人早幼粒白血病细胞(HL-60)的表面超微结构及其在诱导分化过程中的变化

应用扫描电镜技术,结合超薄切片和组织化学方法,观察分析了人早幼粒白血病细胞(HL-60)的表面形态结构。扫描电镜下,HL-60细胞最明显的表面形态特征是绝大多数(约90%)具有丝状伪足。丝状伪足呈丝状、指状或圆棒状,其平均长度为4—6μ,直径约为0.25—0.3μ。丝状伪足具有明显特征性分布,常以成簇或成束状态分布在细胞的周围或一侧。超薄切片和组织化学反应结果显示,丝状伪足的内部结构主要是微丝和糖原颗粒。大多数HL-60细胞具皱褶而极少数细胞显示微绒??毛。用维生素A酸处理HL-60细胞6天后,有些细胞的丝状伪足消失,其细胞表面变得不规则,出现大型钝形伪足。由于丝状伪足与大型钝形伪足的成分基本相同,以及钝形伪足的出现伴随丝状伪足的减少,故推测钝形伪足可能来自丝状伪足。文中讨论了HL-60细胞形态结构与生理功能的关系。     

几种促分化剂对人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞膜流动性的影响

本文探讨了以1,6-二苯基-1,3,5己三烯(DPH)作为探针测定人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞膜流动性的最适实验条件。在此基础上研究了促分化剂DMSO、TPA及GM_3对HL-60细胞膜流动性的影响。结果表明三种促分化剂都能明显地降低HL-60的膜流动性。作者们对膜流动性降低的可能机理进行了初步的讨论。     

HL-60-AR白血病细胞诱导分化性状的持续性表达

HGPRT~-人早幼粒白血病细胞突变株(HL-60-AR)与RA保温一定时间后,洗去药物继续培养,细胞分化性状(NBT还原能力、细胞膜C_3补体受体及形态变化)不但继续存在,而且能持续表达。撤去RA后连续传代培养,至少在传三代后细胞分化性状仍高度表达。然而,DMSO对HL-60-AR细胞的作用特点明显不同于RA。HL-60-AR细胞分化伴随增殖能力的降低。核酸分子杂交结果表明,细胞c-myc癌基因表达受抑先于细胞分化性状的获得和增殖能力的下降。     

急性早幼粒白血病HL60细胞电转染条件的优化

目的：比较不同电转染条件下,真核表达载体转染HL60细胞的效率,筛选得到针对HL60细胞最佳的电转染条件。方法：采用pDsRED-C1真核表达载体,分别在2mm和4mm电转杯中依照不同电转条件对HL60细胞进行转染,根据存活细胞所占比例确定电转参数;在转染48h后,比较不同质粒加入量及二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）加入电转体系前后的细胞转染阳性率。调整G418筛选浓度,在选定转染条件下进行HL60细胞电转,采用流式细胞技术,细胞化学染色及超微结构观察,分析电转前后HL60细胞的生物学性状。应用相同条件再转染eYFP-C1质粒于HL60细胞,G418筛选后观察荧光表达情况。结果：HL60细胞在2mm和4mm电转杯中的死亡数量随电击强度和脉冲次数的增加而升高,且方形波较回旋波有更强的击穿细胞膜的能力;固定电转参数下,2mm和4mm电转杯中的HL60细胞电转阳性细胞数随加入质粒量的增加呈先升高后下降的趋势,且在相同质粒加入量,2mm电转杯比4mm电转杯有更高的转染效率;在相同电转参数和相同电转杯中,预冷条件下加入DMSO电转时阳性率比不加入DMSO进行电转的阳性率高近13倍;400μg/ml G418是最佳筛选浓度;选定最佳电转条件进行电转,通过筛选,没有发现细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达,细胞形态原始,未见凋亡现象发生。相同条件电转eYFP-C1空载质粒于HL60细胞仍然可以获得很好的转染效果。结论：HL60细胞电转染条件的改良,可以有效提高HL60细胞的电转阳性率,为后续细胞真核表达载体的转染及基因功能研究奠定基础。     

HL-60细胞诱导分化与细胞膜流动性变化研究

 本实验以二甲基亚砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)为诱导剂,诱导人早幼粒白血病细胞系HL-60沿粒系统成熟分化。动态观察了诱导后1—6天HL-60的形态、功能成熟度改变、膜流动性和增殖活性的变化。结果表明,早幼粒细胞由诱导前的78％降至5％,杆核与分叶核细胞由6％和1.5％分别增加至32.5％和5.5％。NBT(Nitroblue tetrazolium,四唑氮蓝)还原试验显示其功能亦渐超成熟。诱导后HL-60 DNA合成速率明显降低(降低40～75％),膜脂流动度亦显著降低(降低30％,P<0.01)。提示诱导分化后的HL-60细胞不仅获得了与正常成熟粒细胞相似的形态功能特征,同时还失去了膜流动性增高及快速繁殖增生的恶性特征。     

复方木鸡冲剂诱导人白血病细胞HL-60凋亡机制研究

目的:探讨复方木鸡冲剂诱导人白血病细胞HL-60细胞凋亡的作用和机制,为相关中药开发提供实验资料.方法:用MTT法检测复方木鸡冲剂对HL-60细胞增殖活性的影响,光镜下观察细胞形态的变化;流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡,并分析细胞周期;免疫细胞化学法检测Bcl-2、caspase-3、p21WAF1的表达.结果:MTT法显示复方木鸡冲剂能抑制HL-60细胞的生长,细胞呈凋亡形态学变化.流式细胞仪检测结果为细胞凋亡率明显增高,出现GO/G1期阻滞.Bcl-2表达降低,caspase-3表达增高,p21WAF1表达强阳性.结论:复方木鸡冲剂明显抑制HL-60细胞的生长,其抗肿瘤的机制与诱导肿瘤细胞凋亡、促进细胞分化有关.     

重组人粒系集落刺激因子(rhG-CSF)对白血病细胞HL-60生长的影响

本文研究了rhG CSF对人白血病细胞系HL 6 0的作用。结果表明 :rhG CSF能够显著抑制HL 6 0细胞生长和C myc基因的表达 ,降低3H TdR的摄入。在含rhG CSF的培养液中经过 2～ 5天的培养 ,部分HL 6 0细胞具备NBT还原能力。这或许说明rhG CSF能导致HL 6 0细胞向成熟方向分化的结果。     

Isoverbascoside对HL-60细胞的诱导分化和细胞毒作用

不同时间、不同浓度的isoverbascoside体外处理HL-60细胞,以形态改变(光镜和透射电镜观察)、功能分化(化学发光检测吞噬能力)、恶性度降低(裸鼠成瘤试验)等指标观察其诱导分化作用;以台盼蓝拒染作用和电镜下形态变化确定其细胞毒作用;用流式细胞术测定其对HL-60细胞周期的影响。20—25μmol/L Isov 1—3天诱导HL-60细胞向粒系方向分化,细胞吞噬能力提高,裸鼠成瘤性降低。30—35μmol/L Isov 2—3天对HL-60细胞有强烈的细胞毒作用。20μmol/L Isov处理12h可引起HL-60细胞的G_1期阻滞,在72h时引起HL-60细胞的G_2/M期的阻滞。     

维生素A酸诱导HL-60细胞分化后银染核仁形成区的研究

用Ag-NOR、Brachet反应和作者改进的悬浮培养细胞Ag-aNOR的TEM技术等,综合地对RA诱导HL-60细胞分化后银染核仁形成区的变化进行了研究。实验结果表明,银染NOR的均值在给药组与对照组细胞中差异不显著。对间期细胞进行Ag-aNOR反应,结果??表明其数量在给药组比对照组明显减少,同时发现Brachet反应显示富含rRNA的核仁数与Ag-aNOR数改变极为一致,提示虽然活性的rRNA基因的数量在RA诱导分化的HL-60细胞中不变,但其转录明显受抑,使rRNA合成减少,进而在细胞水平出现了恶性表达的核仁变得少而小、甚至消失的分化表型。HL-60细胞的Ag-aNOR电镜观察更进一步证明了这一结论。     

羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖菜多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC_(50)分别为390,362,402,421mg/L;药物浓度为300mg/L和500mg/L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、过集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G_1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G_2/M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G_2/M期细胞阻滞有关。     

佛波醇酯诱导HL-60细胞巨噬细胞样分化时蛋白激酶C活力及分布的改变

本文对佛波醇酶诱导人早幼粒白血病细胞系HL-60细胞分化为巨噬细胞样细胞对蛋白激酶c活力及其在亚细胞分布的变化进行了研究。蛋白激酶c活力在TPA处理1小时即明显降低,此低水平的酶活力持续整个实验时期。酶的亚细胞分布研究提示TPA处理细胞胞质组分酶活力剧烈降低,而颗粒组分存在一高盐浓度洗脱的酶活力峰。蛋白激酶c抑制剂三氟过(口了)嗪单独处理HL-60细胞导致胞质和颗粒组分酶活力升高,但并不诱导细胞分化;若与TPA合并处理细胞,酶活力又降低,此时细胞又分化为巨噬细胞样细胞。对上述结果的可能机理进行了讨论。     

蛋白激酶C亚型在HL-60细胞诱导分化中的变化

用全反式维甲酸(ATRA)或佛波酯(PMA)处理人早幼粒白血病细胞(HL-60)3天,用形态学,NBT还原实验,特异性和非特异性酯酶测定,证明细胞分别向粒细胞或单核/巨噬细胞分化。通过免疫组化法观察了蛋白激酶C(PKC)α,βⅠ和βⅡ亚型在分化后的变化。结果显示,ATRA可引起HL-60细胞PKCα,βⅠ和βⅡ的含量升高,分别为对照的5.0,2.8和4.2倍,并存在从胞膜向胞质转位。PMA则使PKCα和βⅡ的表达水平下降,而PKCβⅠ增高,且三种亚型均在核内有不同程度的表达。结果提示HL-60细胞向粒细胞的分化可能需要PKCα和PKCβ评的持续激活,而PKC的核内转位可能是HL-60细胞分化为单核/巨噬细胞的重要环节。     

HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中prohibitin的表达与定位变化

本文以HMBA诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞为对象,对prohibitin在核基质中存在、分布及其与相关基因产物在HMBA处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白印迹杂交结果确证prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调,免疫荧光显微镜观察显示prohibitin定位在核基质上,经HMBA处理后出现分布位置与表达水平的变化.激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与MG-63细胞中c-fos、c-myc、p53和rb基因产物均存在共定位关系,但在HMBA处理后细胞中其共定位分布区域出现变化.研究结果证实prohibitin是一种核基质蛋白,定位于核基质上,prohibitin在人成骨肉瘤MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布及其与相关癌基因、抑癌基因产物的共定位现象值得进一步探索和研究.     

小鼠Friend细胞诱导分化过程中c-myc和P~(53)基因表达与终端分化

本文观察了DMF,DMSO和HMBA对小鼠Friend细胞(MELC)诱导分化及TPA抑制分化过程中c-myc和P~(53)基因表达与终端分化的关系。MELC被5 mmol/L HMBA诱导分化后分别在1小时和4小时P~(53)与c-myc表达急剧下降,诱导2天,5天联苯胺阳性率和β-珠蛋白基因表达明显升高,c-myc和p~(53)基因表达仍维持在很低水平,同时G_1期细胞百分数增加。低浓度TPA明显抑制HMBA诱导分化效应,β-珠蛋白基因表达被抑制,但c-myc和P~(53)基因表达仍处于低水平,看来与增殖有关的c-myc和P~(53)表达之降低并不能直接导致分化基因的表达。     

胃癌细胞与正常细胞的间隙连接通讯和促癌剂效应的研究

本文介绍用一种新的快速、简便SLDT’技术研究培养细胞的间隙连接通讯功能。细胞划痕后,标记两种荧光染料——Lucifer’Yellow(LY, MW.457.2)和Rhodamine Dextran(RD,MW.10,000)。RD停留原位,LY小分子传输到邻近细胞,表示间隙连接通讯现象。用SLDT方法观察到人胃腺癌MGC一803细胞无连接通讯功能。钙调素抑制剂T"FP有使胃癌细胞恢复连接通讯的效应。中国地鼠V,。细胞,wB大鼠肝细胞和鸡胚成肌细胞有通讯功能。促癌变剂TPA阻断正常细胞的间隙连接通讯,并阻断由。rFP丐导的胃癌细胞连接通讯。     

大剂量~(60)Co照射后残余造血干细胞增殖与分化性能的研究

本文报道了F_1小鼠经~(60)Co γ射线一次整体照射8.5 Gy后不同时间,骨髓CFU_s、GM-CFU_c、BMC、脾脏T淋巴细胞转化功能和外周血象的动态变化,以及对BFU-E、CFU-E进行了抽样检测。结果表明,照射后各项指标均呈指数级锐减,但下降幅度依各自不同的辐射敏感性而异。恢复的先后顺序是:BMC数和外周血象经过1个月即达正常;GM-CFU_c和CFU_s于2—4个月后逐渐恢复原来的数量;淋转功能直至3个月末仍为对照值的55%。应用Ara-C自杀率测出照射后CFU_s的增殖率持续高于正常,3个月末才回复常态。针对临界全致死剂量γ射线照射对小鼠造血细胞动力变化过程的观察,以及对残余造血干细胞增殖与多向分化能力的影响进行了分析和讨论,以期全面地揭示造血功能辐射损伤的基本规律。