紫草素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用

目的:观察紫草素抑制人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡诱导的作用。方法:用不同浓度的紫草素处理HepG2细胞,MTT检测紫草素对HepG2细胞生长增殖的抑制作用;比色法测定Caspase-3酶活性;Western blot法检测磷酸化Akt蛋白(pAkt)的表达。结果:紫草素能够抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并呈浓度、时间依赖性,紫草素与HepG2细胞作用24小时后Caspase-3酶活性显著增强,显示紫草素诱导的调亡作用随时间的延长而增加;同时,紫草素处理HepG2细胞后,随着药物浓度的增加,磷酸化Akt蛋白表达下降。结论:紫草素可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,诱导HepG2细胞凋亡,凋亡机制可能与紫草素抑制PI3K/Akt信号途径有关。     

紫草素促进caspase-9活化诱导大肠癌细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨紫草素对大肠癌（CRC）细胞LoVo的抗肿瘤作用及其机制。 方法以不同紫草素浓度梯度（0、2、4、6 μmol/L）处理CRC细胞LoVo 24 h，以4 μmol/L紫草素处理不同时间梯度（0、12、24、48 h）的CRC细胞LoVo。流式细胞技术结合Annexin V-FITC/PI双染色测定细胞凋亡率，Western blot检测细胞中caspase-9蛋白的表达及切割情况。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与0 μmol/L处理CRC细胞LoVo 24 h比较，2、4、6 μmol/L的细胞凋亡率[（6.94±1.02）﹪比（10.61±1.12）﹪、（15.55± 1.35）﹪、（36.51±1.46）﹪]均升高；与4 μmol/L紫草素处理0 h的CRC细胞LoVo比较，12、24、48 h的细胞凋亡率[（1.33±0.59）﹪比（19.23±1.24）﹪、（22.24±1.41）﹪、（28.41±1.52）﹪]均升高，差异具有统计学意义（P均< 0.001）。当紫草素剂量≥2 μmol/L，处理时间≥12 h时，caspase-9蛋白表达上调并被诱导活化，而caspase-9抑制剂（Z-LEHD-FMK）预处理后，LoVo细胞凋亡率下降38.7﹪，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论紫草素可以通过caspase-9蛋白的表达及其切割活性诱导CRC细胞凋亡。     

紫草素对人脑胶质瘤U251 细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察紫草素对体外培养的人脑胶质瘤U251细胞的增殖和凋亡的影响。方法:应用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分别检测2.5、5、10μM/L的紫草素对U251细胞的体外抑杀作用以及凋亡诱导作用,进一步应用Western blot方法检测紫草素对凋亡相关蛋白Bcl-2及Bax表达水平的影响。结果:紫草素对人U251胶质瘤细胞具有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。紫草素可明显上调U251细胞Bax的表达,下调Bcl-2的表达,与对照组相比存在显著性差异(P0.05)。结论:紫草素对人胶质瘤U251细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡作用。     

多糖对滇紫草培养细胞的影响

黑节草多糖、火棘果果胶和琼脂加入到培养基中,均能促进滇紫草细胞合成紫草素。黑节草多糖促进紫草素合成的最适浓度为0.05—0.1％,大于最适浓度紫草素合成逐渐受到抑制。三种黑节草多糖单体中以多糖Ⅱ最为有效,紫草素产量为90.07mg/l。加入火棘果果胶和琼脂均对紫草素合成呈现促进作用。最后对多糖的作用机理以及多糖与寡糖的关系进行了讨论。     

真菌诱导子对新疆紫草悬浮培养细胞的生长和紫草素合成的影响

４种真菌诱导子诱导新疆紫草悬浮培养细胞对细胞紫草素的合成均有促进作用,其中以黑曲霉诱导子效果最高,而且促进细胞紫草素的外排,约３０％的紫草素存在于培养液中;诱导促使细胞苯丙氨酸解氨酶活性显著提高,培养液中紫草素的含量变化与苯丙氨酸解氨酶活性变化呈正相关性。     

真菌诱导子对新疆紫草悬浮培养细胞的生长和紫草素合成的影响

4种真菌诱导子诱导新疆紫草悬浮培养细胞对细胞紫草素的合成均有促进作用,其中以黑曲霉诱导子效果最高,而且促进细胞紫草素的外排,约30％的紫草素存在于培养液中;诱导促使细胞苯丙氨酸解氨酶活性显著提高,培养液中紫草素的含量变化与苯丙氨酸解氨酶活性变化呈正相关性。     

应用基因芯片技术研究白花蛇舌草豆甾醇抑制人肝癌细胞体外生长的靶基因调控

目的:应用基因芯片技术研究白花蛇舌草豆甾醇(Stigmasterol from Hedyotis diffusa willd.,SHD)抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的靶基因调控。方法:MTT法评价SHD在0、5、10、50、100mg/L浓度下,于24、48、72h对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率变化。分别提取人正常肝细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和SHD作用后的SMMC-7721细胞的总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与人HO4基因表达谱芯片杂交,扫描杂交芯片图像,利用软件获得SHD抑制人肝癌的靶基因,对其进行生物信息学分析。结果:SHD对SMMC-7721具有体外抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性;SHD使癌基因fos、myc、ras、pim-1、met、rel下调至正常水平,使抑癌基因NF-2和磷酸激酶MAP2K6的表达上调至正常水平。结论:SHD对人肝癌细胞SMMC-7721具有显著的体外抑制作用;SHD抑制SMMC-7721细胞的作用由多条靶基因协同,并通过胞内外信号转导途径协调完成。     

EPA诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及端粒酶活性调控机制研究

目的:探究二十碳五烯酸(Eicosa Pentaenoic Acid.EPA)对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡、端粒逆转录酶h TERT的调控作用及端粒酶表达活性的影响。方法:体外培养SMMC-7721人肝癌细胞,用不同浓度的EPA(0μM、25μM、50μM、100μM、200μM)作用于SMMC-7721肝癌细胞(24 h、48 h、72 h)后,显微镜下观察其形态学变化;应用MTT法检测SMMC-7721肝癌细胞细胞增殖变化情况;Western-blot法检测h TERT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平变化;Real Time-PCR检测h TERTm RNA的表达变化;ELISA法检测SMMC-7721肝癌细胞端粒酶活性的表达水平。结果:EPA可诱导肝癌细胞SMMC-7721发生细胞凋亡,具有明显的时间计量依赖关系。在此过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白表达上调,同时端粒酶逆转录酶h TERT蛋白及其m RNA的表达水平和端粒酶活性均明显降低。结论:抑制端粒酶逆转录酶基因(h TERTm RNA)表达而抑制端粒酶的活性、诱导癌细胞凋亡,可能是EPA的抗癌作用机制之一。     

川楝素对人胃癌细胞MKN-45中CTPS细胞蛇形成的影响及其机制*

目的:本研究旨在对川楝素(TSN)与胃癌细胞MKN-45中CTPS细胞蛇形成的联系进行初步探究。方法:以人胃癌细胞MKN-45为实验材料,设置7个处理组分别为:0、20、40、60、80、100、120 nmol/L TSN。每组3次重复,分别作用24 h、48 h、72 h,利用CCK-8法检测川楝素对MKN-45细胞增殖抑制作用,使用免疫荧光检测之后再通过激光共聚焦显微镜观察细胞内CTPS细胞蛇形态,qRT-PCR检测川楝素对MYC基因表达的影响。另外设置2个处理组为1 mmol/L DON和1 mmol/L MPA,每组3次重复,作用6 h然后采用免疫荧光检测细胞蛇形态。结果:免疫荧光结果显示,分别利用1 mmol/L DON和1 mmol/L MPA 处理MKN-45细胞后CTPS形成丝状的细胞蛇结构,意味着该细胞具有形成CTPS细胞蛇的能力;川楝素处理组的细胞增殖率明显低于0 nmol/L TSN组(P＜ 0.01);免疫荧光结果显示80 nmol/L的川楝素作用72 h时MKN-45细胞中CTPS细胞蛇形成数量最多;qRT-PCR检测结果显示,80 nmol/L川楝素作用24 h细胞内MYC表达明显降低(P＜0.05),48 h后细胞内MYC的表达量明显增多(P＜0.01)随后表达降低。结论:川楝素可能通过调节MYC的表达影响细胞内细胞蛇的组装。     

紫草素促进肺癌A549细胞凋亡

目的:探讨紫草素对A549人肺癌细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法:采用不同浓度的紫草素对体外培养的A549人肺癌细胞进行干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测紫草素对A549细胞增殖和凋亡的影响,Western blot观察凋亡相关蛋白(Bcl-2和Bax)表达水平的变化,激光共聚焦显微镜检测紫草素处理12 h并用JC-1染色的A549细胞线粒体膜电位改变。结果:CCK-8分析显示,0.5μM、1μM、2μM、4μM和6μM实验组A549细胞相对存活率分别为(83.71±1.02)%、(57.47±2.78)%、(27.39±1.96)%、(16.96±1.47)%和(14.72±1.93)%,与对照组相比实验组A549细胞相对存活率明显降低;流式细胞术结果表明,1μM、2μM、4μM实验组A549细胞的凋亡率分别为(13.80±1.76)%、(40.90±3.48)%和(78.80±2.52)%,与对照组相比紫草素呈剂量依赖型促进A549细胞凋亡;Western blot结果证实,紫草素能降低A549细胞中Bcl-2蛋白的表达量,而升高Bax蛋白的水平;激光共聚焦显微镜扫描结果显示紫草素能降低A549细胞的线粒体膜电位,呈剂量依赖型。结论:紫草素能显著促进A549细胞凋亡,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和上调促凋亡蛋白Bax的表达有关。     

大蒜阿霍烯抗胃癌的作用及分子机制*

目的: 探讨大蒜阿霍烯对胃癌细胞MGC-803的作用及相关分子机制。方法: 终浓度分别为0、1、5、25和125 μmol/L大蒜阿霍烯作用于细胞MGC-803 24 h、48 h和72 h,各设3复孔,MTS法检测细胞增殖活性,JC-1和Hoechst染色法观察线粒体膜电位和核型改变,LDH释放法检测细胞毒性,流式法分析细胞的凋亡和周期改变,RT-qPCR和Western blot检测P53、Caspase-3、RAS、ERK、BCL-2、AKT、mTOR、PI3K基因的表达,同时,取4周龄雄性BALB/C鼠随机分成5组,20只/组,腹股沟皮下接种胃癌细胞MGC-803,2 d后各组分别经皮下注射浓度为0 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L、25 μmol/L、125 μmol/L的大蒜阿霍烯,0.1 ml/次,隔天注射一次,并于首次注射肿瘤细胞的第20日每组杀10只,取瘤组织,称重。记录剩余小鼠的存活期,观察大蒜阿霍烯对荷瘤小鼠胃癌生长及生存期的影响。结果: 大蒜阿霍烯可明显抑制MGC-803细胞增殖活性,诱导细胞凋亡(P＜0.01),显著上调P53、Caspase-3、BAX基因的转录和表达水平,抑制基因RAS、ERK1、BCL-2、AKT、mTOR和PI3K的表达(P＜0.01),显著抑制小鼠胃癌移植瘤生长,并延长荷瘤小鼠存活期(P＜0.01)。结论: 大蒜阿霍烯对胃癌有治疗作用,可通过调节PI3K-AKT-mTOR、RAS-RAF-MEK-ERK信号通路而抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

SmacN7诱导乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡的作用及其机制*

目的:探讨SmacN7对乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡的作用及机制。方法:将0-20 μmol/L的SmacN7应用于乳腺癌细胞MDA-MB-157,用MTS法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞周期,hoechst33342染色观察细胞核型变化,JC-1染色检测线粒体膜电位,LDH释放实验检测药物细胞毒性,qPCR检测各基因转录水平,并通过抑瘤实验证实该药抑制乳腺癌增殖的作用。结果:应用SmacN7后,乳腺癌细胞MDA-MB-157增殖抑制率和细胞凋亡率均增加(P＜0.01),核型发生显著变化,细胞线粒体膜电位降低,LDH释放量增加,并上调TRAIL、DR4、DR5、p53、PARP-1、Bax、Bid、BAK、caspase-3、caspase-8、caspase-9基因的转录水平(P＜0.01),下调 Ras、PI3K、AKT、mTOR、Bcl2、Bcl-xL、MCL-1、Survivin、cIAP-1、cIAP-2基因的转录水平(P＜0.01)。结论:SmacN7可通过TRAIL介导的死亡受体途径和线粒体介导的内源性凋亡途径诱导乳腺癌细胞MDA-MB-157凋亡,发挥抗乳腺癌的作用。     

四逆散对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其机制*

目的: 探讨含四逆散药液血清对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法: 将人肝癌HepG2细胞分为5组,每组3个复孔。实验组细胞用五氟尿嘧啶(5-FU)或不同浓度的含四逆散药液血清处理48 h后,用倒置显微镜观察含四逆散药液血清处理后人肝癌HepG2细胞形态的变化;MTT法检测含四逆散药液血清对HepG2细胞生长的抑制作用;荧光染色和流式细胞术分别分析含四逆散药液血清对HepG2细胞凋亡的影响。Rho123染色法检测线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果: 与对照组比较,含四逆散药液血清处理人肝癌HepG2细胞后,细胞数量显著减少(P＜0.01),形态发生改变,呈现典型的凋亡细胞形态;G1期细胞数明显增加,而G2 期细胞数量显著减少(P＜0.05);Bax、Caspase-3、-9和Cyt-c的表达显著升高,而Bcl-2的表达显著降低(P＜0.05);随着含四逆散药液血清浓度增大,HepG2细胞线粒体膜电位显著下降(P＜0.05)。结论: 四逆散可以抑制HepG2细胞增殖,并通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

GW501516对低氧条件下肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及其机制*

目的: 观察过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激动剂GW501516对低氧原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,并探讨其可能机制,为低氧肺血管重构的防治寻找新靶点。方法: 对照组PASMCs采用21%氧气培养,低氧组采用 3％氧气诱导PASMCs增殖,通过不同浓度的GW501516(10、30、100 nmol/L)低氧条件下孵育PASMCs 12、24、48 h筛选GW501516抑制低氧PASMCs增殖的最适浓度;选择100 nmol/L GW501516和(或)蛋白激酶B(AKT)激动剂SC79在低氧条件下孵育PASMCs 24 h,探讨GW501516抑制PASMCs增殖可能机制,通过CCK-8与BrdU试剂盒检测细胞增殖与DNA的合成,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1,细胞周期蛋白激酶抑制蛋白p27(p27)mRNA的表达,Western blot检测PPARδ、总的和磷酸化蛋白激酶B(AKT)与糖原合酶激酶3β(GSK3β)的表达。结果: 与低氧组相比,不同浓度的GW501516(10、30、100 nmol/L)干预12、24、48 h后能够抑制低氧条件下PASMCs增殖与DNA的合成,且100 nmol/L GW501516抑制作用最强(P＜0.05或P＜0.01);与对照组相比,100 nmol/L GW501516干预PASMCs 24 h能够显著上调PPARδ的表达,而低氧可显著下调PPARδ的表达(P＜0.01);与低氧组相比,100 nmol/L GW501516干预24 h后能够显著抑制PASMCs增殖与DNA的合成(P＜0.01),增加处于G0/G1期的PASMCs比例,明显减少S期和G2/M期的PASMCs比例(P＜0.05 或P＜0.01),显著抑制Cyclin D1 mRNA的表达并促进p27 mRNA的表达(P＜ 0.01),显著抑制AKT与GSK3β磷酸化(P＜0.01),而与100 nmol/L GW501516低氧组相比,AKT激动剂SC79能够逆转100 nmol/L GW501516 上述作用(P＜0.05或P＜0.01)。结论: GW501516通过抑制AKT/GSK3β信号通路抑制低氧条件下PASMCs增殖。     

长链非编码RNA Linc00673过表达对胃癌MGC-803细胞增殖与凋亡的影响*

目的: 探讨长链非编码RNA Linc00673过表达对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法: 将重组慢病毒表达质粒pLVX-Linc00673和对照空载体质粒pLVX-NC在293T细胞中进行慢病毒包装与扩增,将重组慢病毒转染胃癌细胞MGC-803建立稳定过表达 Linc00673的细胞系,实时荧光定量PCR方法检测Linc00673基因的表达; MTT实验和克隆形成实验观察细胞的生长增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;qPCR检测细胞周期相关调控基因表达;免疫印迹法检测PI3K/Akt信号通路关键分子及肿瘤增殖相关蛋白的表达。结果: Linc00673在胃癌细胞系MGC-803、BGC-823和AGS中的表达量显著高于正常胃粘膜细胞GES-1(P＜0.05)。建立了稳定过表达Linc00673的MGC-803细胞系,Linc00673的表达量比对照空载体组高200倍。Linc00673过表达促进MGC-803细胞增殖和克隆形成(P＜0.05),抑制细胞凋亡并影响细胞周期G1→S期进程(P＜0.01);Linc00673过表达可影响MGC-803细胞周期调节基因CCNG2、p19和CDK1的表达;免疫印迹结果显示,Linc00673过表达不仅促进PI3K/Akt信号通路关键分子pAKT及其下游靶点NF-κB和Bcl-2蛋白的表达,而且上调肿瘤相关因子β-catenin和EZH2蛋白的表达。结论: Linc00673过表达可能通过PI3K/Akt信号通路促进MGC-803细胞增殖、抑制凋亡。     

新型精胺氧化酶抑制剂SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞增殖和上皮细胞间质化的影响*

目的: 研究新型精胺氧化酶(SMO)小分子抑制剂SI-4650对人卵巢癌SKVO-3细胞增殖和上皮细胞间质化影响及其分子机制。方法: 体外培养SKVO-3细胞,以未加药作为对照组,30、60 μmol/L SI-4650处理48 h细胞为实验组,每组设3个复孔,检测SI-4650对SKVO-3细胞内SMO的酶活性及多胺含量、酶促反应产物活性氧水平的影响,对细胞增值、周期、线粒体膜电位的作用,以及对细胞凋亡、侵袭和迁移能力的影响,同时检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase3以及上皮细胞间质化(EMT)相关蛋白E-Cad、N-Cad、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达。结果: 与对照组相比,实验组SKVO-3细胞中SI-4650浓度增加,明显抑制SKVO-3细胞内SMO酶活性(P＜0.01)、减少SMO酶促反应产物活性氧水平(P＜0.01)、降低细胞内总多胺含量(P＜0.01)。SI-4650高效抑制SKVO-3细胞生长(P＜0.01),实验组细胞生长抑制率分别为32.27%、47.31%;将SKVO-3细胞阻滞在S期(P＜0.01),实验组细胞 Bax表达和Caspase3活化剪切增加,Bcl-2表达减少,线粒体膜电位下降,凋亡细胞比率增加至31.41%、43.51%;同时,实验组E-cad表达显著增加,N-cad、Vimentin表达均明显减少,合成分泌MMP-2、MMP-9减少,干扰了SKVO3细胞EMT进程,降低肿瘤细胞侵袭、迁移能力(P＜0.01)。结论: SI-4650对人卵巢癌SKVO-3 细胞具有杀伤和抑制肿瘤细胞侵袭、迁移的抗肿瘤活性,其机制可能与干扰多胺代谢、诱导细胞S周期阻滞和线粒体途径细胞凋亡以及干扰细胞EMT进程相关。     

miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemES增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-125b-5p对人血管瘤内皮细胞HemECs增殖、凋亡的影响.方法:RT-qPCR检测人血管瘤内皮细胞HemECs及其旁系组织细胞中miR-125b-5p与MCL-1 mRNA的表达;选取HemECs细胞分为对照组、miR-NC 组、miR-125b-5p mimic 组、miR-125b-5p in...     

PD-L1对细菌脓毒症免疫抑制的影响及其机制*

目的:探讨在脂多糖(LPS)所致细菌脓毒症免疫抑制中树突状细胞(DCs)程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)的表达情况及其相关信号通路。方法:细菌脂多糖刺激骨髓来源树突状细胞诱导淋巴细胞免疫抑制模型,实验分为5组:对照组(Con)、脂多糖组(LPS)、2-(4-吗啉基)-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮+脂多糖组(LY294002+LPS)、吡咯烷二硫代甲酸铵盐+脂多糖组(PDTC+LPS)和脂多糖+封闭PD-L1组(LPS+αPD-L1)。小鼠骨髓来源单核细胞用含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF 10 ng/ml)和白介素4(rmIL-4 1 ng/ml)的10%胎牛血清1640培养基于CO₂培养箱37℃静置培养4 d后,LPS(10 ng/ml)处理DCs静置12 h获得PD-L1高表达的DCs作为免疫抑制刺激细胞。通路抑制剂LY294002(10 μmol/L)、PDTC (20 μmol/L)作用1 h阻断PI3K和NF-κB信号。采用流式细胞分析、激光共聚焦显微成像检测LPS诱导树突状细胞PD-L1表达及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶B (PI3K/AKT) 信号通路活化情况;BrdU细胞增殖实验和γ-干扰素酶联免疫斑点实验检测LPS诱导树突状细胞PD-L1表达上调对抗原特异性T细胞增殖反应及细胞毒性T细胞杀伤作用的影响。结果:与对照组比较,LPS组DCs表面PD-L1阳性细胞百分比升高(P＜0.01),PD-L1荧光信号强度增强,且主要分布于细胞表面和细胞质,DCs介导的T细胞增殖水平降低(P＜0.01),γ-干扰素斑点形成细胞数下降(P＜0.01)。与LPS组比较,LY294002+LPS组、PDTC+LPS组和LPS+αPD-L1组PD-L1荧光信号强度降低,T细胞增殖水平升高(P＜0.01),γ-干扰素斑点形成细胞数上升(P＜0.01),改善树突状细胞介导的T细胞免疫抑制现象。 结论:PD-L1是介导脂多糖所致细菌脓毒症免疫抑制的关键分子,PI3K信号、NF-κB信号也参与此免疫抑制过程。     

利格列汀对小鼠脑缺血/再灌注损伤的神经保护作用*

目的: 评估二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂利格列汀对小鼠脑缺血/再灌注(I/R)损伤的神经保护作用。方法: BALB/c小鼠随机分为Sham组、I/R组和利格列汀(2.5、5和10 mg/kg) +I/R组,每组均为8只小鼠。不同剂量利格列汀组小鼠均在I/R前3周连续灌胃给药。采用小鼠脑中动脉闭塞(MCAO)1 h诱导I/R损伤模型,再灌注24 h评估神经功能缺损(n=8)和及梗死体积(n=4);再灌注48 h处死小鼠,检测脑组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、磷酸化肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶 B(p-Akt)和雷帕霉素靶蛋白(mTOR)含量(n=4)。结果: 与I/R组相比,利他列汀预处理组小鼠再灌注24 h后,神经功能缺损评分和梗死体积明显降低(P＜0.05);小鼠再灌注48 h后,脑内MDA含量明显降低(P＜0.05),而GSH、PI3K、p-Akt和mTOR水平明显升高(P＜0.05)。结论: 利格列汀对I/R小鼠具有神经保护作用,可能是通过激活PI3K/AKT/mTOR通路发挥的作用。     

厚朴酚联合吉非替尼对A549非小细胞肺癌细胞的干预作用*

目的: 探讨厚朴酚与吉非替尼协同影响非小细胞肺癌A549细胞的作用。方法: 以浓度为6.25～500 μmol/L厚朴酚、0.625～100 μmol/L吉非替尼分别处理A549细胞24 h,CCK-8实验检测细胞活力 (n=3),选24 h及100 μmol/L厚朴酚与5 μmol/L吉非替尼作后续处理(n=3);采用对照组、厚朴酚组、吉非替尼组和厚朴酚+吉非替尼组的析因分析设计;克隆形成检测细胞增殖;蛋白印迹测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡及分选CD44⁺和CD133⁺细胞。结果: 与对照组比,厚朴酚和吉非替尼组的克隆形成率显著降低(P＜0.05);凋亡率显著升高(P＜ 0.05);CD44⁺和CD133⁺细胞数量显著减少(P＜0.05);Ki67和PCNA及干细胞标记蛋白SOX2和OCT4表达显著下调(P＜0.05);Bax/Bcl-2表达比例显著上调(P＜0.05)。与厚朴酚组或吉非替尼组比较,厚朴酚+吉非替尼组进一步促进了上述改变(P＜0.05),且凋亡率、Bax/Bcl-2、SOX2和OCT4等指标都存在厚朴酚和吉非替尼的交互作用(P＜ 0.05)。结论: 厚朴酚与吉非替尼促进A549细胞凋亡和抑制其干细胞样特性,且联合用药效果优于单一给药。二者对A549细胞的抑癌作用有交互影响。