6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸对三裂叶野葛毛状根生长和异黄酮含量的影响

为了探讨植物激素对三裂叶野葛毛状根生长和异黄酮化合物含量的影响,采用不同浓度的6-苄氨基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine,6-BA)或6-BA和萘乙酸(α-Naphthaleneacetic,NAA)结合处理三裂叶野葛毛状根,观察其对毛状根生长的影响,然后利用分光光度计测定毛状根中异黄酮化合物含量及抗氧化酶活性。结果表明:6-BA抑制三裂叶野葛毛状根的生长,降低三裂叶野葛毛状根的生物量,且随着6-BA浓度的增加,其抑制效果愈明显;同时降低其总异黄酮化合物的含量。与对照相比,不同浓度6-BA和NAA 2.0 mg/L结合抑制毛状根的生长,降低毛状根中总异黄酮化合物含量。6-BA和NAA结合能显著提高毛状根可溶性蛋白质含量和过氧化物酶活性,但降低其超氧化物歧化酶活性;单独6-BA处理的毛状根培养至30 d时,可以检测到典型的DNA ladder带,而6-BA和NAA结合处理的毛状根培养至20 d时就可以检测到DNA ladder带,表明6-BA或6-BA和NAA结合都可以促进细胞程序性死亡的发生,且NAA具有协同作用。     

植物生长物质对白英毛状根生长及薯蓣皂苷元含量的影响

利用含p Ri A4质粒的农杆菌C58C1浸染白英叶片获得能在无植物生长物质培养基上自主生长的毛状根单克隆系,且毛状根中薯蓣皂苷元含量高于野生型白英植株。在液体培养基中添加不同浓度的6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)或6-BA与NAA的结合处理白英毛状根,观察其对毛状根生长的影响,并利用高效液相色谱法(HPLC)测定毛状根中薯蓣皂苷元含量。结果表明,6-BA抑制白英毛状根的生长,且随6-BA浓度增加,抑制作用越明显,6-BA能增加白英毛状根每克干物质中薯蓣皂苷元的含量,但降低培养瓶中毛状根薯蓣皂苷元总量。NAA对毛状根的生长有促进作用,其中,经0.5 mg·L-1NAA处理的毛状根在培养30 d时干重达到同期对照的1.76倍。虽然NAA降低每克干物质中薯蓣皂苷元含量,但提高培养瓶中毛状根薯蓣皂苷元总量,薯蓣皂苷元总量最高可达0.97 mg(DW)·瓶-1,是对照整个培养过程中最大值的1.37倍。6-BA与0.5 mg·L-1 NAA的结合抑制白英毛状根的生长,同时降低每克干物质中薯蓣皂苷元的含量。     

植物激素对人参毛状根生长和皂甙含量的影响

就植物激素IAA、IBA、NAA、2,4-D对人参（Panax ginseng C.A.Meyer）毛状根生长及皂甙含量的影响进行了研究。结果表明,4种生长素在适宜的浓度下均可不同程度地促进人参毛状根的生长以及皂甙的积累,同时能影响单体皂甙的分布。NAA和IBA能显著促进毛状根的生长,其中0.500mg/L IBA能显著促进毛状根生长和总皂甙的积累。细胞分裂素6-BA在较低浓度时虽然对生长无明显的促进作用,但对皂甙积累有利,同时显著促进单体皂甙Rb1的积累,增大Rb1在总甙中所占的比例。     

外源激素对魔芋多叶、多球茎形成的影响

激素是调节植物生理活动的主要物质,6-BA、IBA、NAA、2,4-D、GA3等外源激素均能影响魔芋侧芽和根的分化, 形成多叶或多球茎,复合作用能够抑制或促进某些器官的分化,利用外源激素的作用,有意识地诱导多叶、多球茎,在栽培上 具有重要意义。     

影响杜仲悬浮细胞生产桃叶珊瑚甙因素的研究

研究了外源激素2,4-D、NAA、6-BA、KT的不同组合以及营养添加物水解酪蛋白、酵母提取物对杜仲悬浮细胞生产桃叶珊瑚甙的影响。结果表明,在2.0mg/L2,4-D的培养基中分别添加1.0mg/LNAA、0.5mg/L6-BA、0.5mg/LKT可提高桃叶珊瑚甙含量;在培养基中添加水解酪蛋白和酵母提取物均能促进桃叶珊瑚甙的合成,以添加100mg/L水解酪蛋白和15mg/L酵母提取物时其含量最大。初步得出桃叶珊瑚甙合成的最适培养条件为添加2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LNAA+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LKT+100mg/L水解酪蛋白+15mg/L酵母提取物的MS培养基。     

不同培养基及外源激素对西洋参毛状根的生长和皂甙含量的影响

分析了1/2MS、改良White、SJ-1、改良Nisch、B5和B5-I6种液体培养基、水解乳蛋白（LH）以及IAA、IBA、NAA、6-BA和ABA5种激素对西洋参（Panax quinquefolium L.)毛状根生长及皂甙含量影响。用高效液相色谱法测定部分毛状根状品的4种单体皂甙含量。结果表明SJ-1和B5培养基较好,水解乳蛋白可增加毛状根的鲜重,但降低毛状根中总皂甙的含量。IAA、IBA和ABA对毛状根的生长促进作用,6-BA对皂甙积累有显著促进作用,并较大幅度地提高Rb1在总甙中所占的比例。     

黄瓜毛状根的诱导及细胞分裂素6-BA对其生长和形态的影响

含农杆碱型Ri质粒pRiA4b的发根农杆菌(Agrobacteriumrhizogenes)ATCC15834感染黄瓜子叶外植体5d后产生毛状根,毛状根可直接从叶片外植体叶脉处产生。感染10d后,约90%的子叶外植体产生毛状根。毛状根能在无外源生长调节剂的MS固体和液体培养基上自主生长。PCR扩增结果证实,发根农杆菌Ri质粒的rolB和rolC基因已在黄瓜毛状根基因组中整合并得到表达。挑选一无菌黄瓜毛状根系置于含不同浓度6-BA的MS培养基中悬浮培养来探讨细胞分裂素6-BA对黄瓜毛状根生长及其形态变化的影响。结果表明,细胞分裂素6-BA能促进黄瓜毛状根的生长及改变其生长形态。随着培养基中6-BA浓度的升高,黄瓜毛状根变得越来越短而粗,更少分枝。与对照相比,培养基中添加0·1~3·0mg/L6-BA能推迟毛状根最大生长峰的出现,降低其可溶性蛋白含量、SOD和POD酶活性;而黄瓜毛状根的乙烯释放高峰比其最大生长峰和SOD和POD酶活性高峰提前5天,但6-BA处理能降低毛状根的内源乙烯释放量。该结果表明细胞分裂素6-BA可能通过对乙烯生成和释放的调节来影响黄瓜毛状根的生长和形态并延缓毛状根的衰老。     

绞股蓝组织培养的研究

绞股蓝外植体在不同激素浓度的MS培养基上培养,经过正交试验选择了四种最适培养基配方。形态观察和同工酶测定结果表明,在MS基本培养基中添加NAA(1.0～2.0mg/L)可促进愈伤组织和根的生长;添加6-BA(2.0mg/L)也能诱导愈伤组织,并能分化丛生芽;而在6-BA(1.0mg/L)中加入低浓度的NAA(0.1mg/L)和2,4-D(0.1mg/L),对诱导愈伤组织和丛生芽的分化有增效作用。经染色体观察和试管苗大田试种,未发现遗传性变异。     

传统中药何首乌组织培养的初步研究

主要对何首乌块根和幼茎进行了愈伤组织培养,并对何首乌不同外植体的诱导时间进行了比较.结果表明：诱导何首乌块根产生愈伤组织的最佳激素配比是0.1 mg/L 6-BA＋3.0 mg/LIAA＋0.5 mg/L 2,4-D,且这3种激素的作用主次为2,4-D＞IAA＞6-BA;在此次实验中还比较了不同消毒剂及其组合对何首乌块根的消毒效果,结果表明：70%的酒精＋0.1%HgCl2具有很好的消毒作用.     

不同植物生长调节物质对驱蚊香草细胞脱分化的效应

以驱蚊香草的幼嫩叶片为外植体,在MS培养基上添加各种不同浓度植物生长调节物质进行单因子试验。研究结果表明,不同植物生长调节物质对驱蚊香草的诱导效应不同。2,4-D对驱蚊香草愈伤组织的诱导效果最好;6-BA对芽的诱导显著;NAA对根的分化作用明显。而单独使用NAA,可以从外植体、愈伤组织、根、芽、苗一步完成。     

生长素类化合物及6－苯甲基腺嘌呤对拟南芥主根生长的抑制效应比较

为更好的研究生长素类化合物及6-苯甲基腺嘌呤（6－BA）对细胞分裂和细胞伸长的影响,以拟南芥主根为材料,从组织学水平比较了IAA、NAA、2,4－D和6－BA对拟南芥主根分生区和伸长区的抑制效应,发现IAA和NAA效果是相似的,可以通过促进细胞分裂显著增加根分生区长度,但也显著缩短主根仲长区长度,而2,4－D和6－BA则通过抑制细胞分裂来显著缩短根分生区长度,同时也显著缩短根伸长区的长度。     

西洋参发根的诱导及不同外源物质对发根生长和皂苷含量的影响

利用发根农杆菌A4菌株在西洋参根外植体上直接诱导产生发根,并分析不同浓度的植物激素6-BA、NAA,前体物醋酸镁(Mg(Ac)2)、L-亮氨酸和诱导子茉莉酸甲酯(MJA)、水杨酸(SA)对西洋参(Panax quinquefolium L.)发根生长和皂苷含量的影响。同时,研究MJA与SA组合作用对皂苷含量的影响。采用高效液相色谱法测定发根中单体皂苷Rb1的含量。结果显示,适宜浓度的外源物质均可促进皂苷含量的增加,MJA尤其明显。     

Ri质粒转化的青蒿发根培养及青蒿素的生物合成

用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)转化药用植物青蒿(Artemisia annua L．)并建立了发根体外培养系统。Southern杂交、NPT Ⅱ酶的检测证明Ri质粒的T—DNA转移并整合到植物的核基因组上。在发根培养系统中,检测了青蒿的重要次生代谢物一青蒿素的含量,检测了不同理化因子对发根生长及青蒿素含量的影响。结果表明：光照(日光灯,12h光周期,20001x)有利于次生产物青蒿素的积累。培养基的pH值为5．4。蔗糖浓度为3％不仅促进发根的生长,而且促进青蒿素的积累。低浓度萘乙酸(NAA)对发根生长具有促进作用,但抑制青蒿素的合成。赤霉素GA,对发根的生长及次生产物的合成都具有促进作用,其最适浓度为4．8mg／L。     

发根农杆菌LBA9402Bin19转化红豆草及再生转基因植株

Hypocotyl segments of Onobrychis viciaefolia were transformed by Agrobacterium rhizogenes LBA9402 which harboured pBin19 and pRi1855. Seedling age and preculture time of hypocotyl segments influenced the transformation frequency. Paper electrophoresis revealed that 70% of single hairy root cultures could synthesize agropine. Calli were induced from hairy root segments on MS medium containing 0-9.05 mumol/L 2,4-D and 0-2.22 mumol/L 6-BA at first, then they were transferred onto MS0 medium without kanamycin for regeneration. Constitution and concentration of phytohormones in callus induction media affected subsequent regeneration of calluses on MS0 medium remarkably. Regeneration frequency and shoot number per callus declined when 2,4-D concentration in callus induction media increased from 4.52 to 9.05 mumol/L, while they ascended when 6-BA in callus induction media increased from 0 to 2.22 mumol/L. On MS medium supplemented with 4.52 mumol/L 2,4-D and 2.22 mumol/L 6-BA, only 14.2% hairy root segments could produce calluses, but the regeneration frequency reached 58.1% and the shoot number per callus was 37.2. In 32 analysed plants regenerated from 8 kanamycin resistant hairy root lines, 25 were nptII positive and showed different copy numbers.     

水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径,建立了水杉（Metasequoia glyptostroboides）的植株再生体系,探讨了不同外植体（种胚、幼叶切块、茎段、根段）和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明：以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体,在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织,其中种胚诱导愈伤组织效果最好,诱导率可达100%,茎诱导效果次之,诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有：MS＋1.0mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-16-BA、MS＋0.1mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA和MS＋0.5mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-1NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好,再生率为62.5%。     

Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation and the regeneration of transformants in Alhagi pseudalhagi]

The regenerated shoot segments of Alhagi pseudalhagi were sliced and infected with Agrobacterium rhizogenes strain A4. The hairy roots and transformed calli were obtained through selection on hormone free MS medium. The transformants were cultured on MS medium with 2 mg/L 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D) and 0.5-1 mg/L 6-benzylaminopurine (6-BA) to induce calli. 3 mg/L 6-BA and 0.5 mg/L naphthalene acetic acid (NAA) were applied for shoot differentiation. Shoots were planted on MS medium with 2 mg/L indole-3-butyric acid (IBA) and produced roots. Opine analysis proved the integration and expression of T-DNA in over 95% hairy roots, 75% transformed calli and transformed plantlets respectively. The 81% hairy root cells had normal chromosome numbers (2n = 18). The alterations of chromosome number were observed. After one year of subculturing, the regeneration ability of transformants was maintained.     

锁阳愈伤组织诱导和增殖及不定根分化

以药用寄生植物锁阳的不同部位肉质茎为外植体,研究外植体形态及植物生长调节剂配比对愈伤组织形成、增殖及不定根分化的影响,建立了高效的锁阳肉质茎愈伤组织诱导、增殖和不定根分化体系。结果表明,锁阳茎下部大小为1．5cmx1．5cmxl．5cm的外植体,维管束平行于培养基放置,有利于愈伤组织形成;外植体培养50d,愈伤组织形成。高效的愈伤组织诱导培养基为Ms＋6-BA1．0mg.L-1＋2,4-D3．0mg·L-1,愈伤组织诱导率可达67％;增殖培养基为Ms＋6．BA0．5mg·L-1。＋2,4-D1．5mg·L-1,NxsN74％;在Ms＋6．BA1．0mg·L-1＋NAA2．0mg·L-1。分化培养基中,不定根诱导率达56％。     

多效唑连用其它植物激素对水稻试管苗生长的影响

本实验采用继代多年的花培体细胞无性系Hu18再生绿芽(0.5mm)为起始材料,研究多效唑(MET)与其它激素配合使用对试管苗的调控作用,结果指出:(1)单独使用MET对绿芽生长有毒害作用,除2,4-D、GA,外,MET与适宜浓度的其它激素配合使用才能发挥增苗、壮苗作用,其中以MET与BA配合使用的培养效果最好,MET与NAA,C_2H_4配合使用的效果次之;(2)MET与其他激素配合使用不但能降低植株高度,促进根系发育,而且可以延长试管苗的保存时间;(3)MET与乙烯利配合使用能加速绿芽成苗速度,而与其他激素配合使则延缓绿芽成苗速度,如与2,4-D配合使用则延缓2,4-D对绿芽的脱分化进程;(4)在本实验条件下,以MET 2.5mg/L+BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L配合使用有利根芽的协调生长。本文还从植株干物质累积,叶细胞结构,细胞活力等方面进行了探讨。     

Hairy Root and Its Application in Plant Genetic Engineering

Agrobacterium rhizogenes Conn. causes hairy root disease In plants. Hairy root-Infected A. rhizogenes Is characterlzed by a high growth rate and genetic stability. Hairy root cultures have been proven to be an efficient means of producing secondary metabolites that are normally biosyntheslzed In roots of differentiated plants. Furthermore, a transgenlc root system offers tremendous potential for introducing additional genes along with the RI plasmld, especially with modified genes, into medicinal plant cells with A. rhizogenes vector systems. The cultures have turned out to be a valuable tool with which to study the biochemical properties and the gene expression profile of metabolic pathways. Moreover, the cultures can be used to elucidate the Intermediates and key enzymes Involved In the biosynthesis of secondary metabolites. The present article discusses various appllcations of hairy root cultures in plant genetic engineering and potential problems aseoclsted with them.     

发根农杆菌对骆驼刺的转化及转化组织的形态发生

将骆驼刺离体再生苗的茎切段经发根农杆菌A4菌株感染后,在含500mg/L头孢霉素的MS无激素培养基上培养,产生了转化的发根和愈伤组织.转化根在附加2mg/L2,4-D和0.5-1mg/L6BA的MS培养基上培养后,亦可诱导出愈伤组织.在含3mg/L6BA和0.5mg/LNAA的培养基上诱导出了苗的分化.冠瘿碱分析表明,在95%以上的发根和75%的转化愈伤组织及再生植株中都显示了T-DNA的整合和表达.染色体检查发现,约81%的发根细胞具有正常染色体数(2n=18),其余则存在染色体数目的变化,在继代培养一年之后,转化体仍维持旺盛的再生能力.