人体蠕形螨的DNA提取与随机引物PCR检测

【目的】探索人体毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨DNA的提取方法。【方法】采用液氮反复冻融研磨法破碎螨体细胞, 选用改良小昆虫DNA提取法、碱裂解法和试剂盒提取法, 分别提取冻存时间在5个月内和8~10个月的毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨基因组DNA, 并用随机引物PCR方法进行检测。【结果】蛋白核酸测定仪检测结果显示, 试剂盒法提取的DNA纯度较高、量较多, 明显优于改良小昆虫法和碱裂解法。随机引物扩增结果显示清晰的DNA指纹图谱, 两种人体蠕形螨DNA指纹具有明显差异。蠕形螨冻存时间影响DNA提取的量, 但对DNA提取的纯度和RAPD指纹图谱影响较小。不同DNA提取方法提取的同一种蠕形螨DNA指纹图谱基本相似, 试剂盒法和改良小昆虫法提取的DNA样本条带多而清晰, 碱裂解法提取的样本条带少而模糊。【结论】液氮反复冻融研磨法破碎蠕形螨细胞是有效的, 蠕形螨冻存时间不宜超过6个月, 试剂盒提取法是提取蠕形螨DNA的好方法。RAPD技术可以用于这两种人体蠕形螨DNA分子水平上的检测和分类。     

几种环境因素对两种人体蠕形螨生活力的影响

本文就寄生人体的毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨在实验室条件下,对其在各种温度、湿度和酸碱度中的存活时间进行了观察。 在36℃,高湿的环境中,毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨成虫的存活时间分别达94和95小时。高温与干燥对其生存不利。两种蠕形螨对酸性环境的耐受力都强于碱性环境,特别皮脂蠕形螨更为突出。     

人体蠕形螨爬行的观察

蠕形螨为一永久性寄生螨类,寄生于人体及家畜、哺乳类动物,种类繁多,目前报道的有120余种,常见的有40余种,寄生人体的有毛囊蠕形螨(Demodex folliculorum)、皮脂蠕形螨(Demodex brevis)、毛囊蠕形螨中华亚种(Demodex folliculorum sinensis)等,分别寄生于毛囊及皮脂腺内。可引起酒渣鼻、痤疮、眼睑炎等皮肤病,在人群中感染甚为普遍,同时也证实了其感染途径是通过直接接触而传播。为此,对蠕形螨活动力的研究是进一步探索其传病机制及防治的重要环节。人体蠕形螨在不同温度、湿度及酸碱度条件下生活能力的观察曾有报道(Spickett,1961;陈国定,1985)。但对其爬行规律及速度至今尚未见报道,为此我们对蠕形螨在不同温度条件下的爬行规律及速度作了系统的观察。今将结果报道如下。     

薄荷油体外抗蠕形螨效果及杀螨机制

采用透明胶带粘贴过夜法获取2种人体蠕形螨,随机分组,观察不同浓度的薄荷油的杀虫效果,并在MoticDMB5图像采集软件系统下拍摄虫体在薄荷油作用下的虫体死亡过程。结果表明,薄荷油有很强的体外杀灭2种人体蠕形螨的作用,尤其对皮脂蠕形螨的杀灭作用显著。随着药物浓度的增加及作用时间的延长,蠕形螨死亡率增高。12.5%、3.125%分别是薄荷油体外杀灭毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨的最适杀螨浓度。薄荷油作用于蠕形螨,可见虫体收缩扭动,活动加剧,消化管剧烈收缩,毛囊蠕形螨和皮脂蠕形螨体壁均有渗出物外溢。虫体表现为兴奋—痉挛—失水—松弛—死亡的典型症状。薄荷油对人体蠕形螨的杀灭机制主要通过神经毒性和直接毒杀作用,造成虫体破裂脱水而死亡。薄荷油是一种极具开发潜能的高效的天然杀螨药。     

蠕形螨的检查方法

蠕形螨的检查方法蠕形螨（Ｄｅｍｏｄｅｘ）是一类微小的寄生性螨,其成虫呈蠕虫状,雌雄异体。根据曲魁遵所述,此虫大小的２５０μｍ×４０μｍ,虫体可分为头胸部及腹部两部分。该螨寄生于人体和其他哺乳动物皮内的皮脂腺和毛囊管内。寄生于人体的蠕形螨有毛囊形螨（Ｄ...     

动物蠕形螨活动情况初步观察

蠕形螨属Demodex是一类小型螨,寄生于人、家畜、野生动物的皮肤毛囊和皮脂腺内,不仅影响人类健康,并能引起家畜和珍稀动物的蠕形螨病,严重时可以导致动物死亡,目前尚无理想的特效药物。近年来,国内外学者对蠕形螨的形态结构,致病力,感染途径以及诊疗方法等作了不少研究,但对动物蠕形螨的活动情     

大熊猫蠕形螨病组织病变的初步观察

大熊猫蠕形螨病的临床症状和危害已有记述〔1,2〕。本文通过一例病猫皮损活组织块,经石蜡包埋做成连续切片,HE染色,厚度为8μm,镜下见到表皮角质层增厚,棘层稍增厚,基层正常。毛囊漏斗部与皮脂腺导管都有不同程度的扩大,其内毛根脱落较多。同时,被许多蠕形螨碎片及完整的蠕形螨充塞。部分毛囊的上皮细胞有坏死脱落、核溶解及核碎裂现象;有的含虫毛囊周围的间质内有大量嗜中性粒细胞及嗜酸性粒细胞浸润;个别毛囊腔内充满大量嗜中性粒细胞及脓球;少数汗腺管内及其它结缔组织内也有炎性细胞浸润。组织内大熊猫蠕形螨主要寄生于毛囊上段,即漏斗…     

人体蠕形螨寄生率与工种关系的初步调查

目的：探讨人体蠕形螨寄生率与工种的关系;方法：采用手指挤压和刮取法刮取皮脂分泌物在显微镜下检查;结果：不同工种的人群蠕形螨寄生率有显著差异（χ２＝８１３２,ｆ＝４,Ｐ＜００５）;结论：工作环境和个人卫生条件决定蠕形螨寄生率的高低。     

在校大学生蠕形螨感染现状调查与分析

目的 了解在校大学生蠕形螨感染现状,探讨与蠕形螨感染相关因素.方法 调查时间为2009年的7月和2010年1月,采用自制刮螨器刮取法.结果 628人受检,蠕形螨感染者为250人,总感染率为39.8％,男生感染率为39.3％(103/262),女生感染率为40.2％(147/366),两者无统计学差异;夏季感染率48.0％(160/333),冬季感染率30.5％(90/295),夏季感染率显著高于冬季.结论 蠕形螨的感染率与性别无关,与季节及集体生活等因素相关.     

人体正常皮肤蠕形螨生态分布的研究

本文报道了大连地区人体正常皮肤蠕形螨的生态分布。共检查551人,阳性153人,定居率为27.8％,检出毛囊螨和皮脂螨共两种。用透明胶带定量计数检查法,研究蠕形螨在面部的分布,结果表明蠕形螨主要分布于颏、鼻、颊和额部位。对10例阳性者,在面部检出毛囊螨和皮脂螨共85只,其中颏31、鼻26、颊17、额11只螨,总定居度为每条胶带(6cm~2)2.1只螨,定居度以颏部位为最高,鼻、颊、额次之。     

Complete sequence analysis of 18S rDNA based on genomic DNA extraction from individual Demodex mites (Acari: Demodicidae)

The study for the first time attempted to accomplish 18S ribosomal DNA (rDNA) complete sequence amplification and analysis for three Demodex species (Demodex folliculorum, Demodex brevis and Demodex canis) based on gDNA extraction from individual mites. The mites were treated by DNA Release Additive and Hot Start II DNA Polymerase so as to promote mite disruption and increase PCR specificity. Determination of D. folliculorum gDNA showed that the gDNA yield reached the highest at 1 mite, tending to descend with the increase of mite number. The individual mite gDNA was successfully used for 18S rDNA fragment (about 900 bp) amplification examination. The alignments of 18S rDNA complete sequences of individual mite samples and those of pooled mite samples ( ≥ 1000mites/sample) showed over 97% identities for each species, indicating that the gDNA extracted from a single individual mite was as satisfactory as that from pooled mites for PCR amplification. Further pairwise sequence analyses showed that average divergence, genetic distance, transition/transversion or phylogenetic tree could not effectively identify the three Demodex species, largely due to the differentiation in the D. canis isolates. It can be concluded that the individual Demodex mite gDNA can satisfy the molecular study of Demodex. 18S rDNA complete sequence is suitable for interfamily identification in Cheyletoidea, but whether it is suitable for intrafamily identification cannot be confirmed until the ascertainment of the types of Demodex mites parasitizing in dogs.     

粘类小麦细胞质雄性不育系的RAPD分析

利用250条10-聚寡核苷酸随机引物对具粘果山羊草(Aegilops kotschyi)、易变山羊草(Ae.variabilis)、偏凸山羊草(Ae.ventricosa)和二角山羊草(Ae．bicornis)细胞质不育系及其保持系5-1的总DNA进行了RAPD多态性分析,其中31条引物对4种不育系及其保持系总DNA均无扩增,217条引物扩增条带完全相同。有2条随机引物在2种不育系之间有特异的扩增片段,其中引物S22在偏凸山羊草细胞质雄性不育系基因组DNA中扩增出分子量约为1600bp的特异带,引物S202在粘果山羊草细胞质雄性不育系基因组DNA中扩增出约1300bp特异带。线粒体基因组DNA的RAPD分析表明,4种不育系及其保持系mtDNA存在明显的差异。证明了S22—1600为偏凸山羊草细胞质不育系及其mtDNA基因组DNA的RAPD特异片段．S202—1300可能为粘果山羊草细胞质不育系及其ctDNA基因组DNA的RAPD特异片段。     

牛ACAD8基因结构及其多态性与生产性状的关联分析

乙酰辅酶A脱氢酶(ACAD)是由核基因编码存在于线粒体中黄色酶的一个家族,它催化脂肪酸的α和β-氧化,该家族第八成员负责催化缬氨酸分解代谢。本研究中获得了牛的ACAD8基因的mRNA和基因组DNA序列并通过基因组DNA与mRNA的比对确定了其基因结构。其mRNA序列包含一个1,251 bp的开放阅读框,一个37 bp 的5′非翻译区和一个 444 bp 的 3′非翻译区;其基因组DNA全长13,814 bp,包含11个外显子和10个内含子。我们从样本中随机选取6个个体进行扩增测序,结果表明牛的ACAD8基因13,408位(GenBank登录号:DQ435445)一个A-G单核苷酸多态。运用PCR-RFLP对不同的基因型进行了区分。对该SNP与来自5个品种共178头无亲缘关系的牛的生产性状进行了关联分析,结果表明:该A-G单核苷酸多态对日增重和嫩度有显著影响(P < 0.05)。具有G等位基因的牛比具有A等位基因的牛生长较快,其肉质也较嫩。因此,牛ACAD8基因在该位点的单核苷酸多态可以作为提高生长速度和牛肉嫩度的标记。     

杧果LEAFY同源基因的分离及序列分析

分析在植物开花过程中起重要作用的LEAFY(LFY)基因的保守区序列,设计1对长度均为23bp的PCR引物,以杧果基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出长为822bp的DNA片段,克隆入pGEM-T Easy载体。测序和序列分析表明,获得了杧果LFY同源基因(miLFY)3’端的1个片段,该片段有1个415bp的内含子,编码区共编码135个氨基酸,其序列已经在GenBank中登记(登录号AY189684)。在GenBank中进行同源性检索,发现其氨基酸序列与其它植物LFY同源基因的氨基酸序列同源性高达74%~97%,推测它们具有相似的功能。     

巴氏钝绥螨rDNA的ITS基因片段序列分析

采用酚-氯仿抽提法提取了采自江西赣南的巴氏钝绥螨Amblyseiusbarkeri Hughes,1948基因组DNA。以相应引物对巴氏钝绥螨核糖体ITS基因进行PCR扩增,直接测序,得到了652bp的碱基片段（国际基因库索引号FJ392365）,其碱基序列A、C、G、T含量分别为193bp（29．60％）、114bp（17．48％）、144bp（22．09％）、201bp（30．83％）,并对其与其他植绥螨5．8SrDNA及两侧ITS序列进行了分析。     

St基因组中的CRW同源序列在偃麦草中的FISH分析

为了确定十倍体长穗偃麦草(Thinopyrum ponticum, Liu & Wang)和六倍体中间偃麦草(Th. intermedium, [Host] Barkworth & Dewey )的基因组组成, 根据野生一粒小麦(Triticum boeoticum)着丝粒自主型反转录转座子(CRW)序列设计特异引物, 以二倍体拟鹅观草(Pseudoroegneria spicata, Á Löve )基因组 DNA为模板进行PCR扩增, 筛选到一条St基因组着丝粒区相对特异反转录转座子的部分序列pStC1, 长度为1.755 kb (GenBank登录号: FJ952565), 其中有800 bp与小麦着丝粒反转录转座子(CRW)的LTR区高度同源, 另有小部分片段与其外壳蛋白编码基因(gag)部分同源, 并且包含一段富含AGCAAC碱基的重复序列。以pStC1为探针, 对十倍体长穗偃麦草的FISH检测结果显示其基因组组成为两个St组3个E组(St₁St₂E^eE^bE^x); pStC1与中间偃麦草杂交时, 不仅St基因组上有强烈的荧光信号, 而且E基因组一些染色体的近着丝粒区域也有杂交信号, 说明偃麦草属异源多倍体物种在其形成及进化过程中St与E基因组之间在着丝粒及近着丝粒相关区域可能存在协同进化。     

九台晚李PGIP基因的克隆及生物信息学分析

以九台晚李叶片基因组为模板,PGIP基因保守序列设计引物,PCR扩增到1条全长1192bp的目的片段(GenBank登录号:GU068978)。该基因包含有1个完整的开放阅读框,由2个外显子和1个内含子构成,外显子总长990bp,编码330个氨基酸,其编码的氨基酸序列中含有一段典型的亮氨酸重复序列。序列分析表明:该基因与中国李、杏、桃、马哈利樱桃、梅等李属植物的PGIP基因序列一致度达95%~99%。系统进化分析显示出属内亲缘关系较近、属间亲缘关系较远的特点。该序列为植物分子抗病育种提供了1条新的基因资源。     

Development of reliable PCR-based markers linked to downy mildew resistance genes in lettuce

Summary Sequence characterized amplified regions (SCARs) were derived from eight random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers linked to disease resistance genes in lettuce. SCARs are PCR-based markers that represent single, genetically defined loci that are identified by PCR amplification of genomic DNA with pairs of specific oligonucleotide primers; they may contain high-copy, dispersed genomic sequences within the amplified region. Amplified RAPD products were cloned and sequenced. The sequence was used to design 24-mer oligonucleotide primers for each end. All pairs of SCAR primers resulted in the amplification of single major bands the same size as the RAPD fragment cloned. Polymorphism was either retained as the presence or absence of amplification of the band or appeared as length polymorphisms that converted dominant RAPD loci into codominant SCAR markers. This study provided information on the molecular basis of RAPD markers. The amplified fragment contained no obvious repeated sequences beyond the primer sequence. Five out of eight pairs of SCAR primers amplified an alternate allele from both parents of the mapping population; therefore, the original RAPD polymorphism was likely due to mismatch at the primer sites.