大鼠卵巢细胞分泌纤溶酶原激活因子抑制因子(PAI-1)的激素调节

哺乳动物卵巢合成两类纤溶酶原激活因子(PA),即组织型PA(tPA)和尿激酶型PA(uPA)。大鼠卵巢除主要合成tPA外,还分泌一种纤溶酶激活因子的抑制因子(PAI-1)。在促性腺激素作用下,卵巢tPA和PAI-1两种基因的协调表达是导致滤泡破裂的原因。本实验进一步证实,卵巢中的PAI-1主要由膜-间质细胞分泌,可能作为一种屏障限制颗粒细胞tPA分泌到滤泡外间质。当排卵来临时,两种细胞所分泌的tPA和PAI-1相互作用后仍发现有大量tPA活性。这可能是引起排卵的主要原因。因为成熟的卵丘细胞除分泌高量tPA外,还分泌大量PAI-1,在人工授精中两者有可能作为鉴定卵子优劣的可靠指标。     

芪地固肾方对膜性肾病大鼠肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin和Podocin表达的影响

摘要 目的：探讨芪地固肾方治疗膜性肾病（MN）大鼠的效果及其可能的机制。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为模型组（等剂量生理盐水尾静脉注射）、雷公藤多甙片组（10 mg/kg雷公藤多甙片）、芪地固肾方低剂量组（15.425 g/kg芪地固肾方）、芪地固肾方高剂量组（61.7 g/kg芪地固肾方）四组,另取10只未造模大鼠作为空白组（等剂量生理盐水尾静脉注射）,连续干预28天后,检测24小时尿蛋白定量（U-TP）、血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的变化;HE染色、透射电镜观察大鼠肾组织病理学改变;RT-PCR检测肾组织中nephrin蛋白、podocin mRNA的表达。结果：与空白组比较,模型组24 hU-TP、足细胞nephrin和podocin mRNA显著升高,血清TP和ALB显著降低（P<0.01）;与模型组比较,各给药组24 hU-TP降低,血清TP和ALB显著升高（P<0.05）;肾组织免疫复合物沉积减少,肾小球基底膜增厚减轻;足细胞nephrin和podocin mRNA表达升高（P<0.05）。结论：芪地固肾方能够降低MN模型大鼠的尿蛋白水平,减轻肾脏病理损伤,上调肾组织中足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和podocin mRNA的表达,延缓膜性肾病的进展。     

猕猴精浆纤溶酶原激活因子的来源及在精子获能中的作用

我们的前期工作表明,不育症人精液中纤溶酶原激活因子（plasminogen activator;PA）活性明显升高;给成年办和猕猴注射长效睾酮诱发无精过程中,精液PA含量也伴随上升,为进一步查明PA的来源和对精子的作用,原位杂交检测组织型PA（tPA）,尿激酶型PA（uPA）及PA抑制因子－1（PAI-1)泊mRNAs在成年健康猕附睾、前列腺和精囊中的表达。体外培养猕猴精子,培液中加入uPA、tPA及其底物纤溶酶原（plasminogen）,测试PA对精子活力、顶体反应及激活卵子的影响。结果表明,猕猴附睾、前列腺和精囊均表达tPA、uPA和PAI-1 mRNAs。加入uPA能维持精子的活力,使精子产生超激活运动,诱导顶体反应的发生,并使精子获得激活卵子的能力,这说明猕猴精浆PA除来源于睾丸外,可能主要来源于附睾及附性腺;在体外,uPA,而不是tPA,可能诱导精子获能。     

I型纤溶酶原激活物抑制物在紫癜肾炎肾组织中的表达

为研究I型纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)在紫癜肾炎病理机制中的作用.采用免疫组织化学和原位杂交方法检测了23例紫癜肾炎患者肾组织中的PAI-1.结果证实:在正常肾组织内和紫癜肾炎肾组织内均可检测到PAI-1表达,PAI-1mRNA原位杂交阳性信号主要分布于血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞内,紫癜肾炎肾小球内有紫兰色阳性信号,且强度与肾小球内细胞的增生程度有关.     

Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物在紫癜肾炎肾组织中的表达

为研究Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物（PAI-1）在紫癜肾炎病理机制中的作用。采用免疫组织化学和原位杂交方法检测了23例紫癜肾炎患肾组织中的PAI-1。结果证实,在正常肾组织内和紫癜肾炎肾组织蚋均可检测到PAI-1表达,PAI-1mRNA原位杂交阳性信号主要分布于血管平滑肌细胞和肾小管上皮细胞内,紫癜肾炎肾小球内有紫兰色阳性信号,且强度与肾小球内细胞的增生程度有关。     

uPA、PAI-1的表达和MVD计数与浸润性乳腺癌侵袭性的关系

目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）、纤溶酶原激活物抑制剂（PAI-1）的表达和血管形成与浸润性乳腺癌侵袭性的关系。方法：应用免疫组化SP法检测80例浸润性乳腺癌、20例良性乳腺肿瘤组织中uPA、PAI-1的表达情况并进行微血管计数。结果：uPA和PAI-1在浸润性乳腺癌组的阳性表达显著高于良性肿瘤组,且其高表达率与乳腺癌的临床病理参数密切相关（P〈0.05）;微血管计数在乳腺癌组和良性肿瘤组分别为30.87±7.64、20.28±8.72,两组比较有显著性差异（P〈0.01）。uPA与PAI-1在浸润性乳腺癌中的表达呈正相关（P〈0.05）。结论：uPA、PAI-1的高表达与浸润性乳腺癌的浸润、转移相关,uPA、PAI-1的高表达和MVD计数可作为评价浸润性乳腺癌侵袭性、评估预后和确定治疗方案的生物学指标。     

uPA、PAI-1 的表达和MVD 计数与浸润性乳腺癌侵袭性的关系

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的表达和血管形成与浸润性乳腺癌侵袭性的关系。方法:应用免疫组化SP法检测80例浸润性乳腺癌、20例良性乳腺肿瘤组织中uPA、PAI-1的表达情况并进行微血管计数。结果:uPA和PAI-1在浸润性乳腺癌组的阳性表达显著高于良性肿瘤组,且其高表达率与乳腺癌的临床病理参数密切相关(P<0.05);微血管计数在乳腺癌组和良性肿瘤组分别为30.87±7.64、20.28±8.72,两组比较有显著性差异(P<0.01)。uPA与PAI-1在浸润性乳腺癌中的表达呈正相关(P<0.05)。结论:uPA、PAI-1的高表达与浸润性乳腺癌的浸润、转移相关,uPA、PAI-1的高表达和MVD计数可作为评价浸润性乳腺癌侵袭性、评估预后和确定治疗方案的生物学指标。     

卵巢纤蛋白溶酶原激活因子及其抑制因子的研究

本文综述了近年来作者在研究卵巢纤蛋白溶酶原激活因子(PA)及其抑制因子(PAI)的某些成果。PA是一种高效能蛋白水解酶激活因子,它激活纤蛋白溶酶原成为纤蛋白溶酶,此酶在纤蛋白水解过程中起重要作用。已有证据表明,PA与排卵有关。我们进一步研究发现:(1)在大鼠卵巢体细胞中存在两种PA,即组织型PA(tPA)和尿激酶型PA(uPA);而在卵细胞中只发现tPA;(2)大鼠卵巢tPA明显受促性腺激素和其他激素调节,并在排卵前达到高峰,而uPA没有明显变化;(3)在卵巢体细胞中还发现一种PA的抑制因子(PAI),它与PA结合形成复合体,能部分或完全消除PA活性;(4)只有tPA与大鼠排卵有关;PA和PAI间的相互作用和随激素的波动而引起的动态变化可能对维持卵巢正常生理功能和排卵起重要作用。     

三七皂苷Rg1对tPA和PAI-1活性的调节作用

探讨三七皂苷Rg1对组织型纤溶酶原激活物(tPA)和纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)活性的调节作用。运用发色底物方法测定三七皂苷Rg1在体外和静脉注射对家兔血浆纤溶酶原激活物(tPA)和血浆或血小板释放的纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)水平的影响。结果表明,三七皂苷Rg1在体外呈浓度依赖性明显抑制血浆PAI-1活性,同时提高血浆tPA活性;30和60 mg/kg的三七皂苷Rg1静脉注射显著抑制血浆PAI-1活性,提高血浆tPA活性,同时降低凝血酶激活的血小板所释放的PAI-1水平。本实验提示三七皂苷Rg1能抑制PAI-1活性,同时升高tPA活性可能是其抗血栓作用的分子机制之一。     

血管内皮细胞介导的纤溶作用

血管内皮细胞可合成和释放tPA、uPA和PAI-1,也提供纤溶成份之间相互作用的活性表面,在纤溶的启动和调节中起重要作用。内皮细胞介导的纤溶作用受到神经激素,生长因子、血浆成份、血细胞、血管壁基质和许多外源性物质的调控。     

柴胡皂苷A抑制链脲佐菌素联合高脂高糖饮食诱导的糖尿病大鼠肾氧化应激和自噬损伤

目的 探讨柴胡皂苷A(saikosaponin A,SSA)对糖尿病大鼠肾保护效应及机制。方法 采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素诱导法构建糖尿病大鼠模型,SSA灌胃进行干预。用尿液化学分析仪测量尿液中微量白蛋白和肌酐的水平,HE和Masson染色法观察肾脏的组织学改变情况,试剂盒法检测肾组织中氧化应激指标MDA、NO和GSH的水平及SOD活性,电镜观察肾小球基底膜以及足细胞形态,免疫荧光染色观察肾小球中足细胞自噬相关蛋白p62和LC3 II分布,Western blot法分析肾组织中p62和LC3 II/LC3 I水平。结果 糖尿病大鼠尿液中微量白蛋白和肌酐水平增加,肾小球硬化,肾小管扩张,肾小球基底膜增厚,部分肾小球、肾小管及间质发生纤维化;肾组织中MDA和NO水平升高,GSH水平和SOD活性下降;足细胞足突变形并不同程度融合,p62阳性足细胞增多,LC3 II阳性足细胞减少;肾组织中p62蛋白表达升高,LC3II/LC3 I比值下降。SSA干预可显著减轻上述变化。结论 柴胡皂苷A可减轻糖尿病肾损伤,该作用可能与其降低氧化应激和抑制自噬损伤有关。     

纤溶酶原激活因子与猕猴精子运动力的关系及其在附睾和附性腺中的表达调节

用11酸睾酮诱导猕猴少精子症和弱精子症及单侧隐睾手术诱导单侧少精子症和弱精子症模型,观察对附睾头、附睾体、附睾尾、前列腺和精囊组织型PA（tPA）、尿激酶型PA（uPA）及抑制因子-1（PAI-1）mRNA表达的影响。原位杂交的结果表明11酸睾酮诱导少精子症和弱精子症,tPA mRNA的表达在附睾头、精囊及前列腺减少,而在附睾体升高,附睾尾表达基本无变化;uPA mRNA的表达在附睾头、附睾体、前列腺减少,而在精囊升高,附睾尾表达基本无变化;PAI-1 mRNA的表达在附睾头、附睾体、精囊下降,而在前列腺升高,附睾尾表达无显著变化。单侧隐睾手术不影响tPA、uPA和PAI-1 mRNA的表达。这些结果提示附睾头和附睾体分泌的uPA可能与精子前向运动能力的获得相关。tPA、uPA和PAI-1 mRNA在猕猴附睾头部和体部、前列腺和精囊中的表达可能受睾酮的调节,但不受睾丸分泌因子及温度的影响,且在不同部位睾酮的调节具不同的特征,而附睾尾tPA、uPA和PAI-1的表达则可能是组成性表达。     

人子宫内膜纤蛋白溶酶元激活因子及其抑制因子的分布与调控

人子宫内膜中存在组织型(tPA)及尿激酶型(uPA)两类纤蛋白溶酶元激活因子,其含量在增殖期高于分泌期。本文应用免疫组织化学定位证实uPA及tPA两类抗原存在于子宫内膜的腺体细胞和间质细胞中。应用SDS-PAGE分高蛋白质,继而应用纤蛋白-琼脂糖铺盖技术测得离体培养下间质细胞仅释放tPA,腺体细胞仅释放uPA,但两种细胞均分泌PA的抑制因子(PAI)。培液中加入孕酮,明显抑制PA和刺激PAI生成。雌二醇作用与孕酮相反。某些肽类激素hCG、PRL、GnRH及cAMP作用基本与雌二醇相同。但福司克林(FK)则刺激间质、腺体两种细胞产生tPA及少量uPA,抑制PAI生成。本工作表明人子宫内膜中存在PA及PAI作用相反的酶,受激素调控,其生理意义尚待进一步探讨。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂在大肠癌细胞中的表达及其意义

目的:探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在各种大肠癌细胞的表达及其意义。方法:采用Real time PCR检测大肠癌细胞HT29,HCT116,SW1116,SW480等细胞系中uPA的mRNA表达,Western blot检测uPA的蛋白表达水平并进行比较分析。结果:在转录水平,SW480细胞中uPA mRNA表达最高,其次是HT29细胞,另外两种细胞表达相对低。uPA的蛋白表达的情况表明,SW480细胞中uPA的表达较其他组明显高(p0.05),而SW1116细胞中几乎未见uPA的蛋白表达。结论:SW480细胞中uPA的表达较其他细胞系高,这可能与肿瘤细胞转移能力强弱有关。     

姜黄素衍生物B06对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

目的:观察姜黄素衍生物B06对2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法:雄性SD大鼠35只,随机均分成5组(n=7):正常对照组、高脂组、高脂治疗组、糖尿病组、糖尿病治疗组。采用高脂饮食结合链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型。治疗组给予0.2 mg/kg·d剂量的B06灌胃,维持8周。检测血肌酐、尿素氮、尿酸,光镜和电镜观察大鼠肾组织的形态学改变,Masson染色观察肾组织的胶原纤维,并用免疫组化方法检测肾脏IV型胶原、纤维连接蛋白的表达。结果:糖尿病组大鼠血肌酐、尿素氮水平升高;光镜下见肾小球系膜基质增多,胶原纤维增多,肾小球毛细血管基底膜增厚;电镜下足细胞足突肿胀及足突融合;Masson染色示肾小球亮绿色阳性基质增多;免疫组化显示IV型胶原、纤维连接蛋白的表达水平升高。经B06干预后,血肌酐、尿素氮下降;肾小球病变减轻,肾脏组织IV型胶原、纤维连接蛋白的表达水平降低。结论:B06对2型糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能是通过降低肾脏IV型胶原、纤维连接蛋白的表达,从而抑制细胞外基质的积聚和肾小球系膜增殖,发挥抗肾纤维化的作用。     

阿魏酸对糖尿病大鼠肾脏足细胞nephrin、podocin蛋白表达的影响

目的：研究阿魏酸（FA）对链脲佐菌素（STZ）致糖尿病大鼠肾脏足细胞损伤的影响,并探讨其可能的机制。方法：雄性SD大鼠尾静脉一次性注射STZ （40 mg/kg,i.v.）,72 h后将血糖高于16.7 mmol/L者视为糖尿病造模成功,将其随机分为模型组、阿魏酸组,每组10只;另取10只雄性SD大鼠作为对照组;阿魏酸组（100 mg/kg,i.g.,qd）,从大鼠血糖升高第5周开始给药,连续8周。测定空腹血糖、体重、肾脏脏器系数、血清尿素氮、肌酐含量;HE染色观察肾组织病理变化;免疫组化测定肾组织nephrin、podocin蛋白表达。结果：与对照组比较,模型组肾脏脏器系数增大,肾功能下降;病理学显示肾脏细胞萎缩,排列不整齐,并伴有间质增生;足细胞nephrin、podocin蛋白表达明显减少,阿魏酸组明显改善上述指标。结论：阿魏酸具有改善STZ致糖尿病大鼠肾脏功能的作用,其机制可能与上调肾脏足细胞nephrin、podocin蛋白表达有关。     

黄芪对左肾静脉狭窄大鼠肾组织TGF-β1和PAI-1表达的影响

目的观察黄芪对左肾静脉狭窄大鼠肾组织胶原含量及促纤维化因子表达的影响,为临床药物治疗左肾静脉受压综合征提供实验依据。方法将大鼠分为3组,假手术组、模型组和黄芪治疗组。采用左肾静脉不全结扎的方法建立大鼠左肾静脉狭窄模型,用黄芪进行干预,于治疗6周后处死动物。取肾组织行羟脯氨酸含量测定,检测TGF-β1和PAI-1mRNA及蛋白的表达水平。结果模型组大鼠左肾组织羟脯氨酸含量较假手术组增多,TGF-β1和PAI-1的表达增加。黄芪治疗可较少羟脯氨酸含量,减少TGF-β1和PAI-1表达。结论左肾静脉狭窄大鼠可出现肾组织纤维化,黄芪可通过减少TGF-β1和PAI-1的表达来减轻肾组织纤维化损伤。     

抗坏血酸对糖尿病肾脏足细胞的作用及机制探讨

目的：研究抗坏血酸对糖尿病大鼠肾小球滤过屏障最外层足细胞的作用,并探讨其可能的作用机制。方法：采用腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,经抗坏血酸治疗5周后,测定血糖（BG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、24 h尿白蛋白排泄率（UAER）、肾皮质超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和丙二醛（MDA）水平,并观察足细胞超微结构,检测足细胞损伤标志-desmin蛋白的表达。结果：与正常对照组大鼠比较,糖尿病组大鼠血BG、HbA1c显著增高,肾皮质SOD、CAT活性显著降低,MDA含量、肾小球内desmin蛋白表达明显增加,足细胞足突融合显著,UAER显著升高（均P〈0.05）;与糖尿病组大鼠比较,在血BG、HbA1c无明显差异条件下（均P〉0.05）,抗坏血酸可明显增加糖尿病大鼠肾皮质SOD活性,降低肾皮质MDA含量和desmin蛋白表达水平,并显著减轻足细胞足突融合,减少UAER（均P〈0.05）,肾皮质CAT活性虽有一定程度增高但差异无显著性（P〉0.05）。结论：糖尿病大鼠肾小球滤过屏障最外层足细胞有明显损害,补充抗坏血酸对足细胞起保护作用,其机制可能与增强肾脏抗氧化能力,减轻肾脏氧化应激有关。     

马兜铃酸对斑马鱼胚胎肾毒性作用

选用肾发育完成(受精后3天)的斑马鱼(Danio rerio)胚胎,用马兜铃酸进行染毒处理,观察胚胎的表型变化及死亡情况,分析马兜铃酸对胚胎的毒性作用及规律;利用肾荧光观察及肾组织切片,观察马兜铃酸处理后胚胎肾形态和肾组织结构的改变情况;利用qPCR检测马兜铃酸处理前后nephrin的表达变化,初步探讨足细胞在马兜铃酸毒性作用中的功能状态。20μmol/L马兜铃酸处理24 h后,胚胎出现明显眼周水肿表现;在马兜铃酸高浓度组(40~80μmol/L),除眼周水肿外,胚胎血循环系统功能出现异常,表现为心率降低、血流缓慢甚至停滞;荧光显微镜下观察发现,马兜铃酸处理组胚胎肾出现肾小球囊性膨胀、前肾管囊性扩张和形态异常;切片显示马兜铃酸处理组胚胎肾组织结构受到损害,表现为肾小球结构疏松、囊性扩张,前肾管上皮细胞细胞排列松散、紊乱及管腔扩张样改变;qPCR结果,马兜铃酸处理组斑马鱼胚胎nephrin的表达水平比对照组显著降低(P0.01)。研究表明,马兜铃酸能损害斑马鱼胚胎肾结构和功能,其毒性作用与肾小球足细胞的功能改变有关。     

尿激酶型纤溶酶原激活物的表达与毛囊细胞增殖关系的研究

为了研究毛囊外根鞘(outer root sheath,ORS)细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasmino-gen activator,uPA)的表达与其细胞周期的关系,并探讨uPA对毛囊生长的调控作用,本文应用流式细胞仪对不同代龄的ORS细胞的细胞周期进行了 检测,并用免疫细胞化学和RT-PCR手段对相应代龄ORS细胞的uPA mRNA及蛋白质的表达进行了检测。结果显示,原代ORS细胞增殖旺盛,而3代ORS细胞增殖水平显著下降,增殖旺盛的ORS细胞uPA mRNA及蛋白表达较强,而增殖缓慢的ORS细胞uPA mRNA及蛋白的表达明显下降或不表达。说明ORS细胞的增殖水平与其uPA mRNA及蛋白的表达密切相关,uPA在毛囊生长早期的表达可以促进毛囊细胞增殖,利于毛囊发育。