岸蟹（Carcinus maenas）金属硫蛋白cDNA及其基因的克隆

利用已知的Ｃ．ｍａｅｎａｓ金属硫蛋白氨基酸序列资料,用全简并的ＰＣＲ引物,从鳃组织总ＲＮＡ中扩增出两种金属硫蛋白ｃＤＮＡ片断,并将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体中,序列测定表明,其中一种ｃＤＮＡ片断核苷酸序列和推知的Ｃ．ｍａｅｎａｓ金属硫蛋白核苷酸序列完全吻合;另一种ｃＤＮＡ片断则在３’端有较大变异。根据前者ｃＤＮＡ片段序列设计特异性引物,扩增并克隆了其编码区全长ｃＤＮＡ和其编码基因,测序结果表明,岸蟹     

概述DNA测序技术的现状及进展

概述ＤＮＡ测序技术的现状及进展邓炜,柴建华（复旦大学遗传研究所,上海２００４３３）关键词ＤＮＡ测序自１９７７年Ｓａｎｇｅｒ建立“ＤＮＡ双脱氧链未端终止测序法”以来,ＤＮＡ序列测定已成为实验室中常规技术。Ｓａｎｇｅｒ因此而第二次荣膺诺贝尔奖。由于有了成...     

用温度循环法测定扩增DNA的序列比较汉坦病毒同型间的核酸序列

用温度循环法测定扩增ＤＮＡ的序列比较汉坦病毒同型间的核酸序列作者应用温度循环测序法对汉坦病毒血清型特异性引物扩增所得的ＰＣＲ产物进行序列测定以确定同一血清型几株病毒间序列的相似水平。测序用模板为上游引物和下游引物之间,测得的２８２,２６４和２９１个碱...     

两株中国腮腺炎野毒SH基因cDNA直接测序和克隆测序

对来源于兰州和上海两市的两株腮腺炎病毒野毒的小疏水蛋白（ＳＨ）基因及其旁侧区ｃＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物,分别进行直接测序和克隆测序。用直接测序法测定２株腮腺炎野毒３７８个核苷酸序列,在此范围内存在１６个核苷酸（４．２％）差异,其中１１个（２．９％）位于编码区序列中,所推导的ＳＨ蛋白序列有６个氨基酸（１０．５％）差异。克隆测序法测定的这两株腮腺炎野毒的核苷酸序列相当于直接法的７８－３７８位核苷酸。两处     

发展中的DNA测序技术

发展中的ＤＮＡ测序技术赵晓娟刘金毅综述蔡有余琦祖和＊审校（中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所北京）ＤＮＡ序列分析是基因工程和分子生物学领域最重要的技术之一,是了解基因结构和功能的基础。“人类基因组计划”（ｈｕｍａｎｇｅｎｏｍｅｐｒｏｊｅｃｔ）的实施,有力地推动了高速ＤＮＡ测序技术的发展。除经典的测序方法在技术环节上的不断改进外,近年来发展了一些全新的ＤＮＡ测序方法,如毛细管凝胶电泳...     

中国5种珍稀绢蝶非损伤取样的mtDNA序列及系统进化

应用非损伤性取样ＤＮＡ测序技术测定了４种来自云南白马雪山和１种来自新疆天山的５种珍稀绢蝶的线粒体ＤＮＡ细胞色素ｂ基因部分ＤＮＡ序列。在获得的４３３ｂｐ的序列中,Ａ＋Ｔ约占７５．４％,其中４０个核苷酸位点存在变异（约９．２４％）。ＤＮＡ一级序列数据显示,该５种绢蝶间ＤＮＡ序列变异丰富。ＰＡＵＰ３．１．１（简约法）数据分析软件构建该５个种绢蝶的分子系统树显示,爱珂绢蝶和巴裔绢蝶的亲缘关系比较接近,阿波     

PCR法在未知cDNA克隆与序列测定中的应用研究

 ＰＣＲ法在未知ｃＤＮＡ克隆与序列测定中的应用研究邢桂春,贺福初,杨晓明,吴祖泽（北京军事医学科学院放射医学研究所,北京１００８５０）目前,新型蛋白质克隆的最有效途径乃先构建ｃＤＮＡ文库,然后筛选、分离其ｃＤＮＡ再行亚克隆、测序。为克隆人新型肝细胞生长...     

微生物全基因组测序研究进展

本文综述了近年来大规模微生物基因组核酸序列测定的最新研究进展,介绍微生物全基因组测序的基本方法、序列的收集组装,序列缺口的填补,以及序列资料的计算机分析整理。大规模基因组测序完成后,未来面临的更大挑战是在ＤＮＡ序列基础上认识微生物的完整生物学功能。为此本文也介绍了有关基因功能分析的新技术,并对微生物基因组功能分析的未来发展作了展望。     

小鼠金属硫蛋白ⅠcDNA编码序列的克隆及其在昆虫细胞中的表达

将质粒ＰＢＸ－ＭＴ上的小鼠ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ片段切下作为模板,通过ＰＣＲ方法删除该片段的非编码序列,将编码序列克隆到质粒ＰＢＳ－ＳＫ中,经ＤＮＡ序列测定后证明其克隆序列正确,再将ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ编码序列插入到转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８的ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ位点之间,通过磷酸钙／ＤＮＡ共转染方法将其导入昆虫细胞Ｓｆ９中,以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ和ＤｏｔＥＩＡ方法对表达产物进行了检测,表达量为１ｍｇ＝     

DNA序列分析技术及其现状

ＤＮＡ序列分析技术一直是分子生物学领域的一个重要研究课题。“人类基因组计划”的实施有力地推动了高速ＤＮＡ测序技术的发展。本文主要介绍国内外目前流行的经典的测序方法———各种改良的双脱氧链末端终止法,及近年来发展起来的一些全新的ＤＮＡ测序方法     

DNA自动测序技术进展

ＤＮＡ测序是遗传工程的重要技术之一,ＤＮＡ测序技术的自动化对遗传工程的研究具有重要意义。七十年代末期,Ｓａｎｇｅｒ和Ｍａｘａｍ,Ｇｉｌｂｅｒｔ分别提出了切实可行的ＤＮＡ序列测定方法。近二十年来,ＤＮＡ测序技术发展很快。人们从不同方面对该技术进行了改进,并将许多先进的光学探测方法应用于ＤＮＡ测序技术中。目前已出现了许多商品化的ＣＮＡ测序仪。     

银环蛇神经毒素的分子克隆和功能表达(英文)

抽提银环蛇毒腺总ＲＮＡ,通过反转录ＰＣＲ技术扩增出其神经毒素ｃＤＮＡ,克隆并测定了全序列。银环蛇神经毒素的ｃＤＮＡ编码２１个氨基酸的信号肽和７４个氨基酸的成熟蛋白。该信号肽非常类似于短链神经毒素、κ－神经毒素和心脏毒素的信号肽。而成熟蛋白的氨基酸序列与从台湾产银环蛇中通过蛋白测序鉴定的α－ｂｕｎｇａｒｏｔｏｘｉｎ的氨基酸序列完全一样。此外,还克隆到该神经毒素缺失前体ｃＤＮＡ。利用麦芽糖结合蛋白融合     

苎麻疫霉激发蛋白基因断裂现象初探

苎麻疫霉可分泌具有诱抗作用的激发蛋白（α－ｅｌｉｃｉｔｉｎ）,根据α－ｃｌｉｃｉｔｉｎ第２４￣３０和５６￣６３位保守区氨基酸推导的寡核苷酸引物序列,对苎麻疫霉基因组ＤＮＡ进行特异ＰＣＲ扩增反应,发现其扩增的ＤＮＡ片段大于预计的片段。回收纯化的特异扩增ＤＮＡ,并进行克隆和测序分析,结果表明特异扩增的ｃｌｉｃｉｔｉｎ基因亚克隆ＤＮＡ为５７０ｂｐ,大于预计的１１７ｂｐ。在特异片段中,存在３个内含子将基因     

人基因组表达图谱分析和疾病相关基因搜寻──现状与展望(续前)

人基因组表达图谱分析和疾病相关基因搜寻──现状与展望（续前）康毅滨,柴建华（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）二、ｃＤＮＡ随机部分ｆ三、测序及ＥＳＴ的建立以上所讨论的方法均是从基因组ＤＮＡ出发寻找表达序列,与之恰好相反的另一种构建表达图的思路是随机挑选ｃＤＮＡ文库中的克隆进行测序并在染色体上定位,即ｃＤＮＡ策略。人类基因组计划的一个重要目标是获得人基因组３０亿个碱基对的顺序,而以目前的测序技术要在近期内完成这一目标还略显力不从心。     

线型扩增法测定DNA序列

线型扩增法测定ＤＮＡ序列ＳｈｅｉｌａＭ．ＡｄａｌｍｓＲｏｂｅｒｔＢｌａｋｅｓｌｅｙ著／李络红译／申宗候校就象流行的Ｍ１３单链ＤＮＡ测序一样现有一种ＤＮＡ双链的双脱氧测序法。直接从质粒克隆测序节时省功,既勿需用Ｍ１３为载体制备亚克隆又不必生产噬质粒斑来...     

小鼠金属硫蛋白 Ⅰ cDNA编码序列的克隆及其在昆虫细胞中的表达

将质粒ｐＢＸ－ＭＴ上的小鼠ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ片段切下作为模板,通过ＰＣＲ方法删除该片段的非编码序列,将编码序列克隆到质粒ｐＢＳ－ＳＫ中,经ＤＮＡ序列测定后证明其克隆序列正确．再将ＭＴ－ⅠｃＤＮＡ编码序列插入到转移载体ｐＢａｃＰＡＫ８的ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ位点之间,通过磷酸钙／ＤＮＡ共转染方法将其导入昆虫细胞Ｓｆ９中,以Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＤｏｔＥＩＡ方法对表达产物进行了检测,表达量为１ｍｇ／Ｌ     

用差异显示法从人胎脑基因文库分离一个编码序列

人１８周、２２周胎儿脑、肝肾组织总ｍ ＲＮＡ 用ＤＤＲＴ－ＰＣＲ显示出差异的条带,回收胎脑和肝肾特异性表达的４８７条电泳条带．其中某些条带用３种组织的ｃＤＮＡ 探针作点杂交,筛选只对胎儿脑总呈阳性的ＤＮＡ 片段．以其中某一条带ＤＮＡ 为探针,从胎儿脑ｃＤＮＡ 文库筛选阳性克隆,得到ＧＣ５８．经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交和ＤＮＡ 测序,表明它是人脑表达的序列,与数据库中ＫＩＡＡ０５１５有同源性,并编码一个有２７４个氨基酸的蛋白质,该蛋白质序列尚未见报道．探讨了ＤＤＲＴ－ＰＣＲ的条件和假阳性问题．     

山姜属中药草豆蔻和益智nrDNA ITS区序列的测定

中药草豆蔻、益智的原植物分别为山姜属草豆蔻（Ａｌｐｉｎｉａ ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ Ｋ．Ｓｃｈｕｍ．）与益智（Ａ．ｏｘｙｐｈｙｌａ Ｍｉｑ．）。本文采用ＰＣＲ直接测序法,首次测定了它们的核糖体ＤＮＡ ＩＴＳ区序列。结果显示,两者序列长度（ＩＴＳ１＋ＩＴＳ２）分别为４０３ｂｐ与４０４ｂｐ,序列间具有２７个变异位点（包括５．８Ｓ编码区）。本研究为山姜属中药材的ＤＮＡ分子鉴定提供了必要的序列资料。     

双链DNA模板循环测序的研究

采用末端标记引物进行双链ＤＮＡ循环测序是实验室快速,准确获得双链ＤＮＡ模板序列的有效方法。实验结果表明：该测序法不仅能消除由于模板不纯所导致的引物的非特异性结合等因素而产生的非特异条带,而且能降低ＰＣＲ产物测序的背景问题。     

黄瓜花叶病毒香蕉株系的衣壳蛋白基因克隆和序列分析

对侵染香蕉的黄瓜花叶病毒广东３个株系的衣壳蛋白（ＣＰ）基因,进行了克隆和序列分析,以提纯病毒ＲＮＡ为模板,应用ＲＮＡ反转录酶（ＡＭＶ）合成ＣＰ基因ｃＤＮＡ再用ＴａｑＤＮＡ聚合酶进行ＰＣＲ扩增,通过常规基因克隆法扩增的ＣＰ基因克隆入载体,选取每一株系的ＣＰ基因与载体表面方向相同和相反的各一个克隆,进行插入片段的全序列分析,结果表明,每一重组克隆测序长约７５０个核苷酸,任一株系其插入方向相反的两个重组