Epstein—Barr病毒膜抗原基因免疫的研究

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因,插入含有ＣＭＶ启动子的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３下游ＢａｍＨＩ位点,构建成真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ＭＡ。将纯化的ＤＮＡ注射Ｂａｌｂ／ｃ小鼠股四头肌。经免疫的动物产生抗ＥＢ病毒ＭＡ特异性的抗体和中和抗体,依赖抗体细胞介导的细胞毒作用（ＡＤＣＣ）,特异性Ｔ淋巴细胞增生性反应及细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤作用。基因免疫与基因－蛋白     

含有Epstein-Barr病毒膜抗原的重组表达质粒及其基因免疫

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒主要的膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因片段插入ｐＨＤ１０１－３质粒的ＣＭＶ启动子下游,构建了真核表达质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０,并转染２９３细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法证实,表达的抗原分子量为３５０ｋＤ．用能在真核细胞表达的重组质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０的ＤＮＡ,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ柱纯化后,注射经普鲁卡因预处理的Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠的四头肌,观察到ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ抗体水平比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ低,而ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ的持续时间比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ长。采用表达ＥＢＶＭＡ的质粒ＤＮＡ与ＣＨＯ细胞表达的ＭＡ蛋白免疫小鼠,均获得抗ＥＢＶＭＡ的抗体。     

Epstein-Barr病毒胸苷激酶在大肠杆菌表达的研究

研究重组EB病毒胸苷激酶(thymidine kinase of Epstein-Barr virus,EBVTK)在大肠杆菌中的表达,将EB病毒的tk基因与原核表达载体pBV220进行重组,构成质粒pBV220/tk,并在大肠杆菌DH5α中获得表达;采用限制性内切酶分析进行重组质粒的鉴定,SDS-PAEG电泳和Western blot反应检测蛋白的表达。结果显示成功地构建了pBV220/tk质粒,并有重组蛋白的表达,该重组蛋白可与鼻咽癌病人血清发生特异性反应。结果表明该重组蛋白可作为抗原应用于鼻咽癌病人血清TKIgA抗体的检测,为重组TK的生产,临床应用提供了实验依据。     

含有Epstein—Barr病毒膜抗原的重组表达质粒及其基因免疫

将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ（ＥＢ）病毒主要的膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因片段插入ｐＨＤ１０１－３质粒的ＣＭＶ启动子下游,构建了真核表达质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０,并转染２９３细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合。Ｗｅｓｔｅｍ－ｂｌｏｔ法证实,表达的抗原分子量为３５０ｋＤ。用能在真核细胞表达的重组质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０的ＤＮＡ,经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ２Ｂ柱     

鼻咽癌Epstein-Barr病毒的原位分子杂交研究

应用Epstein-Barr病毒编码的小RNA－1（Epstein-Barr virus encoded small RNA-1,EBER-1)分子探针进行原位分子杂交,检测沈阳地区鼻咽癌的Epstein-Barr病毒存在状况及意义。结果发现：EBER－1杂交信号定位于鼻咽癌的癌细胞核,在正常的鼻咽粘膜上皮细胞、间质细胞、粘液腺及淋巴细胞均为阴性。在53例鼻咽癌病例中,37例阳性,阳性率为69.8%。EBER－1的阳性表达与鼻咽癌的分化程度呈负相关,与患的生存期未见明显关系。提示：应用EBER－1分子探针可进行回顾性研究：EB病毒的存在与鼻咽癌的分化程度成负相关。     

Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

将切去３’端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因,插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游,构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ,使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为３４０ｋｄ和２２０ｋｄ。经过细Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,２周后小鼠血清中出现明显的ｇｐ３４０／２２０特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的ＥＢＶ－ＭＡ基因在ＣＨＯ细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为ＥＢ病毒人用基因工程亚单位疫苗。     

EB病毒胸苷激酶基因的扩增

ＥＢ病毒胸苷激酶基因的扩增陈尚武,陈瑞君,黄迪,朱振宇,马涧泉（中山医科大学生化教研室,广州５１００８９）（中山医科大学肿瘤研究所,广州５１００６０）关键词Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒,胸苷激酶,基因,聚合酶链反应鼻咽癌（ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ...     

Epstein-Barr病毒诱导永生化人上皮细胞恶性转化

为了使ＥＢ病毒能直接感染人上皮细胞,将ｐＳＧ－ＣＲ２－Ｈｙｇ载体转入永生化人上皮细胞（２９３细胞）中。通过间接免疫荧光法测定发现,转化的细胞表达ＥＢ病毒受体。用ＥＢ病毒感染ＣＲ２－２９３细胞后,２３％的细胞可表达ＥＢ病毒抗原。用ＴＰＡ作用于这些细胞后,表达病毒抗原的细胞数增加。用ＰＣＲ法从ＥＢ病毒感染细胞ＤＮＡ中扩增出ＥＢ病毒ＤＮＡＷ片段。在ＴＰＡ持续作用下,ＥＢ病毒感染细胞的形态特征发生改变。把ＥＢ病毒感染细胞接种在裸鼠皮下,每周注射ＴＰＡ,可诱导细胞在裸鼠体内形成肿瘤。经组织病理检查确诊,肿瘤为低分化上皮细胞癌。杂交试验证明,肿瘤组织细胞中有ＥＢ病毒ＥＢＥＲｓ存在。上述结果表明,ＥＢ病毒在ＴＰＡ协同作用下,可诱导永生化上皮细胞恶性转化。     

表达乙型肝炎病毒表面抗原和Epstein-Barr病毒膜抗原的双价痘苗病毒的组建

从痘苗病毒天坛株分离了晚期11k蛋白编码基因的启动子,以痘苗病毒天坛株为载体,构建了双价的重组痘苗病毒。分别在7.5k和11k蛋白基因启动子的控制下,表达乙型肝炎病毒表面抗原和EB病毒的膜抗原。用重组痘苗病毒免疫的家兔,同时产生对这两种抗原的抗体。免疫电镜下观察到乙型肝炎病毒表面抗原颗粒。     

Epstein-Barr病毒BNLF-1基因的克隆及其在PA317细胞中的表达

本文报道以人Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的潜伏膜蛋白基因ＢＮＬＦ－１作为目标基因,插入至逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ＬＭＰ及其反义载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ａｎｔｉ－ＬＭＰ,通过质粒ＤＮＡ的电转染和Ｇ４１８培养基筛选,然后对１０个抗性克隆进行基因整合分析,获得６个含ＭＬＶ－ＬＴＲ／ＢＮＬＦ－１融合基因的阳性克隆,采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明,在克隆细胞中表达了２．６ｋｂ的ｍＲＮＡ片段及相应的蛋白质分子,这是由ＢＮＬＦ－１基因的ＥＤＬ１启动子表达的产物。     

Epstein-Barr病毒基因工程活疫苗人体免疫的初步研究

Epstein-Barr(EB)病毒的原发感染发生在儿童时期,在我国3～5岁儿童的感染率为70％～90％。感染后终生带毒,并经唾液不断排出病毒。我国南方是鼻咽癌高发区,其发病率和死亡率均占恶性肿瘤的第一位。早期诊断方法的改进和早期治疗,使鼻咽癌治疗后的5年生存率明显增加,但不能降低发病率。EB病毒疫苗有可能成为控制该病的有效手段之一。 Epstein等人从淋巴母细胞株(B95-8细胞)细胞表面提取EB病毒膜抗原(MA),用于免疫棉顶猴能产生中和抗体。免疫动物能抵抗EB病毒攻击后所诱发的恶性淋巴瘤。该中和抗体在体外能中和EB病毒的转化活性。EB病毒的主要膜抗原(MA)是由分子量220kD和     

Epstein—Barr病毒潜伏膜蛋白（LMP）基因免疫的初步研究

利用基因免疫技术,将重组质粒ＰＢＳ－ＬＭＰ－Ｈｙｇ直接注入ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌中,于第２、４、８周,用间接免疫荧光法检测鼠血清中抗ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）特异抗体,结果表明,所有免疫小鼠（５／５）均产生特异体体,且抗体滴度随时间变化逐渐增高。     

用重组痘苗病毒感染动物细胞表达的Epstein-Barr病毒膜抗原检查IgA/MA抗体

用EB病毒膜抗原基因重组的痘苗病毒感染动物细胞,其细胞表面可表达EB病毒膜抗原,以此膜抗原作为诊断抗原检测血清中IgA/MA抗体,明显优于常用的B95-8细胞表面膜抗原,从而为研究人群血清抗体反应与鼻咽癌的关系,为鼻咽癌的诊断和普查开辟了新的途径。     

人精液对RAJI细胞中EPSTEIN-BARR病毒早期抗原的诱导

在大戟科、瑞香科、豆科和其它科植物中,发现有些植物含有能诱导人伯基特淋巴瘤细胞——Raji细胞中EB病毒早期抗原的物质,并已证明其中有的是很强的促癌物质,如12-0-十四烷酰巴豆醇-13乙酸酯(TPA)、桐油提纯的HHPA、芫花和黄芫花等。某些人的精液也含有能激活EB病毒的物质。本文报告中国人的精液,以及人精液与从宫颈癌病人分离的细菌培养液,对EB病毒早期抗原的诱导作用和协同诱导作用。     

血清中Epstein-Barr病毒膜抗原IgA抗体检测法的改进及应用

用萄葡球菌菌体A蛋白(SPA)预先处理被检血清,以去除抗体IgG部份的竞争性结合,提高了间接免疫荧光法检查鼻咽癌病人血清中EB病毒膜抗原IgA(IgA/MA)抗体的敏感性及特异性,检查48例鼻咽癌病人血清IgA/MA抗体,阳性率为100％,血清几何平均滴度为141;40例其它恶性肿瘤病人和46例正常人都检不出IgA/MA抗体,免疫荧光法测得IgA/MA抗体阴性的6例鼻咽癌病人血清,SPA吸收后呈阳性反应,此改进方法可用以追踪观察鼻咽癌病的病程及预后。     

鼻咽癌患者血清中抗Epstein-Barr病毒早期和晚期膜抗原抗体的检测

对Epstein-Barr(EB)病毒抗原的研究,发现有淋巴细胞确定的膜抗原(Lydma)、早期抗原(EA)、壳抗原(VCA)、核抗原(EBNA)、早期膜抗原(EMA)和晚期膜抗原(LMA)。除了Lydma抗原外,鼻咽癌患者对上述抗原均产生相应的IgG和IgA抗体。因而研究这些抗体,对阐明EB病毒与鼻咽癌的关系及鼻咽癌的早期诊断都十分有价值。     

Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征

对ＥＢ病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,ＥＢ病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体（Ｅｐｉｓｏｍｅ）形式存在,而其基因转录有如下特征：（１）ＥＢ病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达ＥＢＮＡ－１,并且此基因转录产物由一个在ＢａｍＨＩ－Ｆ区的启动子（Ｆｐ）驱动;（２）潜伏感染膜蛋白（Ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＬＭＰ）和末端蛋白（Ｔｅｒｍｉｎａｌ ｐｒ     

应用基因重组Epstein-Barr病毒早期抗原P83蛋白检测鼻咽癌患者血清中的IgA/EA抗体

将pUCB质粒表达的P83蛋白应用于免疫印迹法(IB)和ELISA中,检测了85例鼻咽癌(NPC)患者和100例健康人血清,同时与免疫酶法(IE)作比较。结果表明,免疫印迹法对NPC患者血清阳性检出率为94％;ELISA法阳性检出率为88％;而IE法阳性率为64％。三种方法检测健康人血清出现低水平IgA/EA抗体的阳性率分别为4％、3％及2％。用IE法检测IgA/EA抗体为阴性的NPC患者血清,用IB法检测的阳性率达87％,ELISA法阳性检出率为77％。IB法与ELISA法之间具有较好的正相关(r=0.67,P<0.01)。