实验动物中沙门菌的实验室检测能力验证的结果与分析

目的通过实验动物中沙门菌检测能力验证计划,了解实验动物检测机构对沙门菌的检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过冷冻干燥法制备含有沙门菌及干扰菌的实验动物粪便样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,经冷链运输发放给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果全国共有20个省市的30个实验室参加沙门菌能力验证项目,其中28个实验室获满意结果,占总参加机构的93.3%,不满意的2个实验室,占6.7%。采用分离培养方法的有29个实验室,采用PCR方法的有2个实验室。结论实验动物质量检测机构沙门菌检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。     

实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过样品制备,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有10个实验室参加本次能力验证项目,其中满意结果的实验室8个,占总参加机构的80%,不满意的实验室有2个,占20%。结论实验动物质量检测机构在实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1的检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。     

实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体的实验室检测能力验证结果评价

目的通过实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,血清经过标定后,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果共有17个省市的27个实验动物检测机构报名参加本次能力验证项目。27个检测机构均提交了满意结果,占总参加机构的100%。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法的有26个检测机构,采用免疫荧光实验(IFA)方法的有1个检测机构。结论实验动物质量检测机构实验小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型抗体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。     

兔出血症病毒抗体的实验室检测能力验证结果评价

目的通过兔出血症病毒抗体检测能力验证计划,了解实验动物检测机构检验能力,提高实验动物质量检测水平。方法按照CNAS批准的能力验证方案,通过筛选血清制备样品,经过稳定性和均匀性检验合格,作为能力验证样品。采用随机编号,发样给参加单位,并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果一致的判为满意结果,不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果来自14个省市自治区的20个实验室报名参加本次比对实验,均在规定时间内反馈了检测结果,17个实验室检测结果为合格或优秀,占参加比对实验室的85%。在20个实验室中,14个实验室采用了酶联免疫吸附实验(ELISA)方法,6个实验室采用血凝抑制实验(HAI)方法。结论全国各实验动物检测机构兔出血症病毒抗体总体检测能力较高,实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。     

实验小鼠肾匀浆中酯酶-3的实验室测定能力验证结果评价

目的通过实验小鼠肾匀浆中酯酶-3项目的检测比对,了解全国实验动物质量检测实验室的水平,促进各实验室加强质控。方法按照CNAS批准的能力验证方案,制备样品并将稳定性和均匀性合格的样品作为能力验证样品,进行随机编号,随作业指导书一起发放给参加单位。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件,其结果与样品预检结果完全一致的判为优秀结果;除杂合型判定以外的结果均一致的判定为满意结果,否则判为不满意结果。结果共10个实验室报名参加本次比对试验,其中优秀结果 0个实验室;满意结果的有9个实验室,占参加比对实验室的90.0%;不满意结果 1个实验室,占参加比对实验室的10.0%。结论本次能力验证项目反映了各参与实验室在实验小鼠肾匀浆中酯酶-3的总体检测能力较高,但检测细节及部分实验室技术水平还有待提高。     

化妆品中耐热大肠菌群和金黄色葡萄球菌检测能力验证分析

为增强实验室竞争力,考察实验室检测水平,本实验室参加了ACAS-pT743(2019)化妆品耐热大肠菌群及金黄色葡萄球菌的检测能力验证.本次能力验证中实验室共接收了四个样品,按照《化妆品安全技术规范》2015版对样品展开检测,并采用关键生理生化指标对可疑菌落加以确定以及16 S rDNA序列测定方法对结果进行复确认.结...     

化妆品中金黄色葡萄球菌检验能力验证方法及分析

文章依据《化妆品安全技术规范》2015年版和《NIFDC-PT-188化妆品金黄色葡萄球菌检验能力验证作业指导书》，分别对编号为TC1880001和TC18801010的两份样品中的金黄色葡萄球菌进行定性检测，并结合使用BAX?system Q7系统对增菌液进行初步筛查，同时使用VITEK 2COMPACT全自动细菌鉴定系统对分离出的菌株加以鉴定，试图通过外部能力验证，提高对化妆品中金黄色葡萄球菌的检验能力。最终结果表明编号为TC1880001和TC18801010的两个样品中金黄色葡萄球菌检验结果均为阴性。笔者对此次能力验证结果较为满意，并表示检测化妆品中金黄色葡萄球菌时具备常规法和实时荧光PCR法两种能力，能满足日常对化妆品金黄色葡萄球菌的检测监管需求。     

参加CAP真菌检验室间质评结果分析

目的能力比对检验(Proficiency testing,PT)是室间质评的重要方案,通过参加美国病理家学会(College of American Pathologist,CAP)能力比对检验,监控实验室检验能力,确保检测结果的准确性、可重复性和可比性,促进实验室质量改进。方法中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科实验室于2009年参加CAP真菌检测能力验证活动。实验室收到标本后,按照常规真菌标本进行真菌学检查和免疫学测定,在规定的时间内将检测结果回报给CAP。CAP在同方法组内对检测结果进行评估,并提供所有参与实验室的结果统计报告。结果截至目前完成2009年3次共17份标本,回报结果正确率:F-A和F-C为100%,F-B为80%,结果评价均为满意。结论通过参加CAP能力比对检验,实现对检验结果准确性的持续性监测,提高真菌感染实验室诊断水平。     

食品中金黄色葡萄球菌平板计数不确定度的评定

在金黄色葡萄球菌检测过程中,由于样品中金黄色葡萄球菌计数受到样品制备、溶液稀释、向培养基添加样液、培养时间和操作人员技能等因素的影响,使检测结果离散度较大。实验主要研究采用在同一时间段内,应用同一批次的培养基和试剂,按相同的检测过程,对同一批样品进行检测。根据检测过程和检测结果对不确定度的贡献,探讨金黄色葡萄球菌计数的不确定度评定。     

PCR技术检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因

目的:金黄色葡萄球菌B型肠毒素是污染食品引起食物中毒的主要原因之一,针对进出口食品卫生监测的需要,研究一种简便、快速、准确的实验方法.方法:利用聚合酶链反应技术(PCR)采用特异的模板探针引物进行杂交,最后通过电泳技术与阳性对照进行比对,来判断阴阳性结果.结果:本方法检出率高,每克样品中有4个金黄色葡萄球菌即可检出,24小时即可报告结果.结论:PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素B基因快速、准确,检测周期短,既可提高检出率,又可节省检测时间.     

一种能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的培乔基

[目的]设计制备一种能够同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的复合增菌肉汤.[方法]挑选合适的添加剂进行单因素实验,确定增菌肉汤的成分及配比,采用平板计数法及三重荧光PCR技术验证肉汤的增菌效果.[结果]结果得到一种能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的选择性增菌肉汤(SSL),经验证SSL可使得3种目标菌以相对一致的速度进行富集,经过37℃ 150 r/min振荡培养24 h后,菌体浓度到达10~7～10~8 CFU/mL,非目标菌生长受到抑制.应用荧光PCR扩增样品,可同时得到3种目标菌的扩增曲线.在710份实际样品检测中,无假阳性及假阴性报告.[结论]研究结果表明,SSL肉汤可用于沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的共增菌,可用于多重PCR检测的前增菌.     

PCR技术在检测鼠金黄色葡萄球菌中的应用研究

目的　建立实验大小鼠金黄色葡萄球菌的快速检测方法———PCR法。方法　根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果　金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA扩增片段 ,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段 ,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性。将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释 ,测定此PCR体系的敏感性 ,结果显示 ,该PCR体系能检出 3pg金黄色葡萄球菌DNA ,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需 4h。结论　本研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法 ,具有快速、可靠、敏感和特异的特点 ,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测 ,适合应用于实验大小鼠的监测。     

实验动物金黄色葡萄球菌LAMP检测方法的建立

目的建立一种能够应用于实验动物金黄色葡萄球菌检测及鉴定的环介导等温扩增（loop-mediatedisothermal amplification,LAMP）方法。方法本研究针对金黄色葡萄球菌特异的nuc基因设计4条引物,对反应条件进行优化。结果通过优化,该方法 60℃、40 min、Mg2＋浓度8 mmol/L、dNTP浓度2.0 mmol/L、甜菜碱浓度0.8mmol/L时,对金黄色葡萄球菌检测限为2 cfu,且与其它常见实验动物致病菌无交叉反应。反应结果可通过添加荧光染料SYBR green I直接肉眼观察。结论本研究建立的金黄色葡萄球菌LAMP方法具有快速、灵敏、操作简单、设备要求低的特点,适用于基层、大批量样本、快速检测的要求。     

金黄色葡萄球菌的检测方法优化及其在舟山市水产品加工厂中的污染状况调查

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起食物中毒的重要致病菌。为简化金黄色葡萄球菌复杂的检测方法,并了解舟山市水产品中该致病菌的污染状况,通过比较已公开的3套针对耐热核酸酶编码基因的PCR鉴定体系,根据特异性和灵敏性实验筛选了1套最优的针对金黄色葡萄球菌的PCR鉴定体系。基于这一体系和国家规定的标准方法,对舟山市水产品加工厂各个环节采集的120份样品中金黄色葡萄球菌的污染状况进行了调查。结果显示,120份样品中金黄色葡萄球菌的检出率为8.3%,PCR检测方法与国标法检出阳性率比较无显著差异,而且集中在原料和环境这两个环节检出金黄色葡萄球菌,在半成品和成品中却未检测到。由此,可以认为舟山市水产品加工厂的原料和环境中存在着一定的安全隐患,而成品相对较为安全。     

犬肾细胞MDCK无血清贴壁及单细胞悬浮培养

旨在挖掘用于鉴定金黄色葡萄球菌的高特异性靶点及其PCR检测引物。采用C++语言编程,以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus MRSA 252基因组编码序列为对象,对2 656个可编码区进行分析,获得特异性靶点序列,并设计PCR扩增引物。对包括葡萄球菌属11个种及其他细菌属在内的共计137株细菌验证引物特异性,筛选获得9个DNA序列,并设计了4对引物。经验证2对引物的特异性较好,其中引物SA3的基因组DNA检测限为13.7 fg/μL,菌体检测限为9.25×102 CFU/mL。结果验证     

金黄色葡萄球菌反向线性杂交探针检测方法的建立

目的建立一种检测金黄色葡萄球菌的简单、快速、灵敏、准确的方法。方法根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶nuc基因,设计一对通用引物及两条特异性探针,用生物素标记通用引物的5＇端,将两条特异性探针固定于硝酸纤维膜上,使PCR产物与探针杂交。结果建立的反向线性杂交探针方法,其检测限为2 ng/μL,检测特异性和准确性均为100%。结论建立的反向线性杂交检测方法具有较高的敏感性和特异性,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的快速检测。     

欧盟转基因生物安全检测技术现状及启示

为了了解欧盟转基因生物安全检测技术发展现状,提高我国转基因安全监管水平。本研究根据对欧盟8家转基因检测相关机构现状的调查和分析结果,阐述了转基因检测过程中的关键技术要点及欧盟的实施情况,具体包括抽样与制样方法,转基因检测方法的循环验证与参数要求,样品的检测策略与实验室环境要求,以及检测结果的表述与不确定度评估。并结合我国转基因生物安全检测发展现状,提出了开展检测方法的实验室联合验证和加强转基因定量PCR检测技术的研发和应用的建议。     

欧盟转基因生物安全检测技术现状及启示北大核心CSCD

为了了解欧盟转基因生物安全检测技术发展现状,提高我国转基因安全监管水平。本研究根据对欧盟8家转基因检测相关机构现状的调查和分析结果,阐述了转基因检测过程中的关键技术要点及欧盟的实施情况,具体包括抽样与制样方法,转基因检测方法的循环验证与参数要求,样品的检测策略与实验室环境要求,以及检测结果的表述与不确定度评估。并结合我国转基因生物安全检测发展现状,提出了开展检测方法的实验室联合验证和加强转基因定量PCR检测技术的研发和应用的建议。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其肠毒素的检测和耐药性分析

目的评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及其肠毒素(SE),并进行耐药性分析.方法收集130株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),用反向间接血凝试验(RPHA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素.结果67株MR-SA产肠毒素,19株MSSA产肠毒素,MRSA产肠毒素率为100%,MSSA产肠毒素率为30%.结论实验室应重视金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.     

一种能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单增李斯特菌的培养基

摘要：【目的】设计制备一种能够同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的复合增菌肉汤。【方法】挑选合适的添加剂进行单因素实验,确定增菌肉汤的成分及配比,采用平板计数法及三重荧光PCR技术验证肉汤的增菌效果。【结果】结果得到一种能同时富集沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及单增李斯特菌的选择性增菌肉汤（SSL）,经验证SSL可使得3种目标菌以相对一致的速度进行富集,经过37℃ 150r/min 振荡培养24h后,菌体浓度到达107~108CFU/mL,非目标菌生长受到抑制。应用荧光PCR扩增样品,可同时得到3种