电针对局灶脑缺血／再灌注模型大鼠缺血海马区血管再生的影响及其机制

目的：探讨电针促进局灶脑缺血/再灌注后缺血海马区血管再生的机制。方法180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、CXCR4特异性拮抗剂AMD3100药物组、AMD3100＋电针组。线栓法制备右侧局灶脑缺血/再灌注模型。取大鼠“百会”穴（ GV 20）及左侧“四关”穴（合谷LI 4/太冲LR 3）为电针穴位,刺激时间为30 min/d。采用逆转录聚合酶链反应法（ RT-PCR）检测各组缺血海马区SDF-1α、CXCR4 mRNA表达,免疫荧光双标法检测CD34＋VEGFR2＋EPCs源性血管的表达。结果与假手术组比较,模型组与电针组SDF-1α、CX-CR4 mRNA表达明显增高（P＜0.05）,其中电针组各时间点相对模型组增高更为显著（P＜0.05）。 AMD3100＋电针组缺血海马SDF-1α、CXCR4 mRNA表达在再灌注后1 d时明显高于电针组（ P＜0.05）,但后逐渐下降,7 d时明显低于电针组（ P＜0.01）。与模型组比较,电针组再灌注3 d、7 d海马CD34＋VEGFR2＋EPCs源性血管表达明显增多（ P＜0.05）。与电针组比较,AMD3100＋电针组再灌注后7 d CD34＋VEGFR2＋EPCs源性血管表达明显下降（ P＜0.01）。 CD34＋VEGFR2＋血管表达变化与SDF-1α的表达变化显著相关（R＝0.784,P＜0.01）。结论电针可通过上调局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血海马区SDF-1α/CXCR4的表达,促进血管再生。     

电针对大鼠局灶性脑缺血后脑内Bax,Bcl-2表达的影响

为了探讨 bcl- 2基因家族成员 bax,bcl- 2的表达产物 Bax、 Bcl- 2与电针抗缺血脑损伤的关系。本实验采用改良线拴法制备大鼠大脑中动脉 (MCA )阻塞 -再灌注模型 ,并用 TTC及 HE染色观察缺血及电针后梗塞灶的变化 ,用免疫组织化学方法对大鼠局灶性脑缺血组织内 Bax,Bcl- 2免疫阳性细胞的分布及电针对该分布的影响进行观察。发现 :1.行为生理学观察 :电针组大鼠神经缺损 Bederson综合评分明显低于缺血组综合评分 (P<0 .0 5 ) ;2 .TTC染色表明梗塞灶中心位于尾壳核 ,累及大脑皮层 ;HE染色计算缺血组梗塞灶体积为 74.72± 3.6 7m m3,电针组为 5 2 .6 6± 1.81mm3,两组间有显著性差异 (P<0 .0 1) ;3.大鼠 MCA阻塞 30 m in再灌注 48小时后 ,缺血组及电针组梗塞灶中心 (尾壳核 )偶见 Bax及 Bcl- 2免疫阳性细胞 ;缺血组半影区 Bax阳性细胞数量显著增加 (P<0 .0 1)。 Bcl- 2免疫阳性细胞数反应性上调 (P<0 .0 5 ) ;电针组半影区 Bax的表达与缺血组相比下调 (P<0 .0 5 ) ,但仍高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;Bcl- 2的表达与缺血组之间无差异显著性。海马 CA1区神经元 Bax,Bcl- 2的表达在各组间均无显著性差异。结果表明电针有抗缺血脑损伤的效应 ,其分子机制之一可能是通过下调半影区 Bax的表达而相对降低 Bax/Bcl- 2比     

大鼠局灶性脑缺血后扩布性阻抑的发作及电针对其影响

目的：观察Wistar大鼠局灶性脑缺血后扩布性阻抑（SD）的发作情况及缺血后电针的影响。方法：线检法闭塞大鼠大脑中动脉,制备局灶性脑缺血模型。用神经电生理、神经病理等方法检测局灶性脑缺血后3h内SD发作情况及电针“合谷”穴（LI4）对SD的影响。结果：电针可减少局灶性脑缺血时SD的发作。结论：电针减少局灶性脑缺血时SD的发作,可能与电针缩小局灶性脑梗塞体积有关。     

大鼠局灶性脑缺血模型的有效制备

目的比较三种不同手术方法制作大鼠永久性脑缺血模型的效果,包括死亡率、神经功能评分、脑梗死体积、手术效率。方法将采用不同手术方法制备脑缺血模型的大鼠随机分为三组。1组在术中分别结扎颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、枕动脉、翼腭动脉,并且用动脉夹对颈内动脉（ICA）进行临时夹闭;2组在术中分别结扎颈总动脉、颈外动脉,暴露枕动脉和翼腭动脉但不结扎,用丝线悬挂颈内动脉而不是用动脉夹夹闭,线栓在显微镜直视下插入颈内动脉越过翼腭动脉起始点至大脑中动脉分叉处;3组只暴露颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,结扎颈总动脉、颈外动脉,丝线悬挂颈内动脉,显微镜下将线栓盲插至颈内动脉大脑中动脉分叉处。分别检测三组模型的死亡率、神经功能评分、梗死体积、手术时间。结果第3组制作动物模型的方法所花费时间平均为17.5 min,死亡率较低,神经功能评分及梗死体积稳定。结论采用第3组手术方法可以缩短手术时间,提高手术效率,能够高效地制作出更加稳定的可用于临床实验的大鼠脑缺血模型。     

厄贝沙坦对局灶脑缺血作用的实验研究

目的：研究1型血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂厄贝沙坦对局灶性脑缺血的神经保护作用及其可能的细胞机制。方法：在激光多谱勒脑血流监测仪对局部脑血流的监测下,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型。药物经侧脑室内微泵持续灌注雄性正常血压大鼠,术后行神经功能评分,测定梗死体积,并运用免疫组化染色观察活性Caspase-3及其下游多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）p85裂解片断的改变,结合TUNEL,比较各组细胞凋亡情况。结果：厄贝沙坦明显改善大鼠的神经功能评分,第7d的梗死体积较对照组减少了42％,用药后缺血区的TUNEL阳性细胞数．荧光标记的活性Caspase-3以及PARP p85裂解片断表达均明显减少。结论：厄贝沙坦可改善局灶脑缺血的神经功能,抑制细胞凋亡可能是其神经保护机制之一。     

局部亚低温联合硫酸镁对局灶性脑缺血大鼠的保护作用

目的:探讨联合应用局部亚低温(32-35℃)及硫酸镁对局灶性脑缺血大鼠的保护作用及其可能机制。方法:通过线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,将40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、常温组、亚低温组、硫酸镁组、亚低温+硫酸镁组,每组8例,采用Longa神经功能评分、TTC染色、TUNEL技术,检测和比较各组脑缺血后大鼠的神经功能、脑梗死体积、凋亡细胞数。结果:与常温组相比,亚低温组与亚低温+硫酸镁组的梗死体积、神经功能评分、凋亡细胞数均明显降低,差异有显著意义(P0.05);而与亚低温组相比,亚低温+硫酸镁组局灶脑缺血大鼠的脑梗死体积、神经功能评分、凋亡细胞数均显著减少,差异有显著意义(P0.05)。结论:与单独应用亚低温相比,局部亚低温与硫酸镁联合应用,对局灶性脑缺血大鼠可发挥更有效的脑保护作用,其机制可能与抑制脑缺血后凋亡有关。     

高压氧对局灶性脑缺血后细胞凋亡的影响及其机制

目的：观察不同时间点高压氧（HBO）治疗对短暂性脑缺血的作用,并探讨其对细胞凋亡的影响。方法：在客观监测局部脑血流的条件下,大鼠经历短暂脑缺血后3h,6h,12h应用HBO治疗,24h后行神经功能评分和梗死体积测定,免疫组化染色各组Bcl-2、Bax、活性Caspase-3、活性Caspase-9以及TUNEL法检测细胞凋亡。结果：缺血后3h HBO治疗减少70％梗死体积,缺血后6hHBO治疗则减少梗死体积约44％,早期应用HBO治疗增加半暗带区细胞内Bcl-2的表达,减少活性Caspase-9和活性Caspase-3以及TUNEL阳性细胞数;缺血后12h应用HBO治疗却恶化神经功能,扩大梗死范围,而对上述凋亡各指标无影响。结论：HBO治疗短暂性局灶脑缺血具有时间窗,应争取在缺血后6h内应用HB0治疗,其早期治疗的神经保护作用与抑制细胞凋亡有关。     

针刺穴位对脑缺血再灌注大鼠脑内NMDA R1 mRNA的影响

采用大鼠大脑中动脉栓塞为局灶性脑缺血模型,以针刺穴位为治疗手段,用原位杂交技术显示NMDAR1 mRNA,探讨单纯缺血,缺血加电针治疗后脑内NMDAR1mRNA的变化,并用谷氨酸或MK－801兴奋或桔抗NMDA受体。观察对便塞灶的影响。探讨NMDA受体在脑缺血脑损伤中的作用。结果显示：（1）谷氨酸能显著增大脑梗塞面积,电针能明显缩小梗塞面积,MK－801与电针作用相似,也能缩小梗塞面积,与对照组相比,谷氨酸组,电针组和MK－801组均有显著性差异;（2）缺血侧海马及大脑皮层NMDAR1 mRNA阳性细胞明显高于对照侧,两者间有显著性差异（P＜0.01）;经电针治疗后,NMDAR1 mRNA无过表达现象,海马及大脑皮层缺血侧NMDAR1 mRNA阳性细胞数与对照侧相比无显著性差异,但明显低于单纯缺血组（P＜0.01）。以以结果表明,谷氨酸介导的缺血性脑损伤的机制之一是通过NMDAR1 mRNA的过表达而实现的,电针对脑缺血性神经元损伤的保护作用可通过抑制NMDAR1 mRNA的过表达而实现。     

莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤神经功能的影响

目的观察中药山茱萸的有效成分莫诺苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经功能的影响。方法Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、莫诺苷小剂量组（30 mg/kg）、莫诺苷中剂量组（90 mg/kg）、莫诺苷大剂量组（270 mg/kg）、维生素E（VE）（35 mg/kg）,采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血30 min后再灌注3 d,应用Zea Longa法、爬网格、平行木、吊绳、Ludmila Belayev 12分评分法,观察莫诺苷对神经功能缺损的改善作用。结果与模型组比较,莫诺苷给药组（小、中、大剂量）Zea Longa法评分均差异极显著（P〈0.01）;与模型组比较,莫诺苷给药组（小、中、大剂量）吊绳法评分均差异极显著（P〈0.01）;Ludmila Belayev 12分评分法评分与模型组比较,莫诺苷大剂量组差异极显著（P〈0.001）,中剂量组差异极显著（P〈0.01）。结论莫诺苷对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠有改善行为学评分的作用。     

线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型手术操作的研究进展

线栓法大鼠大脑中动脉阻塞模型被普遍认为是标准的大鼠局灶性脑缺血动物模型。该模型在制备过程中,易受到多重因素的影响,其中手术操作对模型的成功制作起着关键作用。文章从大鼠颈部主要动脉的解剖位置、手术切口位置的选择、手术左右侧别的选择,以及插线位置的选择进行了综述。     

电针对脑缺血神经元凋亡影响的形态学研究

为了探讨针刺治疗“脑卒中”的机制,本研究以大鼠一侧大脑中动脉栓塞后再灌注为动物模型,分别以ＴＵＮＥＬ法和ＰＩ染色法观察电针改善脑缺血性神经元凋亡的情况。结果显示：①局灶性脑缺血能诱导神经元凋亡：缺血侧凋亡神经元数目明显多于对照侧,差异非常显著;②电针能明显抑制神经元凋亡：电针治疗组缺血侧梗塞区凋亡神经元数目明显减少。本文表明电针能抑制脑缺血性神经元凋亡。     

自发性高血压鼠脑底动脉神经肽Y能神经纤维的起源

应用免疫组织化学ABC法和神经节切除术,观察了16只自发性高血压鼠（分手术Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组）脑底动脉主要分支神经肽Y能神经纤维的起源,对照组自发性高血压鼠大脑前动脉,大脑中动脉,大脑后动脉和基底动脉壁上均可见棕褐色的神经肽Y能阳性纤维,纤维似曲线状,多呈网状走行,密度较高,手术Ⅰ组作双侧颈上神经节切除术,脑底动脉主要分支的阳性纤维明显减少,但不完全消失,手术Ⅱ组作双侧星状神经节切除术,脑底动脉主要分支壁上的阳性纤维明显减少;手术Ⅲ组作双侧颈上神经节和星状神经节切除术,脑底动脉主要分支的阳性纤维完全消失,结果提示;自发性高血压鼠脑底动脉主要分支神经肽Y能神经纤维起源于双侧颈上神经节和星状神经节,讨论了NPY神经在高血压时期在防御脑中风和血脑屏障破裂方面所起的作用。     

L-NNA对大鼠急性脊髓损伤的影响

实验采用雌性 Wistar大鼠 41只 ,分为正常对照组、生理盐水对照组和 L - NNA治疗组 ,后两组制成不完全性(2 18克厘米力 )急性脊髓 (第 10胸髓 )损伤模型 ,于术后每天一次腹腔注射 L - NNA (2 0 m g/ kg)或等量生理盐水 ,连续四周 ,然后处死动物 ,行脊髓 NOS染色和超微结构观察。结果显示 ,L - NNA治疗组脊髓 NOS阳性神经元染色较生理盐水对照组浅 ,两组光密度比较 P<0 .0 5 ;超微结构观察 ,生理盐水对照组脊髓神经元胞质呈空泡样变 ,线粒体等细胞器变性 ,髓鞘严重变形 ,少数髓鞘呈线团状改变 ,常伴有高电子密度的块状沉积物。但 L - NNA治疗组脊髓神经元及大部分神经纤维的髓鞘结构清晰。因此我们认为 ,大鼠急性脊髓损伤可诱导神经元 NOS表达 ,L - NNA对其损伤修复起促进作用。     

维拉帕米对缺血后大鼠视网膜NOS阳性神经元的影响

实验用 β- NADPH脱氢酶组织化学染色研究维拉帕米对缺血后大鼠视网膜 NOS阳性神经元的影响。结扎双侧颈总动脉使视网膜缺血 ,3小时后松结复流。分别于缺血前 15分钟和再灌流前 1分钟腹腔注射维拉帕米 (5 m g/kg/次 ) ,对照组腹腔注射等量生理盐水。动物存活 3天后取视网膜进行 β- NADPH组化反应。结果表明 :视网膜缺血后 NOS阳性神经元减少 ,并出现 i NOS阳性细胞。在缺血前后应用维拉帕米可使视网膜内 NOS神经元较对照组显著减少 (P<0 .0 1) ,NOS神经元形态良好。说明维拉帕米减少大鼠视网膜缺血后 NOS阳性神经元 ,其相应 NO量减少 ,推测维拉帕米对大鼠缺血后视网膜功能具有保护作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注中nNOS来源的NO对细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注早期nNOS来源的NO对细胞凋亡的影响.方法闭塞大鼠左侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血模型,给予选择性nNOS抑制剂-7硝基吲唑,应用原位末端标记法及流式细胞术检测缺血2h再灌注6h细胞凋亡的变化.结果 50mg/kg、25mg/kg剂量的7硝基吲唑可使1、NO含量显著降低.2、NT阳性细胞荧光强度及阳性细胞百分比显著减少.3、TUNEL阳性细胞明显减少.4、细胞凋亡百分率降低,AP峰降低.结论 nNOS来源的NO参与介导脑缺血再灌注早期的细胞凋亡.     

自发性高血压鼠脑底动脉单胺能神经起源的观察——免疫组织化学法研究

应用免疫组织化学ＡＢＣ法和颈上神经节切除术,观察了１５只自发性高血压鼠（ＳＨＲ）（分手术Ⅰ组、手术Ⅱ组和对照组）脑底血管主要动脉单胺能神经纤维的起源。对照组自发性高血压鼠脑底主要动脉分支,大脑前动脉、大脑中动脉和大脑后动脉均可见棕褐色的免疫反应阳性纤维。手术Ⅰ组作左侧颈上神经节切除术,同侧大脑前动脉、大脑中劝脉和大脑后动脉的免疫反应阳性纤维明显减少,对侧各同部位血管的阳性纤维也有减少;手术Ⅱ组作双侧颈上神经节切除术,双侧大脑前动脉、大脑中动脉和大脑后动脉的免疫反应阳性纤维基本消失。结果提示：自发性高血压鼠脑血管一侧颈内动脉系各主要动脉分支的交感神经纤维,起源于双侧颈上神经节。讨论了颈上神经节切除对探讨高血压病的发病机理可能的作用。     

大鼠脑缺血再灌注后神经元和星形胶质细胞凋亡的比较研究

目的比较研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经元和星形胶质细胞的凋亡规律。方法建立大鼠大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,在缺血再灌注后1、3、7、14d断头取脑,应用流式细胞分选技术和原位末端标记法分别检测各组MCAO后不同时期神经元和星形胶质细胞凋亡情况。结果局灶性脑缺血再灌注后,海马区星形胶质细胞凋亡数量超过神经元,其凋亡以再灌注3d最为显著,而神经元则以7d最为显著;而皮层区神经元凋亡数量超过星形胶质细胞,两种细胞凋亡均在再灌注后7d达高峰。结论脑缺血再灌注后,皮层和海马区的神经元及星形胶质细胞均可发生凋亡,海马区星形胶质细胞比皮层区更易凋亡,而皮层区神经元比海马区更易凋亡。     

细胞周期抑制剂对大鼠局灶性脑缺血后神经元的保护作用

目的通过观察选择性细胞周期抑制剂olomoucine对局灶性脑缺血边缘区神经元凋亡的影响,以探讨细胞周期调控与神经元细胞凋亡的关系。方法建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为脑缺血组(对照组和干预组)和假手术组,采用HE染色显示梗死灶并测定其面积;应用免疫荧光化学法检测梗死灶周围神经元核心抗原(NeuN)的表达及通过TUNEL方法检测神经元凋亡;免疫印迹(Western blot)观察损伤侧皮层NeuN、周期素蛋白A(cyclin A)和周期素蛋白B1(cyclin B1)蛋白的表达。结果缺血后3d对照组梗死灶面积占脑片面积百分比值的平均值明显大于干预组(P<0.05);缺血后缺血边缘区NeuN表达减弱,对照组NeuN表达明显弱于干预组(P<0.05);缺血后梗死灶周围可见大量TUNEL阳性染色细胞,而且对照组数量明显多于干预组(P<0.05);干预组大鼠NeuN(TUNAL双标阳性表达明显弱于对照组大鼠(P<0.05);NeuN的蛋白量的表达,干预组较对照组明显增加(P<0.05),而对照组cyclin A和cyclin B1蛋白量的表达明显高于干预组(P<0.05)。结论通过对细胞周期的调控,可减少神经元凋亡和脑梗死体积,从而为缺血性脑损伤后的神经元提供一个保护作用。