分光光度法测定DNA或RNA含量

若样品纯度较高(即蛋白质、酚、琼脂糖或其他核酸的污染量不大),用紫外分光光度法即简便又准确。测定时,于260 nm与280nm两个波长下读数。通过260nm的读数可计算出样品中核酸的浓度,即10.D.260相当于50 μg/ml双链DNA,40μg/ml单链RNA或     

短梗霉黑色素的分离纯化及结构的初步分析

采用热碱提取、水煮酸沉法从短梗霉发酵液中提取得到黑色素粗品,再经DMSO萃取、酸性甲醇(pH=2)沉淀得到不含多糖和蛋白的短梗霉黑色素。此黑色素不溶于水及常规有机溶剂,可溶于碱性溶液和DMSO;离子交换色谱分析表明黑色素组分均一,出峰时间26±0.5 m in;紫外光谱谱图最大吸收峰为215 nm左右,未见蛋白(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰;红外光谱谱图具有黑色素3μm和6μm的特征吸收峰,并含大量的羟基、氨基,与核磁共振和液质联机谱图结合分析推出短梗霉黑色素可能含有酚羟基、羧基和吲哚等官能团,主要结构骨架为5,6-二羟基吲哚-羧酸和多巴醌,推断该黑色素为酪氨酸酶控制合成的真黑素。     

提取山羊免疫组织总RNA两种方法的比较研究

采用山羊不同免疫组织作为原料,以氯化钠-柠檬酸钠法与苯酚-稀盐法进行RNA提取的比较;分别确定两种方法对于不同免疫组织(肝脏、脾脏和淋巴)最大提取率分别为0.156%、0.150%、0.182%和0.142%、0.127%、0.164%。采用华特生公司蛋白质浓度检验试剂盒BCA法测定蛋白含量。定磷法测DNA含量,地衣酚显色法测RNA含量,样品用紫外分光光度计进行扫描,苯酚-稀盐法提取淋巴组织,RNA紫外吸收OD260:OD280=2.042077;氯化钠-柠檬酸钠法提取淋巴组织RNA紫外吸收OD260:OD280=2.1098。     

应用蛋白染色剂考马斯蓝D—250测定蛋白质的方法

在生物化学的研究中,普遍应用Lowry的Folin酚试剂的呈色反应,测定酶制剂的蛋白含量。由于植物材料中常含有酚类化合物,或能与Folin酚试剂起呈色反应的物质,例如有酪氨酸或色氨酸基团的小分子,往往使蛋白质的测定值比实际的高。用者马斯蓝(Coomassie Brilliant Blue)对蛋白质的染色作用,已广泛应用于蛋白质分离的凝胶电泳技术中。近来,Bradford应用考马斯G—250(Coomassie BrilliantBlueG—250)与蛋白质束缚时产生的颜色反应,发展了一种蛋白质的快速测定方法,操作方便,再现性好,测定的浓度范围在0—1000微克/毫升。下面我们除介绍这一方法外,并应用这个方法与Folin酚试剂法,对     

大豆蛋白快速检测方法的对比研究

本研究目的为了寻找一种快速检测大豆分离蛋白含量的方法,本试验采用双缩脲法、Folin-酚试剂法、考马斯亮蓝染色法,并研究这些法是否适合检测大豆分离蛋白。最终采用双缩脲法检测大豆分离蛋白中蛋白质的含量。     

兔病毒性出血症(暂定名)的研究 Ⅱ.病毒的分离提纯、电镜观察及核酸性质

应用氯仿处理,聚乙二醇沉淀,差速及蔗糖梯度离心,可以获得部份提纯的兔病毒性出血症病毒制剂,制剂呈典型的病毒核蛋白紫外吸收曲线,最高吸收值在260nm,A260/280=1.3,电镜下病毒呈廿面体,大小约36nm,无外膜,用该制剂回接健康兔,能引起典型发病及死亡,用核糖核酸及脱氧核糖核酸酶处理,证明病毒核酸为DNA,病毒DNA的温度熔解曲线测定证明,DNA为双链,初步测定DNA的分子量约为13-15×10~(?)道尔顿。     

测定胸腺肽含量几种定量方法的比较

本文用凯氏定氮法、双缩脲法及福林－酚法测定了胸腺肽含量,并加以比较,说明三种方法对其含量测定没有显著差异．在实践中可以根据不同条件选择适当的方法进行实验．     

酶联免疫检测仪-考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

蛋白质定量方法虽然较多,但有些方法操作费时,如凯氏定氮法和Lowry氏法;有些方法需要的样品量较大,如用751型分光光度计进行紫外线吸收法测定;有些方法灵敏度不高,如双缩脲法。为弥补上述不足,我们试用酶联免疫检测仪-考马斯亮蓝法测定蛋白质含量,现将实验报告如下。     

光谱法研究甲醇和盐酸对短梗霉黑色素的分离效果

应用紫外和红外光谱对甲醇和盐酸分离的短梗霉黑色素进行了分析。分析结果表明:甲醇和盐酸法分离的黑色素在紫外图谱215 nm处都有最大吸收峰,而甲醇法分离的黑色素其紫外图谱在260、280 nm处无吸收峰表明此法分离的黑色素不含核酸及蛋白质;红外图谱中,在3340 cm-1、1637 cm-1处有很强的吸收峰表现为黑色素的典型特征;同时在对照中发现盐酸多次处理后的黑色素显示较少的结构信息,说明盐酸沉降法有可能破坏黑色素的结构。由此选用甲醇作为沉淀剂有利于黑色素的纯化及确保其结构信息的完整,为进一步分析短梗霉黑色素的结构表征奠定了基础。     

碱裂解法提取重组质粒DNA及PCR验证

目的:筛选获得高质量质粒,为进一步克隆、测序奠定基础.方法:采用常规的碱裂解法从大肠杆菌重组质粒中提取质粒DNA,核酸检测仪测定提取质粒DNA产量和纯度,并用前期DDRT-PCR时采用的引物进行PCR验证性实验,琼脂糖凝胶电泳检测,并对电泳图谱加以分析和鉴定.结果:利用常规的碱裂解法提取重组质粒,通过酚和氯仿的抽提,可以有效地去除蛋白质杂质,用含有Rnase抑制剂的无菌水溶解质粒提取效果最好,得到的质粒DNA无RNA污染,纯度比较高,OD260/OD280比值介于1.8～2.0之间,OD260/OD230比值大于2.0,经PCR反应验证后与预计相符.结论:通过该方法获得的重组质粒纯度和浓度都比较高,且PCR验证与预计相一致,可以满足后续分子生物学实验的要求.     

条斑紫菜丝状体总RNA提取方法比较

目的:为了获得质量较高的条斑紫菜丝状体总RNA,对几种常用提取方法进行研究。方法:以条斑紫菜自由丝状体为材料,比较了用异硫氰酸胍法、CTAB法、SDS/酚法、TRIzol法、RNAplant法提取的RNA的质量和纯度。结果:异硫氰酸胍法提取RNA的成本低,但纯度不高;CTAB法产率较小,且不能完全去除多糖或蛋白质;SDS/酚法未能获得完整的RNA;TRIzol法未能见到5SrRNA条带,且带有杂带;而RNAplant法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高,其D260nm/D280nm值为1.836,经逆转录得到的双链cDNA扩增产物长度在200bp以上。结论:实验结果表明RNAplant法更适于条斑紫菜丝状体总RNA的提取。     

草菇病毒——一种新的食用菌ds-RNA病毒

自草菇(Folvariella~olvacea)子实体中分离到一种等轴对称直径为35rim左右的病毒颗粒。病毒样品经琼脂糖电泳显示一条区带,并具有典型核蛋白的紫外吸收光谱。最大吸收为E257,最低吸收为E230,A260／280=1．96。经SDS-不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳解离病毒,出现一条主要衣壳多肽的电泳带,分子量为60,000道尔顿。病毒核酸的最大吸收在258nm,最低吸收在232nn,A260/280=2．0,琼脂糖电泳为一个组分。     

蛋白质二硫键异构酶的纯化和活力测定

 从500g新鲜牛肝制得蛋白质二硫键异构酶(PDI,EC 5.3.4.1)98mg。该酶制剂在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现为亚基分子量62,000的均一条带。在260nm追踪,因二硫键错接而失活的牛胰核糖核酸酶A,经PDI作用使其二硫键重排恢复活力,从而催化酵母RNA的水解来测定PDI活力。这种单波长法比文献中介绍的追踪A_(260)—A_(280)的双波长法更为灵敏方便。酶的克分子消光系数ε_M=1.03×10~5(pH7.5),其比活性为1400单位/克蛋白质。     

森林脑炎病毒基因组RNA的分离及其性质的研究

本文从森林脑炎病毒感染的鼠脑组织中直接抽提总核酸,经Sepharose 4B柱层析,将病毒RNA与细胞RNA分离。方法简便。分离的病毒RNA在260nm处有典型紫外吸收光谱,260/280nm的比值近似2,对R_ane敏感,有感染性。     

一株辣椒花叶病毒的生化特性研究

本文对辣椒花叶病毒的生化特性进行了研究。病毒蛋白的紫外吸收,最高280毫微米,最低为260毫微米;以SDS-PAGE测定其分子量为17500;病毒蛋白亚基由148个氨基酸组成。从病毒提纯的核酸为线状RNA;紫外吸收最高为260毫微米,最低230毫微米;经聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,其分子量为2.0×10~6。根据形态结构、血清学试验、外壳蛋白亚基组成、核酸和蛋白的分子量等综合分析,我们认为这株辣椒花叶病毒是烟草花叶病毒组(TMV)中的一个毒株。     

盐效应对DNA大分子构象的影响

用CD光谱监测了Micrococcus luteus DNA在不同MgCl_2浓度下[θ]值的变化,发现随着MgCl_2浓度的增加,在275nm处其[θ]值减少;而在220—250nm处,其负[θ]值加大.这个结果表明DNA大分子在空间上趋于缩拢.在同样条件下也用紫外光谱进行了监测,发现随着MgCl_2浓度的增加,在260nm处有明显的减色效应出现,这便又进一步印证了上述结果.而又用Batch-2107微量热计进行了热力学上的研究,结果表明在上述条件下,随着DNA大分子在空间上缩拢程度的加大,则伴有较高的释热值.这便从热力学的角度进一步佐证了这样的结果:随着MgCl_2浓度的增加,使溶液中的DNA大分子在空间上产生明显的缩拢现象.同时,所有上述测定结果都一致表明:这种DNA大分子构象变化过程是时间依赖的,约持续10分钟.     

豆皮水溶性多糖组分SHP-3的物化性质研究(英文)

对豆皮采用热水浸提得到豆皮水溶性多糖,通过DEAE-cellulose离子交换柱洗脱,得到3个组分。本文主要研究了采用0.3 M NaOH溶液洗脱纯化得到的组分SHP-3的物化性质。对SHP-3进行凝胶渗透色谱、气相色谱分析、紫外光谱及高碘酸氧化-Smith降解分析,结果表明:SHP-3的分子量为45554,其糖醛酸含量为26.71%(wt.%),单糖组成摩尔比为Rah:Fuc:Ara:Xyl:Man:Gal:Glu=3.55:0.44:11.58:1:7.45:5.12:1.12,紫外光谱在260～280 nm没有吸收峰,表明没有蛋白质或核酸等物质;高碘酸氧化-Smith降解结果表明SHP-3的连接结构以为(1→4)糖苷键为主,其摩尔比例占68.9%,(1→2)糖苷键占11.4%,(1→6)糖苷键占19.7%。     

SINDBIS病毒基因组的研究

Sindbis病毒经蔗糖密度梯度离心纯化后,用SDS/酚/氯仿/异戊醇处理和乙醇沉淀,制得的基因组RNA具有典型核酸紫外吸收光谱的特征:最大吸收在260nm,最小在235nm。沉降系数为45S。沉降扫描图表明,RNA样品均一,分子完整。 用高渗法在原代鸡胚纤维母细胞测定了基因组RNA的感染性,空斑滴度为5.9×10~4pFU(空斑形成单位)/ml,空斑形态和大小与完整病毒颗粒相同。经核糖核酸酶处理,基因组RNA即丧失感染性,说明了这种生物活性的特异性。     

陆生植物体内酶系统对UV-B辐射增强的响应

臭氧层减薄导致地表中波紫外线UV-B(280～320 nm)辐射的增强,UV-B辐射能量远高于可见光,且能被植物体内蛋白质和核酸等生物大分子吸收.酶是植物体内起催化作用的一类蛋白质,酶的数量和活性对UV-B辐射增强有强烈的响应.本文将近年来增强UV-B辐射对植物体内酶影响的研究工作进行了综述.主要包括抗氧化酶、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶、硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶.并就今后该方面的研究提出建议.     

香鱼基因组DNA提取方法的优化

为获得高质量的基因组DNA,分别采用传统酚-氯仿法、高盐法、试剂盒法和改进酚氯仿法提取香鱼肌肉基因组DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,改进酚氯仿法提取的基因组DNA电泳条带整齐明亮且无降解。紫外分光度计测定DNA浓度和纯度,结果表明,改进酚氯仿法提取的鱼类基因组DNA浓度约为300μg/mL,A260/A280为1.80-1.86。用改进的酚氯仿法提取的DNA进行AFLP分析,扩增结果稳定,电泳条带清晰。综上所述,改进酚氯仿法能够获得高质量DNA,且可以用于进一步的分子生物学研究。