四种土壤微生物总DNA的纯化方法的比较

比较了4种从土壤中直接抽提的微生物总DNA的纯化方法,实验结果表明1 %的琼脂糖凝胶电泳纯化方法及葡聚糖凝胶G 2 0 0离心层析纯化方法均不能完全纯化从土壤中抽提的微生物总DNA。若将直接抽提的总DNA先经葡聚糖凝胶G 2 0 0离心层析纯化,再用1 %的琼脂糖凝胶电泳纯化,则能取得较好的纯化效果。含2 %PVP的1 %琼脂糖凝胶电泳纯化,用DNA凝胶回收试剂盒回收后没有得到纯化后的土壤微生物总DNA。     

琼脂糖凝胶电泳

Ⅰ琼脂糖凝胶 琼脂糖凝胶电泳是在卧式电泳装置上进行的,因为:(1)它为低浓度的琼脂糖凝胶提供了较好的支持体系,(2)在电泳过程中较少发生扭曲,(3)所得的DNA带比较直。最容易操作的凝胶体系,是将琼脂糖凝胶完全浸没在电泳缓冲液之下约1毫米     

琼脂糖凝胶电泳中DNA回收方法的比较

实验采用直接切取琼脂糖凝胶,进行Lambda DNA/EcoRI HindIII Marker的回收,将其与试剂盒回收进行比较,并对比切下的凝胶立即回收和在-20℃冰冻数小时回收的效果,结果表明实验采用的方法与试剂盒的比较产量相当,且重复性好,达到了分子生物学实验的要求.尤其实验方法在大片段的回收(21226bp)平均回收率是43.5956%与试剂盒的回收率:38.9761%相比有明显的优势,非常适合大多数实验室使用.     

一种简单快速回收DNA片段的方法——DE-81滤纸

琼脂糖凝胶电泳对于快速分离不同分子量的DNA片段是极为有效的,但把DNA片段从凝胶中回收回来有时要碰到一些困难,如回收的DNA易受凝胶中硫酸多糖的污染(该成分是许多酶的抑制剂,如内切酶、连接酶、激酶、聚合酶等);大片段DNA回收     

利用机油提高琼脂糖凝胶中DNA片段的回收率

目的:发展一种简单快速经济的回收琼脂糖凝胶中DNA的方法.方法:将切的琼脂糖凝胶胶块放入嵌套Eppendorf管中捣碎,加入50μL机油,室温下12 000r/min离心5min,取大Eppendorf管中收集的液体跑胶检验,凝皎上包括代表100bp～2000bp不同大小DNA分子回收率的分子量标准DL2000.结果:DNA回收率可由加机油前的约35%提高为加机油后的45%-90%,回收效率的波动主要取决于DNA片段的大小、切下的含有DNA的胶块的大小及操作者的熟练程度.结论:该方法快速、简便、经济,具有良好的重复性与特异性,比许多国产的试剂盒更可靠.     

琼脂糖电内渗对电泳的影响

用电内渗不同(0、0.03、0.08、0.20mr)的琼脂糖制成凝胶或电极缓冲液凝胶条,观察对电泳行为的影响.结果表明等电聚焦电泳必须使用无电内渗琼脂糖.不同电内渗的琼脂糖制成的电极缓冲液凝胶条对SDS电泳无显著影响,但对常规聚丙烯酰胺凝胶电泳有不同程度的影响,电内渗越高,越不利于电泳的进行.     

酶切法鉴定质粒的亚型

商品化质粒小量抽提试剂盒制备的质粒DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测可见2条亮带,分别回收2条亮带,使用限制性内切酶分别消化,再用琼脂糖凝胶电泳检测,依据质粒的亚型(超螺旋、线性、开环)在以琼脂糖凝胶为介质的电场中的移动速度不同,鉴定出制备的质粒DNA电泳图中的2条亮带分别是超螺旋质粒和开环质粒。     

电泳洗脱法纯化共价闭环质粒DNA

质粒DNA的分离纯化通常采用传统的氯 化艳-溪化乙锭密度梯度离心法⁴⁾,此法结果理 想,但耗钱多,费时长,不是目前我国一般实验 室所能常用的。而琼脂糖凝胶电泳不仅能将分 子量不同的DNA区分,还能区分共价闭环 (ccc) DNA和开环（(oc) DNA³⁾,并在此基础上 建立了从电泳后的琼脂糖凝胶中回收DNA的 方法。但在回收过程中容易造成cccDNA出现 缺刻(nick）而转变为ocDNA⁸⁾.     

一种从琼脂糖凝胶中同步回收DNA和琼脂糖的方法

介绍一种从琼脂糖凝胶同步回收DNA和琼脂糖的方法。利用0.25 mol/L异硫氰酸胍溶液(p H 8.0)溶解含有目的 DNA片段的的凝胶条,胶条溶解后,静置冰上10 min再加入预冷的异丙醇,琼脂糖呈颗粒状析出,通过离心即可初步分离DNA和琼脂糖。上清液用异丙醇沉淀回收DNA片段,利用50%PEG溶液沉淀琼脂糖。分别对0.2 kb、1 kb和10 kb长度的DNA片段进行回收,回收率分别为19.44%、36.40%、13.49%,回收的DNA纯度高,电泳条带清晰。琼脂糖均回收率为62.52%,回收琼脂糖脱水后的状态为白色颗粒。该方法切实可行,回收成本低廉,回收的DNA和琼脂糖可用于后续实验。     

碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中DNA的探讨

采用碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中的DNA,达到分离纯化目的,回收后的DNA可用于重组、PCR等研究。首先将含有目的DNA的琼脂糖凝胶用Nal溶液融解,然后加入cacl2,和NaHCO3,生成CaCO3,沉淀,DNA与cac03形成复合物,通过离心分离出沉淀复合物,利用稀酸溶解沉淀,再用无水乙醇沉降,即可回收目标DNA。利用该方法回收了质粒、毛白杨和转基因羊基因组DNA,同收率为20％～50％,0D260／OD280,为1．7～19,最大回收了21kb片段,最小回收250bp片段,回收后的DNA样品进行了PCR扩增和限制性内切酶反应,PCR可以扩增出目的片段,同时限制性内切酶可以将回收后的DNA切开,表明DNA质量良好。利用碳酸钙沉淀法可以回收琼脂糖凝胶中的DNA,此法简单、易行,较为有效。     

从凝胶中回收DNA

引言 琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺电泳技术目前得到了广泛的应用。它们按分子大小分离DNA分子,具有很高的分辨率。从混合物中分离单一种类DNA分子,凝胶电泳既可用于分析又可用作制备。用于制备时一个主要问题是如何从一含DNA的胶带中得到较高的DNA回收率而避免凝胶介质污染。本文拟对回收的方法学作一概述。     

琼脂糖凝胶的合适浓度对于回收酶切后质粒载体的重要性

目的：探讨琼脂糖凝胶的不同浓度对回收不同大小的酶切后质粒载体纯度的影响。方法：将2种质粒载体酶切,并经不同浓度的琼脂糖凝胶电泳分析,通过比较酶切前和酶切后载体的相对位置,研究胶浓度对回收酶切后载体纯度的影响。结果：不同浓度的琼脂糖凝胶中,酶切前和酶切后载体的相对位置会发生变化,对能否成功回收到纯度高的酶切后DNA片段有重要影响;质粒大小不同,胶浓度的影响也不同。结论：合适的胶浓度对于回收酶切后质粒载体具有重要意义,应选择合适的胶浓度回收酶切后质粒载体。     

家蚕浓核病毒中国株基因组DNA的分离纯化与鉴定

家蚕浓核病毒中国株的正链DNA和负链DNA分别包裹在不同的病毒粒子中,而且两条链的大小不同,经高盐浓度的DNA抽提缓冲液提取后,在琼脂糖凝胶电泳谱中呈现出大小不同的两条带,一条6．4kb,另一条5．8kb。作者分别用高盐和低盐抽提缓冲液提取了家蚕浓核病毒中国株的基因组DNA,意外发现用低盐抽提缓冲液抽提出来的基因组DNA在琼脂糖凝胶电泳谱中仅呈现一条带。推测可能是由于大小不同且不完全互补的正负链,在低盐缓冲液中形成有效的互补,因而呈现一条6．2kb的条带。     

一种用于PCR模板制备的电泳产物简易回收方法

为了探索一种简便、有效而且能从琼脂糖凝胶中大量回收用于第2次PCR扩增的DNA电泳条带的方法,采用刀片切胶法和牙签插胶法从琼脂糖中回收DNA,并进行了两种方法的比较．结果显示牙签插胶法回收的DNA用作第2次PCR的模板,获得了清晰、稳定的PCR产物电泳条带,用该法成功地制备了一批DNA微阵列探针．由此可见牙签插胶法是一种简便、快速、有效的用于PCR模板的DNA琼脂糖凝胶回收法．     

回收琼脂糖凝胶中DNA的简便方法

多年来国内分子生物学实验室所采用的几种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法不同程度地存在着各种问题。现介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA的简易方法,采用实验室常用的吸附柱中的吸附膜对DNA进行拦截、纯化和回收。实验证明这种方法回收DNA具有简便快捷、成本低和效率高等优点,是一种切实可行的方法。     

琼脂糖凝胶中DNA片段的挤压回收法

为了简化琼脂糖凝胶中DNA片段的回收,该文报道一种新的挤压回收法。将含有DNA片段的凝胶块放在折叠的封口膜之间,然后用一小塑料平板将凝胶块中的DNA溶液用力挤出,用移液枪把所有挤压出的DNA溶液放入effendorf管中,然后用常规的苯酚抽提法进行纯化。DNA回收率达到40-60%(w/w)。该方法简单而有效,且回收的DNA能够直接应用于酶切、连接及PCR等各种分子生物学操作。     

一种简便、高效、经济的从凝胶中回收DNA的方法

目的:尝试一种简便、高效的从凝胶中回收DNA的方法。方法:在Eppendorf管的管底用注射器扎孔,将一小团用Eppendorf管融化后拉成的细丝放入管中,把含有DNA的凝胶放在细丝上,离心,收集从管底流出的液体,经酚氯仿抽提后用乙醇沉淀DNA。结果:经过简单的离心即可近乎100%地回收凝胶中的DNA。结论:使用该方法从琼脂糖凝胶回收DNA,操作简单,回收率高,无其他试剂污染。     

一种无桥的水平板型凝胶电泳

凝胶电泳是研究核酸、蛋白质等生物大分子的一项重要技术,也是DNA的限制性核酸内切酶切割片段的分析、分离、纯化的一种不可缺少的方法。虽然垂直(管柱型及板型)凝胶电泳早已被广泛应用,但它不能用低浓度琼脂糖凝胶分离大分子DNA。水平板型凝胶     

一种从琼脂糖凝胶上回收DNA的高效、快捷、经济的方法

目前在国内分子生物学实验室所采用的多种从琼脂糖凝胶上回收DNA的方法普遍存在着各种问题。本文介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA简易装置。实验表明用这种装置回收DNA具有高效、快捷和经济的优点,非常适合在国内实验室普及推广。     

一种便捷可靠的从凝胶中回收DNA片段的方法

从琼脂糖凝胶中回收 DNA片段是重组 DNA实验中经常需要进行的操作。这里介绍一种用自制的微型电泳槽电泳回收 DNA片段的方法。取 4块各长 1cm,宽 0 .5cm,厚 2 mm的聚乙烯条板 ,用氯仿将它们粘合到一块长 2 cm,宽 1cm的聚乙烯板中央 ,制成一四周密闭的小槽。在相对的两块挡板内侧底边各置一条铂金丝 ,两端用蜡固定。两条铂金丝在相对的两角都向上延伸至顶部并翻出 ,用蜡固定在挡板外侧。这样就制成了一个微型电泳槽。铂金丝外露部分可用带导线的夹子与电泳仪相联 ,通电后可进行潜水电泳。DNA样品按常规的琼脂糖凝胶电泳分离后 ,用 EB染…