空肠弯曲杆菌与弗氏完全佐剂诱导系统性红斑狼疮样小鼠模型的建立

目的建立系统性红斑狼疮小鼠模型。方法利用空肠弯曲杆菌（CJ-朝1株）弗氏完全佐剂建立了系统性红斑狼疮模型（SLE）小鼠模型,并检测了淋巴细胞转化指数、dsDNA、器官组织病理切片、血清TNF-α和MMP-9。结果经过初次免疫和再次免疫后模型小鼠体重明显减轻,状态比较差。淋巴细胞转化指数增加,dsDNA水平明显增高,器官组织病理有炎症改变,血清TNF-α和MMP-9的水平明显增高。结论该模型具有系统性红斑狼疮的某些症状,为SLE的研究提供了的实验资料。     

空肠弯曲菌cheA基因插入突变及其对小鼠空肠定植能力的影响

摘要：【目的】构建空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）cheA基因插入突变株,了解CheA与空肠弯曲菌小鼠体内定植的相关性。【方法】运用同源重组的原理构建空肠弯曲菌cheA基因突变株,采用PCR技术检测cheA突变株的构建情况。通过基因回补试验构建cheA基因回补株。空肠弯曲菌感染小鼠,运用小鼠空肠内容物涂板计数的方法检测cheA突变株、cheA基因回补株和野生株定植小鼠能力的差异。【结果】PCR检测显示成功构建cheA基因突变株。空肠弯曲菌cheA基因突变株定植小鼠空肠的数量明显减少（P<0.05）;cheA基因回补株定植小鼠空肠的数量跟野生株相比无明显差异（P>0.05）。【结论】本研究成功构建cheA基因突变株及其回补株。cheA基因可能参与空肠弯曲菌在小鼠体内定植的过程。     

具有拮抗空肠弯曲杆菌能力鸡源乳酸菌的筛选及特性

【目的】从鸡粪中筛选具有拮抗空肠弯曲杆菌能力的乳酸菌,研究其肠道益生特性,探讨其对空肠弯曲杆菌鞭毛毒力因子的影响。【方法】利用牛津杯法测定40株鸡粪源乳酸菌菌株的抑菌活性以确定抑菌性能好的菌株,利用16S r RNA基因分析进行菌株鉴定,采用HT-29细胞测定菌株的细胞粘附能力,通过模拟胃肠液实验分析菌株对胃肠道环境的耐受性,利用扫描电镜分析乳酸菌无细胞提取物对空肠弯曲杆菌鞭毛毒力因子的影响。【结果】从鸡粪中分离得到40株菌株,进一步筛选得到X13、X14和G20等3株拮抗空肠弯曲杆菌能力较强的菌株,经16S r RNA基因序列分析分别鉴定为罗伊氏乳杆菌、唾液乳杆菌和鸡乳杆菌;HT-29细胞粘附实验表明X13、X14及G20的粘附指数分别为11.5、20.3和14.3个/细胞,均具有良好的粘附能力;3株乳酸菌对人工胃肠液均具有良好的耐受性;扫描电镜观察表明,与对照组相比,3株纯培养乳酸菌无细胞提取物均能抑制空肠弯曲杆菌鞭毛毒力因子的合成。【结论】从鸡粪中筛选得到了3株能有效抑制空肠弯曲杆菌生长并能抑制其鞭毛合成的乳酸菌,有望作为拮抗性饲用益生菌用于控制禽畜的空肠弯曲杆菌感染。     

空肠弯曲菌感染动物模型的研究进展

空肠弯曲菌是一种全球关注的人兽共患病原菌,感染后可引起人和动物多种疾病。动物模型是开展致病机理、疫苗评价和药物开发等研究的基础。空肠弯曲菌由于培养条件苛刻以及感染实验动物的疾病相似性、经济性和重复性等因素,仍缺乏良好的感染动物模型,其致病机理迄今尚不清楚。本文对已报道的空肠弯曲菌感染实验动物模型进行综述。     

念珠菌性阴道炎小鼠模型的建立

目的建立念珠菌定植的阴道感染小鼠模型。方法先用林可霉素溶液(浓度为100mg/ml)冲洗小鼠阴道,再将念珠菌接种到小鼠阴道内。结果模型组小鼠阴道内主要细菌数量乳杆菌显著下降(P<0.01),出现阴道红肿、分泌物多呈块状和阴道黏膜充血等念珠菌阴道炎的典型症状。结论通过抗生素处理后,再在小鼠阴道内接种念珠菌,念珠菌能在小鼠阴道内定植,即建立了念珠菌性阴道炎的小鼠模型。     

百日咳小鼠呼吸道感染模型的建立与应用

目的模拟自然感染方式建立百日咳小鼠模型,并初步应用于疫苗评价。方法通过对小鼠品系、周龄,感染用菌株、菌液浊度,感染时间等进行比较,确定动物模型建立的相关参数。然后借助该模型比较全细胞百日咳疫苗和无细胞百日咳疫苗免疫后的小鼠肺部百日咳杆菌的清除情况。程序为第0、2、4周免疫,第6周进行呼吸道感染,感染后2 h、3 d、7 d、14 d、21 d取样,对小鼠肺部菌落进行计数。结果在菌液浊度至少为109CFU/m L时,用Tohama I株对4～10周龄BALB/c小鼠雾化感染30 min,小鼠肺部百日咳杆菌分离培养的阳性率可达100%。用于疫苗评价后发现,免疫全细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后7 d检测不到肺内的百日咳杆菌,而免疫无细胞百日咳疫苗的小鼠在感染后21 d还可分离出少量百日咳杆菌。结论通过动物发病、肺部细菌分离培养和感染曲线等对动物模型进行分析,证明通过呼吸道感染途径可成功建立百日咳小鼠模型,并且该模型可应用于百日咳疫苗的评价,为百日咳疫苗的有效性评价奠定重要基础。     

小鼠结核分枝杆菌耐药模型的建立与评价

目的 建立小鼠结核分枝杆菌耐利福平株静脉感染小鼠模型.方法 30只BALB/c雌性小鼠经尾静脉感染结核分枝杆菌耐利福平株每只106 CFU,观察小鼠一般状况,并分别在感染后6周、10周、14周处死小鼠,进行脾、肺组织病理切片、抗酸染色、计脏器荷菌数.结果 感染后小鼠体重呈逐渐上升趋势,脏器病理变化随时间推移由急性炎症逐...     

鼠棒状杆菌PCR检测方法的建立及其应用

目的建立鼠棒状杆菌PCR检测方法并应用于临床样本检测。方法用脑心浸出液培养基复苏、培养鼠棒状杆菌（corynebacteriumkutscheri,C．kutscheri）并提取基因组DNA作模板;根据GenBank中C．kutsche6的16S基因序列设计合成引物,建立鼠棒状杆菌PCR检测方法并进行敏感性和特异性的评价;人工感染昆明鼠,建立小鼠棒状杆菌感染模型,采集肝脏和肾脏,提取DNA进行检测。结果成功建立了鼠棒状杆菌PCR检测方法,该方法可检测到100个阳性质粒;对小鼠沙门氏菌、肺炎链球菌和巴氏杆菌无交叉反应;全部8个人工感染样本全部检测为阳性。结论建立的鼠棒状杆菌PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可作为鼠棒状杆菌感染的快速检测方法。     

气雾攻击法感染结核病小鼠模型的建立及其综合评价

目的 模拟自然感染方式建立结核病小鼠模型,并对其病理变化进行综合评价.方法 通过气雾攻击方式将结核分枝杆菌H37Rv接种至C57BL/6J小鼠体内.在感染后的4周、6周、8周对小鼠进行micro-CT活体动态扫描,无菌分离肺脏和脾脏,肉眼观察病变情况,活菌菌落计数,组织病理检测(HE和抗酸染色).结果 肉眼观察和micro-CT扫描发现,不同时间小鼠肺部感染情况逐渐加重,至感染后第8周时病变弥漫至整个肺部;HE染色肺组织出现弥漫性肉芽肿样实变;抗酸染色可见结核分枝杆菌.结论 通过大体病变、病理、影像、菌落计数几个方面对建立的小鼠模型进行综合分析,证明利用气雾攻击法感染的结核病小鼠模型建立成功;该模型在形成病变时与结核患者的情况存在一定差异,对其完善的综合评价有助于在相关研究中对该小鼠模型的合理应用.     

麻鸭肠道无芽胞厌氧菌定性、定量和定位研究

本研究采用气、液相色谱分析法(Gas-Liquid Chromatography,GLC)分析细菌代谢产物,结合微生物学鉴定和微量快速生化反应,在我国首次定量测定了麻鸭小肠、大肠每克内容物4种厌氧菌的菌数,初次确定在小肠有卵形类杆菌、发酵乳杆菌、两歧双歧杆菌、空肠弯曲杆菌4个种;在大肠有卵形类杆菌、多形类杆菌、解脲类杆菌、发酵乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、短双歧杆菌、空肠弯曲杆菌和粪弯曲杆菌9个种。类杆菌和乳杆菌等是麻鸭肠道正常微生物群。     

基于凝集素-糖蛋白特异结合的特性筛选与鉴定空肠弯曲杆菌NCTC11168株糖蛋白

[目的]从空肠弯曲杆菌NCTC11168菌株中筛选糖蛋白.[方法]本实验基于凝集素-糖蛋白特异结合的特性,先用免疫印迹的方法确定空肠弯曲杆菌内糖蛋白能与凝集素SBA特异结合,再用包被有凝集素SBA的磁珠捕获样品中的潜在糖蛋白,通过N-乙酰半乳糖胺竞争性洗脱及双向电泳分离,最后利用串联质谱鉴定捕获的糖蛋白.[结果]质谱分析共鉴定到22种空肠弯曲杆菌蛋白,其中至少5种为已报道糖蛋白,包括Cj0633在内的17种为迄今为止未知的潜在糖蛋白.[结论]这种糖蛋白筛选策略可用于细菌糖蛋白的分离鉴定.     

小鼠念珠菌感染模型和抗感染免疫

目前,临床相关的小鼠念珠菌感染疾病模型种类日益增多.与早期小鼠念珠菌感染模型相比,近期感染模型与临床上免疫抑制机会性念珠菌感染患者的感染方式、感染的发展进程、临床表现、靶器官临床病理组织学特征更相近.建立了特定免疫缺陷小鼠(如转基因/基因敲除小鼠等);感染源从白色念珠菌转向非白念珠菌(如近平滑念珠菌、光滑念珠菌等);感染方式从局部口腔-消化道感染逐步转变为血源性深部多器官组织感染.特定模型的建立更深入地探讨了宿主-念珠菌感染源之间相互的免疫机制.细胞介导的免疫反应在宿主抗念珠菌感染免疫反应中占主导,吞噬细胞直接杀伤真菌;细胞分化为Th1和Th2型细胞,分泌相关细胞因子进行免疫调控.体液免疫中一些保护性抗体也具有一定的保护作用.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌小鼠全身感染模型的建立与评价

目的建立稳定、可靠的MRSA全身感染小鼠模型,为MRSA疫苗的研发提供参考依据,并对系统研究MRSA感染的发病机制及其防治策略奠定实验基础。方法在采用国际标准株MRSA-252建立OD600-CFU标准曲线的基础上,经尾静脉注射途径感染BALB/c小鼠,从感染剂量的选择、小鼠的生存率和体重变化、血液及多脏器的细菌定植量以及主要组织器官病理学变化等多个层面进行时相性监测,对建立的小鼠模型进行系统评价。结果经此途径建立的小鼠模型,致死剂量为每只5.0×109CFU,亚致死剂量为每只1.0×109CFU（生存率为60%～70%）。感染后小鼠生存率下降;体重下降;血液及肝脏、脾脏和肾脏均有细菌定植,定植量在感染后第3天达到高峰;心、肝、肺和肾等主要脏器中有较明显的细胞坏死和炎性细胞浸润。结论小鼠模型的建立,将为进一步研究MRSA疫苗的有效性和安全性评价等提供可靠的技术手段。     

双歧杆菌防治鼠伤寒沙门菌感染的实验研究

目的　以小鼠为模型,研究双歧杆菌在体内对鼠伤寒沙门菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ ,ＳＴＭ） 感染的防治作用。方法　分别用大剂量悉复欢、Ｂ．ｂｉｆｉｄｕｍ 、生理盐水（ＮＳ） 给三组小鼠灌胃,再用ＳＴＭ 攻击,观察小鼠经上述不同处理前后肠道双歧杆菌数量和ＳＴＭ 攻击后粪便ＳＴＭ 培养阳性率,阳性标本ＳＴＭ 分离值及小鼠ＳＴＭ 感染率;同时用双歧杆菌、悉复欢、双歧杆菌加悉复欢分别治疗ＳＴＭ 感染的小鼠,观察并比较疗效。结果　１． 大剂量悉复欢使用可使小鼠肠道内双歧杆菌明显降低,而双歧杆菌灌胃则肠道双歧杆菌明显增多。双歧杆菌灌胃的小鼠粪便ＳＴＭ培养阳性率、阳性粪便ＳＴＭ 值明显低于用大剂量悉复欢和ＮＳ 的小鼠,小鼠ＳＴＭ 感染发病率也明显较低。２． 对于ＳＴＭ 感染鼠,双歧杆菌与悉复欢联合治疗效果最好。结论　１． 双歧杆菌在体内对ＳＴＭ 有拮抗作用;能预防和减少ＳＴＭ 感染发生;２． 在ＳＴＭ 感染时,先用悉复欢,再用双歧杆菌可以达到预期疗效,双歧杆菌对鼠伤寒沙门菌感染有辅助治疗作用。     

C4亚型人肠道病毒71型的小鼠肌肉适应株对小鼠具有致死毒力

目的人肠道病毒71型（EV71）感染婴幼儿可导致手足口病,偶尔伴随有严重的并发症。建立EV71的小鼠模型是深入研究病毒感染的致病机制、进行疫苗和药物评价的基础。方法将EV71的临床分离株在小鼠骨骼肌中进行系列传代,得到了小鼠的肌肉适应株MP10。使用MP10经腹腔注射感染10日龄ICR小鼠,对感染小鼠的症状、病毒复制和病理进行了监测。结果与临床分离株相比,MP10对人横纹肌瘤细胞（rhabdomyosarcoma cell,RD细胞）的感染力提高,并且对小鼠的毒力增强,MP10感染10日龄小鼠可导致其瘫痪和死亡。病毒主要在骨骼肌中复制,并引发大面积的坏死性肌炎,同时神经组织未观察到病变。病理分析发现：感染小鼠体内与呼吸运动相关的肌肉均发生严重的坏死性肌炎,推测此类肌肉的坏死会影响小鼠的呼吸功能,从而成为导致小鼠死亡的因素之一。结论建立了C4亚型EV71毒株感染10日龄ICR小鼠的模型,该模型可作为研究EV71感染的致病机制、以及疫苗和药物评价的工具。     

Ⅱ型糖尿病并发结核病小鼠模型的建立及评价

目的建立Ⅱ型糖尿病并发结核病小鼠模型,对其肺组织病变过程进行评价。方法高脂高糖饲料喂养C57BL/6J小鼠,腹腔注射STZ,建立Ⅱ型糖尿病小鼠模型。采用滴鼻的方式将结核分枝杆菌H37Rv接种至糖尿病小鼠体内,建立糖尿病并发结核病小鼠模型。分别于感染后的1~8周、10周及12周解剖小鼠,肉眼观察小鼠肺脏病变情况,活菌菌落计数,肺组织行HE及抗酸染色,镜下观察病理学改变。结果肉眼观察发现,随着感染时间的增长肺部感染情况逐渐加重,至第8周时病灶达到全肺的80%,第10周时病变范围开始缩小;感染8周后HE染色肺组织出现典型的肉芽肿结构,至第10周部分病变肺组织出现修复现象;抗酸染色可见结核分枝杆菌。结论从大体病变、菌落计数及病理改变等方面对小鼠模型进行评价,发现糖尿病并发结核病小鼠模型较单一的结核病小鼠模型具有病变出现早,病程进展快等特点,与临床患者的某些阶段表现类似,因此实验构建的糖尿病并发结核病小鼠模型基本成功。     

变性高效液相色谱检测沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌

应用多重PCR 反应(multiplex PCR,mPCR)结合变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术建立食品中沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测方法.以编码沙门氏菌的fimY基因、编码空肠弯曲菌的gyrA基因和编码肠出血性大肠杆菌O157:H7的rfbE基因为靶基因,选择3对引物,建立并优化了快速鉴别沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的多重PCR体系,扩增产物分别为284、159和499 bp,并验证了该多重PCR具有特异性.沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测.试验结果表明该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到:沙门氏菌1.5 CFU/ml、空肠弯曲菌15 CFU/ml、肠出血性大肠杆菌O157:H7 15 CFU/ml.在随机采集的226份冷冻鸡肉类样品中,检出了7份样品为沙门氏菌阳性、10份为空肠弯曲菌阳性、1份为肠出血性大肠杆菌O157:H7阳性.研究建立的多重PCR-DHPLC方法可特异、灵敏地实现对沙门氏菌、空肠弯曲菌和肠出血性大肠杆菌O157:H7的快速检测.     

用hu-RBC-SCID小鼠分离鉴定献血者巴贝斯样原虫

目的用人红细胞(RBC)替代SCID小鼠自身血循环红细胞而建立的人化小鼠模型,即hu-RBC-SCID模式小鼠,分离并鉴定献血者中隐性人巴贝斯虫病原的感染,确定输血患者的感染来源.方法去除NOD/shi-scid小鼠自身血循环红细胞,辅以肌肉注射兔抗小鼠血红蛋白生成素血清和大鼠抗小鼠RBC单克隆抗体,用人O型红细胞注入NOD/shi-scid小鼠血循环中,建成hu-RBC-SCID模式小鼠,接种献血者的RBC.结果接种献血者的RBC的hu-RBC-SCID模式小鼠的RBC中,出现巴贝斯原虫,并大量增殖,最高达到40%,经形态学、PCR等方法鉴定病原为 Babesia microti 样原虫,与患者的一致.结论 hu-RBC-SCID模式小鼠证实,患者确因输血感染;hu-RBC-SCID模式小鼠是人巴贝斯原虫研究理想的动物模型.     

山苍子油对小鼠系统性新生隐球菌感染的实验研究

目的研究山苍子油治疗小鼠系统性新生隐球菌感染的疗效。方法建立小鼠系统性新生隐球菌感染模型,观察给药后小鼠的中位生存时间,检测小鼠肾脏及肺菌落形成单位计数。结果山苍子油不仅能够显著延长感染小鼠的中位生存时间,提高其生存率,而且可显著增加感染小鼠肾脏及肺菌落清除率。结论山苍子油对系统性新生隐球菌感染小鼠具有治疗作用。     

双歧杆菌脂磷壁酸对深部白色念珠菌感染小鼠生存状态的影响

目的观察双歧杆菌脂磷壁酸(BLTA)对深部白色念珠菌感染小鼠生存状态的影响。方法通过尾静脉注射白色念珠菌,建立正常免疫力及免疫力低下小鼠深部白色念珠菌感染模型,观察不同剂量BLTA处理对小鼠体重变化、生存时间以及肾组织真菌负荷量的影响。结果深部白色念珠菌感染小鼠经BLTA处理后,生存状态有所改善,体重下降减慢。对于正常免疫力小鼠,BLTA150组的生存率明显高于未处理组(P0.01);而对于免疫力低下小鼠,BLTA100组和BLTA150组小鼠的生存率明显高于未处理组(P0.01)。无论免疫力正常还是免疫力低下小鼠,BLTA100组和BLTA150组的肾组织白色念珠菌菌落计数与未处理组比较均显著降低(P0.01)。结论 BLTA能够有效地改善深部白色念珠菌感染小鼠的生存状态,而且这种作用与BLTA呈剂量依赖关系。