60种食药两用中药抗菌防腐作用研究

本实验利用无菌24-孔板采用连续稀释法对60味食药两用中药进行了抗19种常见食品腐败菌的快速筛选,得到有明显抗菌作用的中药5种:丁香、花椒、高良姜、甘草、乌梅。其中:丁香、花椒、高良姜为香料,有较强的抗真菌作用;乌梅对所测细菌有较强抑制作用,将丁香、花椒、高良姜等等量组成复方进行抗菌实验,得出该复方的醇提物抗菌作用强于水提物,在浓度为1/80时对所有被测菌均有抑制作用。     

藤茶防腐抑菌作用的研究

以生活中常见的真菌(酵母菌、青霉菌、毛霉和黑曲霉)为实验菌种,采用水粗提法和酒精粗提法提取藤茶中的有效成分,探究藤茶对常见食品的防腐作用,以及用打孔法探究藤茶对酵母菌、青霉菌、毛霉和黑曲霉等微生物的抑制作用。实验结果表明:藤茶对酵母菌、青霉菌、毛霉和黑曲霉等具有一定的抑制作用;能延长食品腐败的时间。     

抗菌肽抑菌活性测定方法的研究

探讨建立一种在抗茵肽分离、纯化过程中简单、快速、灵敏的检测抑菌活性的方法。以微量稀释法为基础,利用氯化三苯四氮唑的显色原理设计了简单的显色MIC方法,且用该方法与K—B以及常规微量稀释法做了3种标准菌株的对比。与K—B法及常规微量稀释法相比,TTC微量稀释法可以准确地判断细菌生长抑制终点,得到确切的结果。TTC微量稀释法反应灵敏．操作简便,尤其适合在分离、纯化过程中跟踪检测抗菌肽的活性。     

醋酸钙复盐对微生物生长的影响

应用四醋酸钙对黑曲霉、黄曲霉、米曲霉、链格孢霉等霉菌和大肠杆菌、枯草杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌生长影响作了研究,并将四醋酸钙与醋酸钙、苯甲酸钠对上述微生物的生长抑制作用加以比较。0.4％四醋酸钙对上述细菌的生长有明显的抑制作用。对上述霉菌生长亦有一定的抑制作用。当其与苯甲酸钠协同使用时,能更明显地抑制微生物生长。实验结果表明四醋酸钙很可能是一种安全性高、成本低的新型食品防腐剂。     

一种快速检测分离溶藻细菌方法的初探

传统的细菌培养基对铜绿微囊藻具有毒性作用。会大大影响溶藻细菌的筛选效率和准确性。通过基本培养基各成分对铜绿微囊藻DS的作用研究发现,培养基中的葡萄糖成分对藻有抑制作用,并且这种抑制作用与培养基中的葡萄糖浓度密切相关,当培养基中葡萄糖的浓度在0．1～0．4g/L时,藻细胞生长受到抑制,当用柠檬酸三钠取代葡萄糖后,铜绿微囊藻在改良后的培养基中生长正常,与对照组相比无显著性差异(P＜0．05)。用改良的培养基富集水样中的溶藻微生物,并用此培养液直接感染宿主藻,一周内即可初步快速检测是否含有溶藻细菌。此种方法既排除了培养基的干扰因素,又迅速增加了溶藻细菌的生物量,并可大量收集细菌分泌的胞外物质,为溶藻细菌尤其以分泌物质溶藻的细菌的初步筛选提供了一条快捷、有效的途径。     

铜绿假单胞菌群体感应抑制物筛选系统的构建及其应用

针对调控铜绿假单胞菌致病基因表达的群体感应系统,将相关基因lasI和rhlA的启动子域与蔗糖致死基因相融合,构建出一个能通过菌体生长量来检测群体感应系统小分子抑制物的筛选体系。并在特定条件下,对一系列中药提取物进行筛选,同时用荧光筛选系统对结果进行验证。以此筛选出3种中药提取物对铜绿假单胞菌群体感应系统有不同程度的抑制作用。这3种中药分别隶属于爵床科、败酱科和萝藦科植物。本研究所构建的筛选体系能有效地筛选群体感应系统的抑制物,为进一步了解和控制细菌的致病感染过程和新药物的研究提供了一个有用的工具。     

链霉菌6803菌株对植物的化感作用

链霉菌属是绝大多数已知抗生素和一些重要活性物质的产生菌,它对高等植物是否具有化感作用尚缺乏研究. 从土壤中分离获得7个放线菌菌株,研究其对植物幼苗生长的抑制作用.结果表明： 链霉菌6803菌株在固体和液体发酵培养时均强烈抑制油菜根和稗草根的生长, 其液体发酵液的5倍稀释液对油菜和稗草苗生长的抑制分别达到60.7%和61.3%. 常规形态与生理生化试验表明,该菌株属于链霉菌属金色类群; 16S rRNA基因序列分析表明,该菌株为沙场链霉菌,基因序列相似性达到99.28%. 此菌株经过80～100 s紫外线照射筛选出的正突变菌株UV8024和UV100-2的10倍稀释发酵液对油菜幼苗生长的抑制作用比原始菌株分别提高了37.5%和38.1%, 经过1%硫酸二乙酯诱变50 min筛选出的正突变菌株D507的10倍稀释发酵液对油菜幼苗生长的抑制作用比原始菌株提高了29.8%. 链霉菌6803菌株对高等植物具有化感作用, 并可通过诱变育种提高其化感潜力.     

链霉菌6803菌株对植物的化感作用

链霉菌属是绝大多数已知抗生素和一些重要活性物质的产生菌,它对高等植物是否具有化感作用尚缺乏研究.从土壤中分离获得7个放线菌菌株,研究其对植物幼苗生长的抑制作用.结果表明:链霉菌6803菌株在固体和液体发酵培养时均强烈抑制油菜根和稗草根的生长,其液体发酵液的5倍稀释液对油菜和稗草苗生长的抑制分别达到60.7％和61.3％.常规形态与生理生化试验表明,该菌株属于链霉菌属金色类群;16S rRNA基因序列分析表明,该菌株为沙场链霉菌,基因序列相似性达到99.28％.此菌株经过80 ～ 100 s紫外线照射筛选出的正突变菌株UV8024和UV100-2的10倍稀释发酵液对油菜幼苗生长的抑制作用比原始菌株分别提高了37.5％和38.1％,经过1％硫酸二乙酯诱变50 min筛选出的正突变菌株D507的10倍稀释发酵液对油菜幼苗生长的抑制作用比原始菌株提高了29.8％.链霉菌6803菌株对高等植物具有化感作用,并可通过诱变育种提高其化感潜力.     

稀土甘氨酸配合物对微生物作用初探

本文用7种稀土甘氨酸配合物在实验室对微生物的作用进行了试验。通过杯碟法测定抑菌圈,用活菌平板计数法进行菌落计数,其结果是这7种稀土甘氨酸配合物对细菌均表现出抑制作用,对霉菌不起抑制作用。     

《中药大辞典》记载的抗真菌中药体外药效再评价

目的对《中药大辞典》中记载有抗真菌药理作用的127种中药醇提物进行体外抗深部感染真菌(白念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉)的研究。方法采用75%乙醇超声提取法对127种中药进行统一提取,参考CLSI微量液基稀释法M27-A3和M38-A2方案进行抗白念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉的最低抑菌浓度(MIC)测定,并进一步考察其抗菌谱及抑制菌丝作用。结果在2mg/mL浓度下,仅博落回等17种中药、月季花等34种中药、黄柏等5种中药分别对白念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉有抑制作用,其中博落回和粉萆薢的抗菌谱广;在4mg/mL浓度下,127种中药中仅粉萆薢和藜芦能完全抑制菌丝生长,最低浓度分别为200μg/mL和500μg/mL。结论首次用统一标准对《中药大辞典》中记载的抗真菌中药进行体外活性筛选,并对其药效进行再评价,为新型抗真菌药物开发提供理论依据和参考。     

一种快速检测分离溶藻细菌方法的初探

传统的细菌培养基对铜绿微囊藻具有毒性作用。会大大影响溶藻细菌的筛选效率和准确性。通过基本培养基各成分对铜绿微囊藻DS的作用研究发现,培养基中的葡萄糖成分对藻有抑制作用,并且这种抑制作用与培养基中的葡萄糖浓度密切相关,当培养基中葡萄糖的浓度在0．1～0．4g/L时,藻细胞生长受到抑制,当用柠檬酸三钠取代葡萄糖后,铜绿微囊藻在改良后的培养基中生长正常,与对照组相比无显著性差异(P＜0．05)。用改良的培养基富集水样中的溶藻微生物,并用此培养液直接感染宿主藻,一周内即可初步快速检测是否含有溶藻细菌。此种方法既排除了培养基的干扰因素,又迅速增加了溶藻细菌的生物量,并可大量收集细菌分泌的胞外物质,为溶藻细菌尤其以分泌物质溶藻的细菌的初步筛选提供了一条快捷、有效的途径。     

拮抗辣椒疫霉菌海洋细菌菌株SH-27的筛选鉴定及其防病促生作用

【背景】由辣椒疫霉引起的辣椒疫病是全球辣椒生产中一种毁灭性的病害。近年来生物防治因其具有对环境友好、对人畜安全的特性而倍受关注。【目的】筛选对辣椒具有防病促生作用的海洋细菌菌株SH-27并鉴定其分类地位。【方法】采用稀释分离法和平板对峙法筛选拮抗辣椒疫霉菌的海洋细菌菌株,以发酵液灌根法测定海洋细菌SH-27菌株对辣椒盆栽的防病促生作用;通过形态特征、生理生化测试及多基因序列分析对海洋细菌SH-27菌株进行鉴定。【结果】从分离的142株海洋细菌中筛选获得11株对辣椒疫霉菌具有较强抑制作用的细菌菌株,其中以来自珊瑚的SH-27菌株的抑菌作用最强、抑菌谱广;室内盆栽试验结果表明,SH-27菌株发酵液处理后的辣椒植株根长、株高、茎粗、鲜重、干重均显著高于对照处理。SH-27菌株发酵液灌根处理后,对辣椒疫病4、6和9 d的防效分别为70.81%、66.55%和48.20%。经形态特征、生理生化测试及16S rRNA、gyrA基因序列分析,鉴定SH-27菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。【结论】海洋细菌SH-27菌株对辣椒具有较好的防病促生效果,具有开发为微生物农药及菌肥的潜力。     

二氢杨梅素对几种食品常见菌的抑制效果

以酵母菌（saccharomyces cerevlsiae),桔青霉菌（penicillium citrinum）,牛奶酸败混合菌群为试验材料,研究了类黄酮物质二氢杨梅树皮素（DMY）对酵母菌,霉菌,细菌三种类型的微生物的抑制效果,结果表明：DMY对牛奶酸败菌和青霉菌具有明显的抑制作用,且抑菌效果优于常见的防腐剂苯甲酸,而对酵母菌的抑制效果不显著,因此,DMY可作为食品添加剂应用于乳制品及易染霉菌的食品的保藏。     

一株真菌拮抗细菌Z21的筛选与鉴定及其发酵条件优化

【背景】芽孢杆菌属的许多细菌具有抗逆性强、安全等特点,一直以来都是开发新型活性物质的研究热点。【目的】筛选对食品腐败真菌有抑制作用的细菌,将其开发为天然食品防腐剂。【方法】采用平板分离法、平板对峙法、抑制菌丝生长速率法从空气、竹子内生细菌中筛选真菌拮抗菌,通过形态、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析等方法对其进行鉴定,利用正交试验确定其最优生长条件。【结果】筛选到一株对6种常见霉菌均有较强抑制作用的细菌Z21。Z21与甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus strain CBMB205~T)的相似性最高,且形态特征和生理生化特征与CBMB205~T菌株基本相符。Z21最佳发酵培养基配方和培养条件分别为:葡萄糖20.0 g/L、NaNO_3 20.0 g/L、MgSO_4 3.0 g/L,培养温度为32°C,培养时间为48 h。【结论】Z21为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus),对黑曲霉、康氏木霉、绿色木霉、少根根霉、易脆毛霉、赭绿青霉的生长具有较强的抑制作用且抑菌效果稳定,为广谱真菌拮抗菌。     

黄荆叶提取液抑菌作用的研究

用黄荆叶的乙醇提取物对 6种细菌、2种酵母菌、3种霉菌三大类微生物进行抑菌实验 ,得出其最低抑菌浓度 (MIC)。由结果推断出黄荆叶提取物不失为一种良好的天然抗菌剂 ,可添加于食品和药物中     

Nisin高产菌株的高通量筛选

【目的】乳酸链球菌素(nisin)是一种天然生物活性抗菌肽,对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用,而用作食品的防腐剂。本研究通过建立高通量筛选方法,实现高效快速省力的高产菌株筛选,为工业上筛选高产菌株提供研究方案。【方法】通过对Lactococcus lactis ATCC11454菌株进行紫外诱变,获得2511株突变株。利用Biomek FXP自动工作站建立96微孔板的高通量筛选方法,突变株经高通量挑选、菌种培养及菌液稀释后,加入到生长至对数中期的藤黄微球菌中,采用改进后的比浊法快速检测nisin生物活性。用此方法对突变株进行初筛、复筛后可得到nisin高产菌株,并通过摇瓶发酵评估高通量筛选方法。【结果】确定比浊法检测的条件为:nisin活性稀释在10–25 IU/m L范围内,与藤黄微球菌反应2 h后检测藤黄微球菌的菌体量(OD600)。2511株突变株经过2轮高通量筛选,最终获得约50株产量提升的菌株,对其中8株进行摇瓶精确测量,显示产量均有提高,并且其中一株产量提升了30%,成功建立了高通量筛选nisin高产菌株的方法。【结论】利用比浊检测法,在其基础上成功建立高通量筛选高产nisin菌的方法,经过初筛复筛,整个周期由1人耗时5 d即可完成2511株突变株的筛选工作。相较于传统的选育方法,高通量筛选具有快速、稳定、高效的特点,提高了筛选效率,缩短了选育周期,是工业上筛选高产nisin菌的有效手段。     

基因芯片技术及其在补血中药研究中的应用

补血中药在我国中医药宝库中占有十分重要的地位,中药调控造血的分子机制与细胞因子网络直接相关。多维超高通量药物筛选体系的建立和从分子水平系统说明中药作用的药理学机制,使传统的中药理论与国际通用的医学理论模式接轨,是中药现代化、国际化的迫切要求。由于中药重整体、多靶点、多环节的作用方式,使得传统的研究技术难以完整地阐明其作用机制;而现今发展起来的高密度基因芯片技术,可以同时研究上千种基因的作用模式,进行平行基因分析,因此可以用来检测疾病状态下和中药作用后成千上万个基因的表达模式,并对其进行定性和定量分析,从而使从整体和分子水平上阐明中药作用机制成为可能。基因芯片这种高通量、快速、平行的基因信息处理和分析技术,是实现这一目标的绝佳实验手段。在药物领域对于药物靶标的发现、多靶位同步超高通量药物筛选、药物作用的分子机理、中医药基础理论现代化、药物活性及毒性评价等都有其他方法无可比拟的优越性。因此,建立以基因芯片技术为核心的多靶点、多层次、多水平的中药多维超高通量筛选体系具有极其重要的意义。     

酶标仪分光光度法在微生物耐性研究上的应用

微生物在环境中的耐性是该微生物在相应环境发挥作用的重要基础。为了获得一种用于微生物耐性分析的快速简便方法,传统平板分离法和酶标仪分光光度法被用于评估其在细菌和链霉菌紫外耐受水平检测中的差异,并分析了酶标仪分光光度法在微生物其他耐性水平检测中的适用性。结果显示,两种检测方法均能体现细菌和链霉菌对紫外线的耐受水平,前者经过稀释、涂布、培养、菌落计数,获得的是菌株在紫外线照射后的存活浓度,而后者经过接种96孔培养板、培养、吸光度检测,获得的是菌株经紫外线照射后的生长曲线,并从生长曲线获知菌株的生长速率、增殖能力等信息。此外,酶标仪分光光度法同样适用于细菌对pH和盐的耐受水平分析,对于链霉菌耐受性分析有一定的适用性。酶标仪法除了能获得与平板分离法相似的耐性水平检测外,还能获得菌株在不同耐性水平上的增殖潜力,且在操作上比平板分离法省时、省力,可用于微生物耐性分析、高通量筛选等研究工作。     

分离引起柑橘腐烂、霉变的微生物及生物防治

从自然腐烂的柑橘中提取腐败菌,并对其进行分离,研究引起柑橘腐烂、霉变的主要微生物。通过菌落颜色、表面特征和质地等菌体形态的观察,获得初步鉴定的结果:细菌2种(编号A1、A2),分别为葡糖杆菌属和不动杆菌属;霉菌2种(编号B1、B2),分别为青霉菌属和毛霉属;酵母菌1种(编号C),为酵母属的酿酒酵母。用地衣芽孢杆菌SH003试验菌株考察对上述腐败菌的抑制作用,结果表明:地衣芽孢杆菌SH003发酵液对细菌和霉菌具有很好的抑制作用,但是对酵母菌的抑制作用不明显。     

红提葡萄内生细菌的分离鉴定及灰霉病拮抗菌的筛选

旨在从新疆红提葡萄的不同部位中,分离筛选出对葡萄灰霉病具有较强拮抗作用的内生细菌。采用组织分离法对红提葡萄不同部位的内生细菌进行分离,同时进行16S r DNA序列测定及同源性分析,并采用平板对峙法和滤纸片法进行筛选,研究其对葡萄灰霉菌的抑制作用。结果表明,在分离得到的18株内生细菌中,有5株具有良好的拮抗效果,分别为NR4-1、NR5-1、NG4-1、NP1-1和PG1,抑菌率可达68.7%。