5-碘脱氧尿普对活体中姐妹染色单体互换的一些效应

1976年,Vogel和Bauknecht报道了在活 体中显示姐妹染色单体差别染色（SCD）的方 法^[11],此后,这种方法及姐妹染色单体互换 (SCE）法便成为检测诱变剂和致癌物的有效手 段’^[6-10]. 1980年,我们实验室成功地用5-碘脱 氧尿苔(IdUrd）代替5-嗅脱氧尿普(BrdUrd), 多次在小鼠腹腔注射后观察骨髓细胞的SCE^[2], 虽得到了很好的结果,但操作麻烦,药物毒性 大,实验动物极易死亡。因此,我们参照Allen 等人的工作^[5],对上述方法作了改进,用埋植药 片法让药物在活体内缓慢释放,诱发SCE,得 到了满意的结果。     

月经初潮与骨化、身高及遗传的关系

Freudenberger等^[4]和Beck"]^[5]早就证明：雌 激素可抑制幼鼠生长,加速骨im愈合。Pfeiffer^[6] 和Silberg^[7]也作了类似的工作,看到经注射雌 激素的小鼠长骨较短,因为干N端是长骨延长 之处,所以他认为这就是哺乳动物的雌性个体 一般比雄性较小的原因。在人类,虽然骨N愈 合比动物迟得多,而规律应是相似的。     

人胎儿发育过程中核酸含量的变化

胚胎发育中核酸的测定是研究胚胎生化的 重要方面之一。Davidson等曾报道鸡胚、羊胚 各器官核酸的含量^[1]及鸡胚胎的心脏体外生长 过程中核酸含量的变化^[2].THMo中eeBa等研究 了泥鳅卵发育过程中核酸的变动趋势^[6], A13TXWEM 等测定了鱼在胚胎过程中的核酸^[5]。人 胚胎核酸含量只见过零星报道^[2]。我们测定了 24名胎儿9种脏器核酸的含量,胎儿的胎龄从 12-40周,随着胎龄增长,比较了各脏器内核 酸含量的变化趋势。     

上海地区260对双生儿的血型研究

我国民族的血型分布调查,早在1918年就 开始,到1963年才报告了14个民族的ABO血 型分布,继后又调查了10个民族Rh血型的分 布^[1]。关于双生儿的调查^[2],多胎妊娠的分析^[3,4]国内虽有报道,但有关双生儿血型研究尚未见 到。本文将上海市260对双生儿的4种血型分 布情况,以及一套以血型诊断我国汉族双生儿 卵性的方法予以介绍。     

几种作物染色体的Giemsa N一带

近年来，在高等植物染色体的研究中也开 始应用Giemsa N一带染色技术^[4,5,7,9]。所获得 的结果并不一致，有的学者证明N一带染色技术 对NOR（核仁组织区）有专一性^[4,7]，有的学 者则证明N一带染色技术与NOR并不存在有 相关联系^[5,7].     

哺乳动物早期胚胎体外培养的研究

体外培养哺乳动物卵细胞技术是实验胚胎 学和发育遗传学研究的重要手段。实验哺乳动 物如小鼠,仓鼠、大鼠和兔等卵细胞的体外培养 已有许多报道^[1,3,4,6-11],尤其是小鼠卵细胞的培 养工作更多,可以说已是常规化了。但是我国 这方面的研究还较少,就连体外培养的早期受 精卵,也往往不能发育。     

椪柑营养诊断的DRIS初步标准

自1973年Beaufils提出综合诊断施肥法(Diagnosis and Recommendation Integrated System,简称DRIS)^[1]后,Sumner等人相继制订了大豆^[2]、玉米^[3]、甘蔗^[4]、马铃薯^[5]和小麦^[6]等农作物的DRIS标准,并在生产中获得了广泛的应用。但在柑桔生产中,直到1984年Beverly等人才建立伏令夏橙的DRIS标准^[7]。而对椪柑的DRIS标准则至今尚未见报道。本文根据庄伊美等报道的福建省24个高产(亩产2000-5000公斤)椪柑园的资料^[8],试图制订椪柑的DRIS初步标准,以供生产上应用之参考。     

利用CRISPR/Cas9系统构建FGF21基因敲除小鼠模型

成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factors, FGFs)是细胞间的多功能信号分子,调节生物体的多种生理功能。FGF21作为一种重要的调控因子,对毛囊发育及生长周期具有重要作用。为研究FGF21基因对毛囊发育及生长周期的影响及作用机制,本研究通过构建靶向敲除FGF21基因的载体,体外将Cas9 mRNA和gRNA显微注射到FVB小鼠受精卵中,在小鼠FGF21基因的第1外显子上造成移码突变,从而获得FGF21基因敲除(knock out, KO)小鼠。通过测序鉴定F₀代小鼠基因型,共获得3只FGF21等位基因敲除小鼠(Fgf21 ^-/-);qRT-PCR和Western blotting结果表明,在Fgf21 ^-/-小鼠中未检测到FGF21 mRNA表达和FGF21蛋白表达;经脱毛再生及皮肤组织H&E染色发现,与野生型(wild type, WT)小鼠相比,Fgf21 ^-/-小鼠体重降低、器官组织未出现异常变化、毛发生长速度减慢、毛囊的直径和毛发的密度均减小。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Fgf21 ^-/-小鼠模型,为后续研究FGF21基因在毛囊发育及生长周期中的功能提供了更好的动物模型。     

高等植物基因组结构

高等植物基因组结构的研究是当前植物分子生物 学研究的一个重要领域。1976年Walbot和Dure报 道了棉花DNA复性动力学研究结果^[26],同年Flavell 和Smith发表了小麦方面的工作^[12] 迄今为止已报 道的经DNA复性动力学方法系统研究过的高等植物 还有： 烟草^[29],豌豆^[22,]大豆^[1,15],蚕豆^[27]黑 麦^[25]欧芹^[29],绿豆^[23],玉米^[16],花生^[8],粟^[28],亚 麻^[6]等。从已发表的情况来看,高等植物基因组结构 在主要方面都和已知的动物方面的情况相仿,下面我 们分几个方面逐项加以讨论。     

介绍质粒DNA快速微量制备法

关于质粒制备,已有一些方法可以采用,经采用德是CsCl-溴化乙锭密度梯度离心^[2],其他还有Hirt^[6],Currier^[5],Colman^[3].Michael Zasloft^[7],Birnboin^[1].以及Cornelis^[4]等人的方法。但所有这些方法都太花时间。本文介绍一种快速质粒DNA微量制备的方法,能在2小时内制备出可被限制性内切酶切割并可用于绘制物理图谱的DNA制剂。     

羊水细胞原位培养法

自从Steele和Breg^[4],应用等量的TC199和 Eagle培养液,加12%小牛血清和12%人血清 最先培养羊水成功,并用于胎儿染色体疾病的 产前诊断之后,此项技术已成为产前诊断的一 个重要手段。然而,羊水细胞是胎儿皮肤等的 脱落细胞,大部分是固缩的,死亡的,只有一部 分是活细胞,且随着妊娠周数而变化^[5],不同妊 娠周数的羊水中所含活细胞数的多少及血清的 质量133和带血的羊水样品^[2]均可直接影响培养 结果。因此要获得羊水细胞的培养成功是不容 易的。经过培养方法的不断改进,成功率由 19%提高到97%^[2]。我们在1977年应用简易 羊水细胞培养法,获得了成功^[1], 1980年6月 间我们吸取了国外的先进技术,结合本实验室 的条件,开展了co,培养箱中羊水细胞原位培 养法,取得成功。     

影响pBR322质粒DNA对E. Col I C600转化的因子

在DNA体外重组技术的研究和应用中，转 化是个很重要的步骤。自Cohen等人^[2]在1972 年首次用CaCl：处理的方法成功地进行了R因 子对E. colt C600的转化之后，这个方法一直 广泛地应用于大肠杆菌各受体菌系的转化。鼠 伤寒沙门氏杆菌S. typhimurium^[3]和金黄色葡 萄球菌S. aureus^[4]，的转化也都沿用此法。直 至1978年，Michael等^[5]在用pBR 322质粒 DNA对E. colt X1776的转化中却采用了与 此不同的方法。     

小鼠腹水型淋巴肉瘤一号（L1）核型分析

小鼠淋巴肉瘤一号（简称L₁肉瘤）是1956 年我国自己创立的可移植性瘤株^[1],可分为实 体瘤和腹水瘤。本文叙述的是腹水瘤,是一种新 型的瘤株,建株已有20多年。对该瘤株我们仅 仅作了组织学方面的观察,而细胞遗传学方面 的研究至今还未报道过。大量的实验研究证明, 染色体异常与细胞癌变有非常密切的关系^[2,5]。此外,在研究肿瘤时染色体数目是一个很重要 的参数,因为具有不同倍数的癌瘤细胞,它们的 生物学行为也不完全相同^[4,6]。本工作对该瘤 株的核型（包括Giemsa带和着丝点异染色质 带）作了初步的分析。     

小鼠肝核仁体外转录的研究

真核细胞基因的表达及其调控是当前分子 生物学领域中极为重要的研究课题之一,尤其 是特定基因的表达与调控更加引人注意。真核 细胞的核仁是核搪体装配的场所,它含有多拷 贝的特定基因— 核糖体RNA基因（rDNA) 和专门负责转录rDNA的RNA聚合酶I,唯 一的基因产物是rRNA。因此,核仁及其染色 质是研究特定基因转录及其调节控制的一个理 想系统。Busch 等〔141于1964年第一次证明离 体核仁能在体外系统中合成rRNA。其后,不少 工作者分别用鼠肝细胞^[7,15]、蛙卵母细胞^[8] 、四 膜虫细胞^[5],以及多种人工培养细胞(Novikoff 肝癌细胞、Hela细胞、Ehrlich 腹水癌细胞 等^[1][2]的核仁及其染色质对rRNA的体外合 成进行了研究。我们以小鼠肝核仁为材料,研 究核仁染色质的结构与功能,试图寻找与rRNA 体外合成有关的某种调控蛋白,以便阐明真核 细胞核糖体基因表达的调控机理。     

完整的供体细胞膜及供体胞质对小鼠体细胞克隆胚发育的影响

利用显微注射和电融合的方法都可以成功地获得体细胞克隆小鼠, 由于电融合法操作耗时, 融合率低, 因而大多数克隆小鼠是采用注射方法。而注射法需要将供体细胞核从细胞中分离出来, 此分离操作有可能导致对DNA的损伤, 曾有人使用直径较粗的注射管进行完整的供体细胞注射, 这种方法操作相对简单而且对供体核没有损伤。为了研究这种方法在小鼠核移植中是否适用, 本实验使用完整的小鼠卵丘细胞作供体, 进行显微注射, 结果显示, 完整的卵丘细胞注入卵母细胞后, 无论在1小时或者6小时激活, 大部分的重构胚在2细胞期碎裂, 而去掉细胞膜的供体体细胞核注入卵母细胞后, 重构胚可以卵裂并进一步发育。卵母细胞去核后不注射供体也发生碎裂, 大部分的孤雌胚(不去核)在完整的卵丘细胞被注入后同样发生碎裂。在供体卵丘细胞刚破膜后即被注入卵胞质和供核被充分剥离后注入两种情况下获得的重构胚的体外发育中, 前者发育各期的比率显著低于后者。这些结果说明完整的卵丘细胞膜阻碍了卵胞质对体细胞核的重编程作用, 造成碎裂; 注入卵胞质的供体质膜和胞质成分影响了克隆胚的体外发育。     

心脏连接胶质细胞及其功能的发现

<正>神经胶质细胞在神经系统的发育、信号转导、突触传递以及代谢等多个方面都发挥重要作用^[1-4]。近期,美国诺特丹大学Cody J Smith研究团队^[5]应用时移共聚焦显微成像技术和命运谱系分析等多种研究方法在斑马鱼的心脏中发现了一种新型的神经胶质细胞,命名为连接胶质细胞（nexus glia）。这类胶质细胞可通过Meteorin蛋白介导的Jak/Stat3信号通路来调控自身的发育和分化,     

绒毛剥皮贴片原位培养法

我们自1973年首次报告吸取绒毛诊断早 孕胎儿性别后^[1,2],近年来国内外应用绒毛作产 前诊断有了很大进展^[3-14]。取绒毛方法方面：有 Hahnemann (1969, 1974）宫腔镜下钳取法^[4,5], 我们的吸管负压抽吸法,及Rhine (1975）宫腔 冲洗法^[10]。经实践证明,以抽吸法较好^[9,12,13] Old (1982）又在负压抽吸基础上加超声显相 胎盘定位,取材更为准确[9]。绒毛培养方法大 致有两种：一是将绒毛剪碎后原位培养;一是 经胰酶处理制成混悬液培养^[8],但效果都不理 想。本文报告在综合国内外绒毛培养经验的基 础上自行设计的一种新的接种方法,即：将绒 毛经胰酶处理后用玻片对合推压,使绒毛表层 不能再分裂增殖的合体细胞层与其下层分离, 暴露出能分裂增殖的朗罕氏细胞层,以利生长。     

Pd-1基因敲除小鼠构建及初步表型验证

目的:细胞程序性死亡蛋白(programmed death ligand-1,PD-1)是机体T细胞的免疫检查点,也是肿瘤治疗的重要靶点。采用CRISPR/Cas9技术,利用非同源重组修复引入突变的方式,使基因蛋白读码框移码造成PD-1功能缺失,建立Pd-1基因敲除小鼠模型,为深入探究Pd-1基因功能及作用机制提供基础。方法:针对Pd-1基因2-4号外显子设计并合成2对sgRNA片段,与编码Cas9片段共同体外转录,通过受精卵显微注射方法将两者mRNA混合注射到C57BL/6小鼠受精卵中,经PCR产物测序鉴定获得F0代小鼠,之后与野生型C57BL/6小鼠交配获得F1代杂合子小鼠,F1代小鼠自交即获得F2代纯合子小鼠品系(Pd-1^-/-)。刀豆蛋白(concanavalin A,ConA)刺激Pd-1^-/-小鼠后,通过实时荧光定量PCR和流式细胞技术在mRNA和蛋白水平上分别检测Pd-1^-/-小鼠中Pd-1基因在转录和翻译过程中的表达情况,并通过ELISA方法检测Pd-1^-/-小鼠血清中IL-6、IFN-γ、IL12/IL23及TNF-α等因子的表达水平,初步分析Pd-1通路在T细胞反应调控中的作用机制及对免疫刺激的响应情况。结果:PCR及测序结果表明在小鼠基因组中Pd-1基因2-4号外显子被成功敲除;Real-Time PCR实验和流式检测结果显示:与野生型小鼠相比,Pd-1^-/-小鼠脾、肠系膜淋巴结、胸腺和血液各组织中Pd-1表达水平均显著降低;双抗夹心ELISA测定结果显示:Pd-1敲除后经ConA刺激,血清中IL-6和IFN-γ表达上调。结论:成功构建Pd-1基因敲除小鼠模型。Pd-1缺失能够上调IL-6和IFN-γ对ConA刺激的响应,增加ConA引起的炎症反应,为Pd-1的体内基因功能研究提供了新的小鼠模型和研究思路。     

Tmem119基因敲入荧光示踪工具小鼠的构建及表型验证

[目的]通过将tdTomato基因片段插入到Tmem119基因终止密码子位置建立了Tmem119-tdTomato工具小鼠模型,并对该小鼠进行表型验证。[方法]制备Tmem119 sgRNA、Cas9 mRNA和donor vector,利用CRISPR/Cas9技术通过显微注射共同注射到C57BL/6小鼠受精卵中,通过交配及基因型鉴定获得F1代阳性小鼠;通过荧光检测验证小鼠Tmem119蛋白在大脑各区域的表达情况。[结果]基因型检测结果表明,tdTomato表达片段成功插入到Tmem119基因终止密码子前;免疫荧光检测结果表明,tdTomato蛋白荧光在小胶质细胞内与经典标记蛋白Iba1荧光重叠,与星形胶质细胞标记蛋白GFAP不重叠。[结论]成功构建特异性标记小胶质细胞的红色荧光示踪工具小鼠,为小胶质细胞的动态深入研究提供模式工具。     

人精子与金黄地鼠卵体外受精标准问题及某些操作经验

自Yanagimachi^[6]首创人精子穿入去透明带金黄地鼠卵以侧定人精子受精力的技术以来,该技术日益得到国内外有关实验室的重视与愈来愈广泛的应用。因为这是一种研究医学遗传学、生殖生物学、优生优育、药物致畸等学科与临床应用的有用工具。