6 h,采用MTT法检测细胞存活率,建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型;比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、总超氧化物歧化酶(T-SOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力以及丙二醛(MDA)含量;Western blot检测H9c2细胞ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果:在H2O2浓度为200μmol/L作用6 h条件下,细胞存活率降低程度适中,实验结果重复性好,确定后续实验采用200μmol/L H2O2作用6 h建立模型。与H2O2组比较,10 mg/L及20 mg/L AST均显著提高细胞存活率(P<0.01),使细胞培养液中LDH活性显著降低(P<0.01),T-SOD及Mn-SOD活力显著提高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.01)。10 mg/L及20 mg/L AST均显著增加H2O2损伤的H9c2细胞p-ERK1/2蛋白的表达(P<0.01),当用PD98059(ERK1/2的抑制剂...     

腺苷抗豚鼠室性心律失常的电生理研究

实验用全细胞膜片钳技术在单个豚鼠心室肌细胞上研究了腺苷 (Ado)对正常及异丙肾上腺素 (Iso)致豚鼠心室肌细胞动作电位、迟后除极 (DAD)、L 型钙电流 (ICa.L)和短暂内向电流 (Iti)的作用。结果表明 :(1)Ado在2 0～ 10 0 μmol/L时对豚鼠心室肌细胞动作电位和ICa .L无明显直接作用 ,但却可明显降低Iso所致的动作电位时程(APD)延长和ICa .L峰值增大 ,Iso (10nmol/L)使细胞APD50 从 3 40± 2 1ms延长到 486± 2 8ms (P <0 0 1) ,APD90从 3 61± 17ms延长至 5 0 1± 2 9ms (P <0 0 1) ;ICa .L峰值从 - 6 5 3± 1 4pA/pF增大到 - 18 2 8± 2 4pA/pF (P <0 0 1) ,电流电压曲线明显左移和下移 ;Ado (5 0 μmol/L)使APD50 和APD90 降至 40 3± 19ms和 419± 2 6ms ,但并不影响动作电位其它参数 ,使ICa.L峰值降低至 - 10 2± 1 5pA/pF (P <0 0 1)。 (2 )Iso (3 0nmol/L)可诱发心室肌细胞产生DADs,其发生率为 10 0 % ;Ado (5 0 μmol/L)可完全抑制Iso引发DADs;细胞经 - 40～ +2 0mV、时程 2s的除极电压 ,Iso (3 0nmol/L)诱导出Iti,其发生率为 10 0 % ;Ado (5 0 μmol/L)可明显抑制Iso致Iti的发生 ,其发生率降为 14 3 %。研究结果提示 ,Ado对豚鼠心室肌细胞动作电位和ICa.L无明显直接作用 ,但却可显著降低Is     

丹参多酚酸盐通过调控肿瘤坏死因子促进大鼠心肌修复的机制研究

摘要 目的：探讨丹参多酚酸盐（Sal B）对大鼠损伤后心肌修复的机制。方法：构建新生大鼠心肌细胞H9c2体外缺氧/复氧（H/R）模型,并分组为空白对照组、缺氧/复氧组（模型组）、缺氧/复氧+TNF-α表达质粒组(TNF-α组)和缺氧/复氧+Sal B处理组(Sal B组)。为检测细胞迁移实验,分组为对照组、模型组、H/R+DMSO+Vector组、H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组。通过MTT实验检测各组H9c2细胞活力;免疫荧光检测H9c2心肌细胞中TNF-α细胞表面受体TNFR-1和TNFR-2的表达水平;Western-blot和RT-qPCR检测TNF-α的mRNA和蛋白表达水平以及血管生成蛋白表达水平的影响;Transwell实验检测Sal B对缺氧/复氧处理的H9c2细胞迁移的影响。结果：与对照组相比,模型组H9c2心肌细胞的活力显著下降（P<0.05）;与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的活力显著升高（P<0.05）。免疫荧光检测结果显示,H9c2心肌细胞质膜上TNFR-1和TNFR2均有表达。Western-blot和RT-qPCR结果显示,与模型组相比,Sal B组中H9c2心肌细胞的TNF-α的mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01),TNF-α组H9c2心肌细胞的TNF-α、Ang-2和VEGF-1蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）,Ang-1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。细胞迁移结果显示,与对照组相比,模型组和H/R+DMSO+Vector组H9c2细胞迁移能力显著下降（P<0.01）;与H/R组和H/R+DMSO+Vector组相比,H/R+Sal B+Vector组、H/R+DMSO+TNF-α组和H/R+Sal B+TNF-α组H9c2细胞迁移能力显著升高（P<0.05）。结论：Sal B能够通过上调TNF-α调控血管生成蛋白表达和促进H/R H9c2心肌细胞迁移,从而促进血管生成。     

氯化钴对H9c2 心肌细胞新基因Mipu1 表达的影响

目的:研究氯化钴(CoCl2)对大鼠胚胎心脏来源的H9c2心肌细胞中新基因Mipu1表达的影响。方法:利用不同浓度的CoCl2(0、100、200、300、400、500μmol/L)处理H9c2细胞9h,及200μmol/L CoCl2处理H9c2细胞不同的时间(0、6、9、12、24h)后,用RT-PCR和Western Blot分别观察H9c2细胞Mipu1 mRNA和蛋白的表达情况。结果:CoCl2可以诱导H9c2细胞中Mipu1 mRNA和蛋白表达升高,200μM CoCl2处理组的Mipu1的表达水平高于100μM CoCl2处理组,但是更高浓度的CoCl2(>200μM)不能使Mipu1的表达进一步升高。随着CoCl2作用时间的延长,Mipu1的表达逐步升高,在12h达到高峰,但是在24h后下降。结论:CoCl2能够促进H9c2细胞新基因Mipu1的表达,并且具有一定的剂量和时间依赖性。     

调节TGF-β1/Smad信号通路对内质网应激状态下肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的: 探讨TGF-β1/Smad信号通路对内质网应激(ERS)状态下肝癌HepG2细胞凋亡的影响机制。方法: 首先建立内质网应激模型:以3 μmol/L的衣霉素(TM)处理人肝癌HepG2细胞株24 h,诱导细胞发生ERS。实验分为6组,每组3个复孔,实验重复3次,6组分别为:Untreated组(未处理组)、TM组(3 μmol/L TM处理组)、TM+NC组(3 μmol/L TM+si-TGF-β1阴性对照组)、TM+si-TGF-β1组(3 μmol/L TM+si-TGF-β1组)、TM+pEX-3组(3 μmol/L TM+质粒对照组)及TM+TGF-β1 pEX-3组(3 μmol/L TM+TGF-β1过表达质粒组),利用脂质体的方法将TGF-β1小干扰RNA(si-TGF-β1)及TGF-β1过表达质粒(TGF-β1 pEX-3)转染入HepG2细胞,转染24 h后,利用RT-qPCR和Western blot检测各组HepG2细胞TGF-β1/Smad信号通路相关因子TGF-β1、p-Smad2表达的情况;CCK-8和流式细胞术分别检测各组HepG2细胞增殖抑制率和凋亡率变化情况。结果: 与Untreated组相比,TM组细胞的TGF-β1及p-Smad2的表达明显降低(P＜0.05);与TM组相比,TM+si-TGF-β1组细胞的TGF-β1及p-Smad2的表达和细胞的增殖抑制率、凋亡率显著降低(P＜0.01),而TM+TGF-β1 pEX-3组细胞的TGF-β1及p-Smad2的表达和细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P＜0.01)。结论: TGF-β1/Smad信号通路在肝癌HepG2细胞发生ERS后受到抑制,当该通路被激活后,ERS状态下肝癌HepG2细胞的凋亡率显著升高。     

L型钙流和反向钠-钙交换在豚鼠心室肌细胞兴奋-收缩偶联中的作用

目的 :比较和探讨L型钙流 [ICa(L) ]和反向钠—钙交换 (NCX)在触发豚鼠心室肌细胞兴奋—收缩偶联中的作用。方法 :以分离的豚鼠单个心室肌细胞为对象 ,采用膜片钳和单细胞收缩测量技术 ,给予 35℃的各种含药物细胞外液快速灌流 ,同时记录ICa(L) 和细胞收缩。结果 :①在 +10mV的钳制电压 ,使用硝苯地平 (Nif) 10～ 10 0 μmol/L和Nif 30 μmol/L +Cd2 +30 μmol/L ,阻滞ICa(L) 越多 ,细胞收缩被阻滞得越多 ,呈线性相关。②在 +5 0mV的钳制电压 ,Nif 10 0 μmol/L以及Nif 30 μmol/L +Cd2 +3 0 μmol/L仅能抑制部分细胞收缩 ,但剩余的细胞收缩起始时间明显延迟 ,且能被 5mmol/LNi2 +所阻滞。③在 +10 0mV的钳制电压 ,细胞收缩起始时间较 +5 0mV明显延迟 ,且不能被Nif 10 0 μmol/L和Nif 30 μmol/L +Cd2 +30 μmol/L所阻滞。结论 :在生理条件下 ,ICa(L) 是触发心室肌细胞兴奋—收缩偶联的主要途径 ,但在膜电位 >+5 0mV时 ,反向NCX也参与兴奋—收缩偶联。     

荭草花醇提物对H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用机制研究

研究荭草花醇提物对H9c2心肌细胞氧化损伤的保护作用机制。采用200μmol/L H_2O_2作用H9c2细胞0.5 h,建立H9c2细胞氧化损伤模型。将细胞分为正常对照组、H9c2细胞氧化损伤模型组、不同浓度荭草花醇提物(20、40、80μg/m L)预处理组。采用MTS法检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放量,细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力;Western blot测定cleavedcaspase-3、Bcl-2、Bax、p-AKT和AKT的表达。与模型组比较,荭草花醇提物能明显增加心肌细胞存活率,降低LDH释放量和MDA含量,提高SOD及CAT活性,并呈剂量依赖性抑制H_2O_2诱导的氧化应激损伤。荭草花醇提物下调cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平,上调Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡;增加细胞中p-AKT的表达,且这种表达可被PI3Ks抑制剂LY294002抵消。表明荭草花醇提物可减轻H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤,其机制可能与减少细胞凋亡,平衡氧化应激产物有关,且部分依赖于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K/Akt)通路。     

多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖及缺氧耐受的影响

为了观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖和缺氧耐受的影响,体外培养H9C2心肌细胞后,将其分为对照组和多肽组,对照组只使用10%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)和胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)处理,多肽组在对照组处理的基础上分别加入浓度为10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L的多肽K-YFAE,7 d后对各组细胞分别行CCK-8检测、细胞周期的流式细胞术检测、细胞周期相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞增殖的影响;用三气培养箱对细胞行缺氧处理后分组,并分别行细胞凋亡的TUNEL检测和流式细胞术检测,以及细胞凋亡相关基因的qPCR检测等,以观察多肽K-YFAE对H9C2心肌细胞缺氧耐受的影响。结果显示:与对照组比较, K-YFAE的干预可促进H9C2心肌细胞进入增殖期,并且减少其凋亡。实验结果初步表明,多肽K-YFAE既可以促进H9C2心肌细胞增殖,又可以增加其缺氧耐受。     

硫化氢通过调控SIRT1抑制阿霉素诱导的H9c2细胞损伤

目的探讨硫化氢（H₂S）对阿霉素（DOX）诱导的H9c2细胞损伤的影响及其作用机制。 方法H₂S对DOX心肌毒性保护作用的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/?L DOX处理组（A组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（B组）,400?μmol/L NaHS单独处理组（C组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（D组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（E组）。SIRT1是否参与H₂S抗DOX心肌毒性作用机制的实验分组为：对照组（Control组）,5?μmol/L DOX处理组（F组）,5?μmol/L DOX和400?μmol/L NaHS共同处理组（G组）,5?μmol/L DOX、400?μmol/L NaHS和15?μmol/L Sirtinol共同处理组（H组）,15?μmol/L Sirtinol单独处理组（I组）。使用MTT法检测细胞活力;Elisa法检测细胞MDA以及SOD水平;DCFH-?DA荧光探针法检测ROS水平;采用Western Blot法检测SIRT1蛋白表达。使用单因素方差分析法进行统计学分析。 结果NaHS预处理可抑制DOX导致的H9c2细胞活力下降：Control组,A组、B组、C组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.05±4.31）﹪、（100.22±4.46）﹪ （F = 134.9,P < 0.001）。NaHS预处理可减弱DOX引起的H9c2细胞ROS、MDA水平的增加以及SOD水平的降低：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（34.18±1.56） μmol/g、（53.69±1.44） U/?mg;A组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.90±12.65）﹪、（72.65±2.66） μmol/g、（31.80±2.05） U/?mg;B组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.08±6.25）﹪、（44.59±1.92） μmol/g、（48.06±1.56） U/mg;C组的ROS、MDA和SOD水平分别是（91.86±1.66）﹪、（32.93±1.56）?μmol/?g、（55.93±1.58）?U/?mg （F?= 83.26,P < 0.001;F = 271.4,P < 0.001;F = 127.0,P < 0.001）。F组（6、12、24?h）H9c2细胞SIRT1蛋白表达水平分别是（0.45±0.03）、（0.27±0.02）、（0.25±0.03）,较Control组（1.00±0.00）降低（F = 611.1,P < 0.001）。本研究还发现,NaHS预处理H9c2细胞能阻止DOX引起的SIRT1蛋白表达下调：Control组、F组、G组、H组的SIRT1蛋白表达水平分别是（1.00±0.00）、（0.31±0.03）、（0.60±0.04）、（1.09±0.09）（F = 123.4,P?2S对DOX诱导的H9c2细胞活力降低的抑制作用：Control组,F组、G组、H组、I组细胞活力分别为100﹪、（54.58±1.58）﹪、（85.37±3.62）﹪、（71.11±2.11）﹪、（97.53±1.45）﹪ （F = 238.2,P < 0.001）。Sirtinol预处理可明显逆转H₂S对DOX导致的H9c2细胞ROS和MDA含量增加及SOD水平降低的抑制作用：Control组的ROS、MDA和SOD水平分别是100﹪、（35.84±2.22）μmol/?g、（53.03±3.16） U/mg;F组的ROS、MDA和SOD水平分别是（184.6±11.33）﹪、（74.78±5.30）μmol/g、（29.26±0.85）U/mg;G组的ROS、MDA和SOD水平分别是（126.5±7.57）﹪、（41.95±3.43）μmol/g、（52.61±2.26）U/mg;H组的ROS、MDA和SOD水平分别是（174.7±5.50）﹪、（67.69±1.52） μmol/g、（35.33±1.95） U/mg,I组的ROS、MDA和SOD水平分别是（98.03±2.86）﹪、（37.66±2.49）μmol/g、51.14 U/mg（F = 112.0,P < 0.001;F = 93.73,P < 0.001;F = 84.92,P < 0.001）。 结论H₂S通过调控SIRT1抑制DOX诱导的H9c2细胞损伤。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨miR-613对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移与侵袭的影响

摘要 目的：研究基于Wnt/β-catenin信号通路探讨微小RNA（miR）-613对宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法：体外培养宫颈癌SiHa细胞和正常宫颈上皮细胞H8,检测细胞中miR-613表达。根据转染miR-613 mimic浓度不同,将SiHa细胞分为0 μmol/L组,100 μmol/L和200 μmol/L组。MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。蛋白免疫印迹法检测miR-613表达对Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Vimentin、E-cadherin和MMP9表达的影响。结果：宫颈癌SiHa细胞中miR-613表达水平均显著低于正常宫颈上皮细胞H8,差异有统计学意义(P<0.05)。转染miR-613 mimic后,100 μmol/L、200 μmol/L 组SiHa细胞中miR-613表达水平显著上调,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。与0 μmol/L组相比,100 μmol/L、200 μmol/L组的SiHa细胞增殖,迁移,侵袭能力均明显下降,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。免疫印迹结果,与0 μmol/L组相比,100 μmol/L、200 μmol/L各浓度组的SiHa细胞Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Vimentin和MMP9表达显著下调,E-cadherin表达显著上调,并且具有浓度依赖性(P<0.05)。结论：miR-613能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖,迁移和侵袭。     

氧化胁迫对Alkalibacterium sp. F26防御酶和辅因子的影响

将一株能够高产过氧化氢酶的低度嗜盐嗜碱茵Alkalibacterium sp.F26作为模式微生物,采用高效液相色谱技术测定胞内代谢物浓度,研究氧化胁迫对其防御酶活性和辅因子的影响.研究结果表明:相比低浓度H2O2(＜1 mmol/L)胁迫,此菌株在高浓度H2O2(＞1 mmol/L)胁迫下的应答表现曼为明显:经3 mmol/L H2O2胁迫后胞内CAT酶活为106.54 U/mg protein,是对照产量的1.76倍;ATP浓度则从对照浓度20.55 μmol/L下降到17.80 μmol/L;NAD 浓度自对照样品的69.89 μmol/L减少至31.77 μmol/L.由于ATP和NAD 浓度的减少,相比未经过H2O2胁迫菌体.细胞能荷值EC从0.77降低至0.68,NADH/NAD 则从0.08增加至0.41.然而,这种应答机制在细胞受到低浓度H2O2的胁迫后并不明显:除发现100 μmol/L H2O2能够导致细胞防御机制的激活而使胞内ATP浓度相比对照有所增加的情况外,经50 μmol/L和500 μmol/L H2O2胁迫后胞内ATP水平从对照的22.69 μmol/L只下降到22.38 μmol/L和13.70 μmol/L;并且此种胁迫条件下NADH浓度变化也不显著.     

黄芩苷介导PI3K/AKT通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡及炎症反应

为探讨黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞凋亡、炎症及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的调控作用,该研究体外培养大鼠心肌H9C2细胞,将其分为对照组(不做干预)、LPS组(10μg/m L LPS)、实验组(10μg/m L LPS+10、20、40、80μmol/L黄芩苷)、黄芩苷+Y组(10μg/m L LPS+10μmol/L黄芩苷+5μmol/L PI3K/AKT通路抑制剂LY294002)、抑制剂组(10μg/m L LPS+5μmol/L LY294002)和黄芩苷+A组[10μg/m L LPS+10μmol/L黄芩苷+100 ng/mL PI3K/AKT通路激活剂胰岛素样生长因子-I(IGF-I)]。用细胞计数试剂盒-8测定细胞活力;酶联免疫吸附试验检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-10的含量; Hoechst33258染色法测定细胞凋亡率; 5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷测定细胞增殖率;蛋白免疫印迹法测定PI3K/AKT相关蛋白、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspas...     

硫化氢对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对c-Fos蛋白表达的影响

为探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对大鼠心肌缺血,再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用及机制,雄性Sprague-Dawley大鼠被随机分为对照组(假手术组)、I/R组、2.8μmol/kg体重NaHS干预组、14 μmol/kg体重NaHS干预组.结扎冠状动脉前降支30 min后,松扎再灌注60 min,心电图Ⅱ导联检测和TTC染色测定心肌梗死面积评价制作的心肌I/R模型:测定血浆中H2S浓度变化;监测血流动力学指标(LVSP,LV±dp/dtmax);HE染色和透射电镜观察心肌形态学改变;免疫组织化学方法测定心肌组织中c-Fos蛋白表达.结果显示:心肌I/R后血浆中H2S浓度明显低于对照组[(30.32±5.26)vs(58.28±7.86)μmol/L,P<0.05]:2.8和14μmol/kg体重NaHS均可显著改善I/R引起的心功能改变,且14μmol/kg体重NaHS较2.8 μmol/kg体重NaHS作用强;14 μmol/kg体重NaHS明显减轻心肌形态学及超微结构损伤,同时降低大鼠I/R心肌组织中c-Fos蛋白表达(0.20±0.06vs0.32±0.10,P<0.05).以上结果提示,H2S对大鼠心肌的I/R损伤有保护作用,这可能与其降低c-Fos蛋白表达有关.     

杭白菊提取物对异丙肾上腺素诱导小鼠心肌肥厚的影响*

目的:探讨杭白菊提取物对异丙肾上腺素(Iso)诱导小鼠病理性心肌肥厚(CH)的影响。方法:健康雄性JCR小鼠,随机分为4组(n=12): 对照组、单纯药物处理组(CFE组)、CH模型组(Iso组)和 CH模型+药物处理组 (CFE+Iso 组);Iso 组和CFE+Iso 组每天一次i.h Iso(3 mg/kg),以构建小鼠CH模型,对照组和 CFE组每天一次i.h同体积生理盐水,连续14 d;同时i.h在4 h后,CFE组和 CFE+Iso组每天一次灌胃CFE(200 mg/kg) ,对照组和Iso 组每天灌胃同体积的生理盐水;28 d后取小鼠心脏, 检测全心质量指数(HMI)、左室质量指数(LVMI)、心脏质量/胫骨长度比值(HW/TL)、心肌纤维化程度、心肌SOD、GSH、MDA水平和左心室组织环磷酸腺苷(cAMP)、血管紧张素II(Ang II)水平。结果:与正常组比较, Iso组LVMI、HMI 和 HW/TL升高(P＜ 0.01);与 Iso组相比,CFE＋Iso组HMI、LVMI和HW/TL比值降低(P＜0.01),心肌纤维化减轻(P＜0.01), GSH、T-SOD水平升高(P＜0.05 或P＜0.01),MDA水平下降(P＜0.01);心肌cAMP和Ang II 含量下降(P＜0.01 或P＜0.05)。结论:CFE改善Iso诱导小鼠CH的心脏状况,其机制可能与其抗氧化、抑制心肌纤维化进展、降低心肌cAMP、AngⅡ水平有关。     

木犀草素预处理对H_2O_2诱导大鼠心肌H9C2细胞损伤的保护机制研究

为了探讨木犀草素能否通过再灌注损伤挽救激酶(Reperfusion injury salvage kinase,RISK)细胞信号通路发挥抗心肌氧化应激损伤保护作用,本实验分别用1、50、100、150μmol/L的木犀草素预处理大鼠心肌来源的H9c2细胞,再使用650μmol/L的H_2O_2制作氧化应激损伤模型。利用MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)检测细胞存活率,然后用最适浓度的木犀草素预处理H9c2细胞并利用激光共聚焦显微镜技术检测线粒体膜电位,Western blot检测P-ERK1/2、P-Akt、P-GSK-3β以及凋亡相关蛋白细胞色素C。最后我们发现不同浓度的木犀草素预处理均能提高细胞存活率,其中在100μmol/L时达到最佳效应。与H_2O_2组相比,100μmol/L的木犀草素预处理可以使TMRE(四甲基罗丹明乙酯)强度降低程度明显减轻,对抗H_2O_2引起的细胞氧化损伤。同时木犀草素预处理可以降低细胞色素C表达,使P-GSK-3β、P-Akt、P-ERK1/2表达升高,渥曼青霉素(PI3K抑制剂)和PD98059(ERK1/2抑制剂)可以阻断这种作用。因此我们认为木犀草素预处理可以减轻H_2O_2引起的氧化应激损伤,这一作用可能是通过RISK信号通路增加P-GSK-3β表达,抑制m PTP开放实现的。     

miR-652-3p靶向同源异型核基因1对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-652-3p靶向同源异型核基因1（PRRX1）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞凋亡的影响。 方法大鼠心肌细胞H9c2细胞采用正常培养基培养为对照组细胞，用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ组细胞；分别转染miR-652-3p阳性对照序列（NC）和转染miR-652-3p mimics后用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ+NC组和AngⅡ+miR-652-3p组细胞；将miR-652-3p mimics分别与PRRX1阳性对照质粒和PRRX1过表达质粒转染至H9c2细胞中用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养，分别为AngⅡ+miR-652-3p+ Vctor组和AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组细胞。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测H9c2细胞中miR-652-3p表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，用Western blot检测细胞中PRRX1、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证H9c2细胞中miR-652-3p与PRRX1调控关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与对照组比较，AngⅡ组H9c2细胞中miR-652-3p水平（1.00±0.08比0.21±0.05）、Bcl-2蛋白水平（0.83±0.08比0.40±0.04）均较低，而PRRX1蛋白水平（0.06±0.01比0.41±0.04）、凋亡率（5.02﹪±1.41﹪比25.33﹪±3.75﹪）、Bax蛋白水平（0.46±0.05比0.96±0.10）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+NC组比较，AngⅡ+miR-652-3p组H9c2细胞中miR-652-3p的表达水平（0.24±0.06比0.98±0.07）、Bcl-2蛋白水平（0.38±0.04比0.72±0.07）均较高，而PRRX1蛋白水平（0.39±0.04比0.13±0.01）、凋亡率（27.02﹪±4.11﹪比12.19﹪±1.63﹪）、Bax蛋白水平（0.95±0.09比0.53±0.05）均较低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组比较，AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组H9c2细胞凋亡率（12.88﹪±1.84﹪比25.45﹪±3.58﹪）、PRRX1蛋白水平（0.13±0.01比0.35±0.04）和Bax蛋白水平（0.54±0.05比0.82±0.08）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05），而Bcl-2蛋白表达水平（0.72±0.07比0.46±0.05）降低，差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论AngⅡ能够下调心肌细胞中miR-652-3p的表达，上调miR-652-3p可通过靶向抑制PRRX1的表达减少AngⅡ诱导的H9c2细胞凋亡。     

硫化氢对家兔窦房结起搏细胞的电生理效应

本研究应用细胞内微电极技术,观察硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对家兔窦房结起搏细胞的电生理效应.结果表明:(1)NaHs(H2S供体)50、100、200 μmol/L浓度依赖地降低家兔窦房结起搏细胞4相去极化速率及起搏放电频率.(2)ATP敏感性钾(ATP-sensitive K ,KATP)通道阻断剂格列苯脲(glybenclamide,Gli,20 μmol/L)阻断NariS(100 μmol/L)的电生理效应.(3)预先应用起搏离子流(pacemaker currenL,If)通道阻断剂氯化铯(CsCl,2 mmol/L)对Naris(100μmol/L.)的电生理效应无影响.(4)胱硫醚-γ裂解酶(cystathionine γ-lyase,CSE)的不可逆抑制剂DL-propargylglycine (PPG,200 μmol/L)的家兔窦房结起搏细胞的动作电位参数无影响.以上结果提示,H2S对家兔窦房结起搏细胞有负性变时作用,这些效应可能与其开放KATP通道,增加K 外流有关,与If无关.本实验没有发现窦房结起搏细胞内有CSE催化产生的内源性H2S的合成.