感染小鼠组织中Q热立克次体的分子病理学检测

腹腔注射Q热立克次体悬液感染BALB／c小鼠,发病后解剖,取主要组织脏器,应用免疫组化和原位杂交检测感染小鼠体内Q热立克次体的抗原分布和DNA在靶细胞中的表达,探讨Q热病变规律及致病机理。结果显示阳性信号多位于单核-巨噬细胞系统细胞胞浆内。结果提示免疫组化和原位杂交技术可以作为Q热特异性的诊断方法,并为致病机理的研究提供线索。     

极端嗜热古菌DNA修复核酸内切酶的研究进展

极端嗜热古菌由于生活在高温环境,其基因组DNA面临着严重的挑战,因此,它们如何维持其基因组稳定是本研究领域最为关注的科学问题之一。极端嗜热古菌具有与常温微生物相似的自发突变频率,暗示着它们比常温微生物具有更加有效的DNA修复体系进行修复高温所造成的基因组DNA损伤。目前,极端嗜热古菌DNA修复的分子机制尚不清楚。核酸内切酶在DNA修复途径中发挥着重要的作用。基因组序列显示极端嗜热古菌编码多种DNA修复核酸内切酶,但是其研究尚处于初期阶段。本文综述了极端嗜热古菌DNA修复核酸内切酶Nuc S、Endo V、Endo Q、XPF和Hjc的研究进展,并对今后的研究提出了展望。     

Q热疫苗研究进展

本文对Q热疫苗的研究进行了回顾、总结。灭活疫苗能刺激机体产生较强的抗Q热特异性体液免疫和细胞免疫，免疫保护效果好且持续时间长。但是，灭活疫苗有较强的副反应，可引起局部脓肿等副反应。减毒疫苗虽然免疫保护效果好，但可能有毒力恢复的危险。亚单位疫苗主要有CMR、TCAE和LPS，其中CMR和TCAE具有与灭活疫苗相近的保护效果，副反应很小，已进入临床研究。目前研究较多的保护性抗原蛋白有27kD、30kD、34kD、热休克蛋白等主要表面抗原，它们有可能发展成为重组亚单位疫苗。多价亚单位疫苗、DNA疫苗以及以活菌为载体的重组菌苗将是有前途的新型Q热疫苗。     

小鼠骨骼肌电转移hPON1 Q基因可以减轻CCl4诱导的急性肝损伤

目的 研究人Q型对氧磷酶1（human paraoxonase 1 Q,hPON1Q）转基因表达对小鼠四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导急性肝损伤的缓解效果,为防治肝脏疾病寻找新的途径.方法 小鼠骨骼肌直接注射含hPON1Q的真核表达质粒裸DNA并用电刺激介导表达,测量血清芳香酯酶的活性变化显示hPON1Q转基因表达效果,并使用血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）为指标及肝组织病理切片检测肝损伤的程度.结果 hPON1Q转基因表达小鼠血清中芳香酯酶活性提高约50%,并可持续到16 d以后.使用PON1裸DNA电刺激治疗组比对照组小鼠在用CCl4诱导24 h后血清芳香酯酶活性高60%,两种血清转氨酶指标及肝组织切片的病理学分析表明肝脏损伤程度有明显的减轻.结论 电刺激介导的重组人PON1Q基因裸DNA在小鼠体内的表达对CCl4诱导的肝损伤具有显著的防护作用.     

RECQL5基因的结构及其生物学功能的研究进展

RECQL5(Rec Q protein-like 5)是Rec Q DNA解旋酶家族的一个成员,同属于DEXH-box DNA/RNA解旋酶家族。Rec Q家族中的三成员(WRN、BLM、RECQL4)基因突变与人类一些遗传疾病相关,而RECQL5基因至今未发现与人类疾病相关。近年来研究发现,RECQL5对维持DNA的稳定以及在DNA的复制、修复、重组和转录等过程中发挥着非常重要的作用。该文主要对RECQL5基因的结构及其在DNA复制、修复和转录等方面的作用进行综述。     

主编导读

热稳定性高、耐盐性能好、扩增速率高、保真度高的DNA聚合酶在PCR反应中具有广泛的用途.翁妍等[1]从超嗜热古菌(Thermococcus eurythermalis)中克隆了一个B家族DNA聚合酶,命名为Teu-PolB DNA聚合酶.该DNA聚合酶的扩增速率和保真度优于Taq和Pfu DNA聚合酶.扩增产量略高于P...     

番茄加工产品DNA提取方法研究

采用SDS法、CTAB法、热碱法和试剂盒法提取番茄加工产品的DNA,并通过PCR方法是否检测出番茄内源基因来评价DNA提取效果.结果显示,番茄加工产品经弱碱稀释处理后,CTAB法和热碱法提取的DNA利用嵌套PCR检测出内源基因,可以满足基因检测需求.同时对加工产品DNA提取及基因检测需注意的问题进行了探讨.     

Q热的诊断、治疗及免疫予防

<正> DerricR首先报导了在澳大利亚的布里斯班和昆布兰屠宰场工人中连续暴发流行Q热。当时由于对病原学和病因缺乏认识,定名为Q热,“Q”表示疑问号“?”的意思。后来该病原鉴定为立克次体,即贝纳氏科克斯氏体( coxilla burnetii)。 Kapl-an和Betagna通过调查发现,它广泛存在于五大洲的51个国家之中。最初作为动物性疾病,但在第二次世界大战期间欧洲有数千士兵发生Q热,从而得出了Q热这种疾病具有军事意义的概念。例如,1943至1944年流行的所谓“巴尔干流感”更影响了德军在意大利、乌克兰,克里米亚半岛、保加利亚和希     

不同粪便DNA提取方法比较分析北大核心CSCD

肠道微生物群落结构和多样性与人体疾病密切相关。然而,相关群落结构分析结果可能受到DNA提取质量等实验因素影响。因此,评估不同DNA提取方法对肠道特定种属的提取效果,对于全面、准确获取人体肠道微生物谱,深入探究肠道微生物群落结构具有指导意义。本研究旨在借助实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT qPCR)技术,以DNA提取纯度、浓度,以及对肠道中特定种属微生物基因组DNA的提取丰度为指标,对5种DNA提取方法进行比较分析。结果表明,试剂盒Q的提取效果最佳,特别是对乳杆菌属和双歧杆菌属等革兰氏阳性菌的提取效果较好。N试剂盒的平均DNA提取浓度较Q试剂盒低,但在纯度方面,二者无显著性差异。与其他3种商用试剂盒(M、PSP、TG)相比,N方法对肠道内指定微生物基因组的提取效果仅次于Q试剂盒,位居第二。相比之下,M试剂盒提取所得DNA,质量较高,但浓度偏低,对于肠道内革兰氏阳性菌的提取效果不很理想。TG试剂盒和PSP试剂盒提取所得DNA在浓度、质量以及细菌丰度方面均不及其他验证的试剂盒。综上,Q试剂盒可作为肠道微生态研究相关实验中获取高质量基因组DNA的提取方法。本研究结果为肠道微生态研究相关实验中基因组DNA提取方法的选择提供参考依据。     

Hoechst公司改变兼并计划

西德Hoechst公司上个月撤回收买美国Gene-Tvak Systems公司(马萨诸塞州)的计划.中止收买的理由还不清楚.Gen-Trak公司是开发制造DNA探针诊断药的厂家.1988年销售额为2580万美元,纯利润70万美元.主要开发检查食品中沙门氏菌的DNA探针等.正在研究用Qβ复制酶的RNA扩增反应,目标是开发基因诊断系统.在     

Q热的诊断治疗及免疫予防(续一)

<正> 二、临床症状感染贝纳氏立克次体可引起急性全身性疾病,表现为突发性不适、寒战、发热、肌肉酸痛和剧烈的头痛。甚至在退热后仍感虚弱和疲倦达数周或数月之久。Q热的临床诊断是困难的,因其症状与流感、急性布鲁氏菌病、伤寒或支原体性肺炎相类似。本病使人极感虚弱,在高加索人中死亡率估计低于1％。根据Derrick在Brisbane(澳大利亚)对237例诊断为Q热的病例的综述,将本病分为三个期。1.潜伏期:Q热的潜伏期约13～37天,平均19～20天。Tigertt对志愿者经呼吸道途径进行实验性感染,用10个ID_5o豚鼠感染剂量的志原感染者潜伏期为17天,使用15000～150000个ID_5o的感染者潜伏期为10     

临床标本细菌基因组DNA提取方法探讨

目的优化细菌基因组DNA提取方法,使其适合临床细菌分子生物学检测需要。方法分别采用专用DNA提取液法、热裂解法、溶菌酶法、热裂解法与碱性裂解法组合改良法,对纯培养细菌和临床标本中细菌基因组DNA进行提取。结果专用DNA提取液法、溶菌酶法提取成功率为100%,热裂解法革兰阳性菌提取成功率为0%,革兰阴性菌成功率为100%,碱性裂解液法在NaOH浓度大于4 mmol时提取成功,临床标本在NaOH溶液超过20 mmol/L并含2%SDS时细菌基因组DNA的提取成功率为100%。结论热裂解法与碱性裂解法组合改良法提取细菌基因组DNA方便快速、简单实用,适用临床标本检测。     

一VHL 家系致病基因突变的检测与分析*

目的:研究中枢神经系统血管母细胞瘤(VHL)基因突变的主要类型和发生情况,探讨VHL疾病发生的原因、临床特点等。方法:以基因组DNA为模板,PCR扩增VHL基因3个外显子及5’UTR区域,结合DNA直接测序的方法,对一个有多个小脑血管母细胞瘤患者的家系进行VHL基因突变检测。结果:发现该家系VHL基因5’UTR区、外显子1和外显子2正常,外显子3存在c.499C>G的改变,为一个错意突变,氨基酸改变为Arg-Gln(p.R167Q),该突变是导致这个家系的患者发病的直接原因。结论:VHL疾病的突变主要集中在VHL蛋白的α、β结构域,位于α结构域的p.R167Q突变为该VHL家系致病的主要原因。     

盐析法提取烟粉虱基因组DNA

所提供的提取烟粉虱基因组DNA的新方法-盐析法,同氯仿-异戊醇抽提法相比,无需利用研磨棒,提取基因组DNA所用时间更短并且有效地避免了氯仿-异戊醇对实验人员的身体伤害.经检测,利用盐析法可以有效的提取B型烟粉虱的卵、伪蛹和成虫、Q型、ZHJ-1型与ZHJ-2型烟粉虱成虫的基因组DNA,并且适用于RAPD、COI、SSR分子标记的PCR扩增.     

番鸭细小病毒强、弱毒株VP2基因的序列测定比较

According to the complete nucleotide sequence of Muscovy duck parvovirus registered in the gene bank, two modified primers (LHMP7/LHMP8) were designed and, for each of them, a restriction endonuclease recognition site, SacⅡ or KpnⅠ, was included respectively. The DNA encoding VP2 structural protein of the wild strain MDPV Q and the attenuated strain MDPV 26 which had been derived by continued passage of virulent wild type (MDPV Q) in Muscovy duck embryo were amplified by PCR and recombined into T vector and sequenced respectively. It shows that both DNA encoding VP 2 structural protein of MDPV Q and MDPV which has been registered in the gene bank had the high homology (97.9%). MDPV 26 and MDPV Q displayed 99.7% identity, and shared 98.3% homology with that of reported MDPV.     

Qβ复制酶与RNA重组技术

以往的遗传工程主要是设计生物的基因蓝图,转移DNA的过程,其关键是DNA的重组操作.自1983年哥伦比亚大学的Kramer,Mills和Miele建立RNA重组技术以后,人们认为遗传工程的内容必将极大地丰富起来. 一、Qβ复制酶和MPV-1 RNA RNA重组技术是在需求大量RNA的刺激下发展起来的.细胞内的RNA是DNA的转录产物,而转录要求一定的条件,进行的规模也很有限。即使在转录活跃的情况下,一个DNA分子一次产生一个RNA分子,RNA分子的量只能按算术级数增长.因此要想得到足     

大规模合成长链RNA的简易低成本工艺

由于现有技术所限,RNA分子长度和二级结构往往成为RNA合成困难的主要原因.提供了一种简单低成本大规模制备和纯化长链RNA药物的新工艺,尤其针对具有稳定二级结构的长链RNA药物.采用引物延伸方法替代PCR和线性质粒DNA方法制备线性DNA模板可减少步骤及降低污染,然后用T7 RNA聚合酶转录制备的甲氧基修饰的线性DNA模板获得高均一度的长链RNA,转录粗产物直接用source 15Q阴离子HPLC分离T7 RNA聚合酶、rNTP、转录中断产物、内毒素和模板DNA等,从而获得高纯度RNA终产物.该工艺无需繁琐的酚/氯仿抽提和RNA变性,尤其适用于RNA的大量制备.     

极端嗜热古菌——芝田硫化叶菌DNA结合蛋白Ssh12对DNA超螺旋的影响

通过SPSepharose,DNA纤维素和磷酸纤维素等柱层析 ,从极端嗜热古菌———芝田硫化叶菌 (Sulfolobusshibatae)中纯化得到分子量为 11.5ku的DNA结合蛋白Ssh12 .Ssh12约占细胞总蛋白的 4% .该蛋白既能与负超螺旋DNA也能与松弛DNA结合 .利用含单切刻环状DNA进行的切刻闭合分析表明 ,Ssh12在与DNA结合时能够固定负超螺旋 .这种能力在室温 ( 2 2℃ )下很弱 ,而在 3 7℃以上则大大增强 .Ssh12的细胞内含量和固定负超螺旋的能力提示 ,该蛋白对于芝田硫化叶菌染色体DNA的组织以及热稳定性起着重要作用 .     

荧光定量PCR测定端粒长度

目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应（Q—PCR）方法测定端粒长度。方法选取9种人类细胞株,提取基因组DNA,采用Q—PCR方法测定相对T／S比率,DNA印迹法测定末端限制性片段（TRF）长度,进行二者之间的相关性分析。结果定量PCR测定端粒长度相对T／S比率为0．68±0．57,DNA印迹法测量平均TRF值为8．57±2．34,两种方法测定结果的相关性分析R2=0．7807（P〈0．01）。结论采用荧光定量PCR方法测量端粒长度具有重复性好、省时、简便、可靠的特点,可高通量处理大量样品。     

单引物PCR法引入定点突变

目的:利用单个突变引物,在含人呼吸道合胞病毒F蛋白基因编码序列的pc DNA3.1(+)-F质粒中,通过单次环形PCR在特定序列位置引入定点突变。方法:以双链环状的pc DNA3.1(+)-F质粒DNA为模板,设计分别含有三种目的突变N70Q,I431N,Q270T的三条单引物,分别进行单次PCR。用甲基化DNA特异的限制性内切酶Dpn I处理PCR产物后转化大肠杆菌DH5α,进行克隆筛选,酶切鉴定和测序分析。结果:酶切鉴定结果和测序结果均符合预期,利用单引物PCR法成功在含人呼吸道合胞病毒F蛋白基因编码序列的pc DNA3.1(+)-F质粒DNA中引入了单碱基突变、两个间隔碱基突变及相邻三碱基突变三种目的突变。结论:单引物PCR法解决了常规定点突变方法中多个PCR反应,程序繁琐及突变效率低等问题,是一种简便、快速、有效的基因工程定点突变新方法。