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1.
目的:观察槟榔碱对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度(0、10、30、50、100、300、500μmol/L)槟榔碱对MCF-7细胞增殖的影响,Hoechst 33342染色和流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测Bax,Bcl-2和P53蛋白表达。结果:低浓度(0、10、30、50μmol/L)槟榔碱不影响细胞的增殖和凋亡;而高浓度(100、300、500 μmol/L)槟榔碱呈浓度依赖性抑制MCF-7细胞增殖、诱导MCF-7细胞凋亡、提高P53和Bax蛋白表达、降低Bcl-2蛋白表达。结论:高浓度槟榔碱抑制MCF-7细胞增殖、诱导凋亡,其机制可能与提高P53和Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达有关。 相似文献
2.
目的:研究氧化应激对原代培养乳鼠心房肌细胞凋亡、内质网应激及凋亡因子的影响。方法:实验分2组:对照组、氧化应激组。原代培养乳鼠心房肌细胞,氧化应激组在培养的原代心房肌细胞中加入终浓度为100μmol/L的H2O2培养2 h,检测氧化和抗氧化指标超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)含量;检测细胞凋亡、细胞GRP78、GRP94及chop、bax、bcl-2 mRNA表达。结果:与对照组相比较,氧化应激组心房肌细胞SOD活力和GSH含量下降、MDA含量增加(P < 0.01),细胞凋亡增加(P < 0.01),细胞GRP78、GRP94、chop、bax mRNA表达增加、bcl-2 mRNA表达减少(P < 0.01)。结论:氧化应激反应可能介导内质网应激反应并激活促凋亡因子表达,抑制抗凋亡因子表达,引起心房肌细胞凋亡增加。这可能与心房纤颤的发生有一定关联性。 相似文献
3.
目的:观察槟榔碱对3T3-L1脂肪细胞脂代谢的影响并探讨其可能机制。方法:采用经典的"鸡尾酒"法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化成熟,随后用不同浓度的槟榔碱(0、25、50、100 μmol/L)处理成熟脂肪细胞72 h。72 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的活性;油红O染色观察胞浆内脂滴情况;Western blot检测脂肪酸合成酶(FAS)、甘油三酯脂肪酶(ATGL)、激素敏感性脂肪酶(HSL)蛋白表达。结果:诱导分化成熟的脂肪细胞胞浆内可见大量脂滴;MTT显示:0~100 μmol/L槟榔碱对脂肪细胞活力无显著影响;油红O染色后脂质含量测定结果表明槟榔碱能减少成熟脂肪细胞中脂质含量;Western blot结果显示:与0 μmol/L组(对照组)相比,槟榔碱可显著降低脂肪细胞内FAS的蛋白表达,增加ATGL和HSL的蛋白表达;其中以50 μmol/L组最为显著。结论:槟榔碱使脂肪细胞脂解增强,可能与降低脂质合成关键酶FAS的表达,增加脂质分解代谢关键酶ATGL和HSL的表达有关。 相似文献
4.
目的:探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)下调氧自由基水平在大鼠成肌细胞氧化应激中的保护作用。方法:采用对数生长期大鼠成肌细胞,随机分为四组(n=6):正常对照组(control),单纯bFGF组(bFGF),氧化应激组(H2O2),干预组(bFGF+H2O2)。氧化应激组采用含100μmol/L H2O2的培养基继续孵育4 h。免疫组化检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)阳性沉积颗粒;免疫荧光观察活性氧自由基(ROS)水平、Bcl-2、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)及细胞色素C(Cyt.C)表达;Western blot检测Cyt.C、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,氧化应激组成肌细胞Bcl-2表达降低,ROS、Cyt.C表达显著增加(P < 0.05)。与氧化应激组比较,bFGF干预后的成肌细胞Bcl-2表达增加,ROS及Cyt.C表达减少(P < 0.05)。结论:bFGF对成肌细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与bFGF下调氧自由基水平、Bcl-2蛋白增加、Cyt.C表达减少有关。 相似文献
5.
目的:观察丝裂原活化的蛋白激酶(MAPKs)抑制剂对大鼠肝细胞谷胱甘肽(GSH)代谢的影响,确定哪条途径与GSH代谢相关。方法:体外培养BRL大鼠肝细胞,以c-Jun NH2-末端激酶(JNK)途径抑制剂SP600125、p38途径抑制剂SB203580、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径抑制剂PD98659处理24 h,采用MTT法测定细胞活力,高效液相色谱法测定细胞内GSH含量,Luminex法测定JNK和磷酸化JNK (p-JNK)的蛋白表达,采用试剂盒测定GSH代谢酶活性。结果:SP600125浓度>5 μmol/L,SB203580浓度>20 μmol/L,PD98659浓度>40 μmol/L时,细胞活力受抑制;SP600125能显著减少大鼠肝细胞内还原型GSH的含量,SB203580和PD98659作用不明显;SP600125显著减少磷酸化JNK (p-JNK)蛋白表达,显著增强谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力。结论:JNK MAPK途径参与了大鼠肝细胞GSH的代谢。 相似文献
6.
目的:研究缺血/再灌注(I/R)时豚鼠离体左心室流出道自律组织电活动的改变及其药物干预效应。方法:采用标准玻璃微电极细胞内电位记录技术,记录豚鼠离体左心室流出道标本的自发慢反应电位,观测模拟I/R时该电位的改变,以及临床上常用的抗心律失常药物灌流标本时对I/R电生理效应的干预作用。观测指标:4相自动除极速度(VDD)、自发放电频率(RPF)、最大舒张电位(MDP)、0相最大除极速度(Vmax)、动作电位幅度(APA)、复极50%和90%时间(APD50和APD90)。结果:①与对照组相比,I 10 min组VDD和RPF明显减慢(P<0.05),Vmax加快(P<0.01),APA增大(P<0.01)。与I 10 min组和对照组相比,R 2 min组VDD和RPF明显加快(P<0.01),且在R至5 min过程中可出现明显节律不齐,MDP绝对值明显增大(P<0.05),Vmax与对照组相比明显加快(P<0.05),APA与I 10 min组相比明显下降(P<0.05),但仍显著高于对照组(P<0.05),APD50和APD90显著缩短(P<0.01)。R 15 min组自发慢反应电位各项指标逐渐恢复至对照组水平。②与I 10min/R 2 min组相比,1 μmol/L利多卡因、10 μmol/L普罗帕酮、1 μmol/L胺碘酮、1 μmol/L维拉帕米、50 μmol/L腺苷和10 μmol/L硝普钠均可明显改善R过程中VDD和RPF的改变以及由此引起的节律不齐。结论:I/R可触发左心室流出道自律组织电活动异常,这种效应在应用不同的抗心律失常药物灌流时可显著恢复。 相似文献
7.
细胞外三磷酸腺苷(extracellular adenosine-5'-triphosphate)是植物细胞的重要信号分子。以烟草悬浮细胞BY-2(Nicotiana tabacum L.cv.Bright Yellow-2)为材料,探讨了胞外三磷酸腺苷对铅胁迫下细胞损伤、H2O2(过氧化氢)含量及H2O2清除酶活性的影响。结果显示,随着Pb(NO3)2浓度的不断提高(30~400 μmol·L-1),细胞外三磷酸腺苷含量呈现出逐渐下降的趋势,但胞内三磷酸腺苷含量及细胞的受损伤程度逐渐增大;同时,H2O2含量和过氧化氢酶的活性均有所上升,并在200 μmol·L-1 Pb(NO3)2处理下达到最大值,而过氧化物酶的活性则不断降低。较之Pb(NO3)2胁迫下的细胞,对Pb(NO3)2胁迫的细胞加入外源三磷酸腺苷使得细胞受损伤程度显著降低,H2O2含量减少,过氧化氢酶活性减弱,而过氧化物酶活性增强。实验结果表明,Pb(NO3)2胁迫诱导的植物细胞损伤和H2O2及其清除酶水平的变化能受到细胞外三磷酸腺苷水平的调节。 相似文献
8.
目的:探讨不同氧浓度下小鼠骨骼肌卫星细胞系(C2C12细胞)对H2O2刺激反应的变化及其机制。方法:小鼠骨骼肌卫星细胞系(C2C12细胞),经培养复苏后,将细胞分为7组,每组设8个复孔,各组分别加入浓度为0.1 mmol/L、0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、0.75 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L的H2O2,分别作用1 h、2 h后测细胞活力,选择细胞H2O2刺激的最佳作用时间和浓度;C2C12细胞分为不同氧浓度组:21% O2、12% O2、8% O2、5% O2每组设8个复孔,12 h后,H2O2作用1 h,收集细胞;检测细胞Nrf2蛋白荧光和蛋白表达量,测定Nrf2和抗氧化酶SOD1、SOD2、CAT、NQO-1、HO-1、GPX-1 的mRNA表达量及细胞ROS水平。结果:选择H2O2作用时间相对较短的1 h和浓度0.5 mmol/L作为本实验的H2O2刺激条件。与21%O2组相比,12%O2组细胞Nrf2蛋白荧光增强,Nrf2 的mRNA和蛋白表达以及抗氧化酶SOD1、SOD2、CAT、NQO-1、HO-1、GPX-1的 mRNA表达均显著增加(P<0.05或P<0.01),细胞 ROS水平明显降低(P<0.01);8%O2组仅GPX-1 mRNA显著增加(P<0.05),其他指标变化不大;5%O2组细胞 Nrf2 mRNA和蛋白表达以及抗氧化酶SOD1、SOD2、NQO-1、GPX-1的 mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞 ROS水平则明显升高(P<0.01)。结论:不同氧浓度下C2C12细胞中Nrf2介导的抗氧化系统对H2O2刺激反应不同,12 h的12% O2浓度可促进C2C12细胞Nrf2的抗氧化作用,而5% O2浓度的严重低氧则作用相反。 相似文献
9.
目的 探讨厄贝沙坦对链脲佐菌素(STZ)和过氧化氢(H2O2)诱导的β细胞损伤影响。方法 (1)将NIT-1细胞分为对照组及1、2、5 mmol/L STZ和300、500μmol/L H2O2组,处理30 min后,采用Hoechst 33342法检测各组细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-qPCR检测Caspase3 mRNA水平。(2)将NIT-1细胞分为STZ及0.001、0.01、0.1 mmol/L厄贝沙坦组,作用24、48和72 h。(3)将NIT-1细胞分为H2O2及0.001、0.01、0.1 mmol/L厄贝沙坦组,作用24、48和72 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(ROS)含量,RT-qPCR检测血管紧张素II型1受体(AT1R)mRNA表达。结果 Hoechst 33342染色显示,5 mmol/L STZ组相较于1、2 mmol/L STZ组,500μmol/L H2O2<... 相似文献
10.
目的探讨微小RNA-142-3p(miR-142-3p)对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。
方法构建氧化应激损伤模型,以H9C2心肌细胞为研究对象,实验将心肌细胞转染后分为正常对照组、H2O2组、H2O2+miR-142-3p组、H2O2+miR阴性对照组、H2O2+?si-?ELAVL1组、H2O2+siRNA对照组、H2O2+miR-142-3p+pcDNA-ELAVL1组、H2O2+miR-?142-3p+pcDNA组。分别采用qRT-PCR与Western Blot检测细胞中miR-142-3p与ELAVL1表达;检测各组活性氧(ROS)生成水平;MTT检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡。双荧光素酶报告实验验证miR-142-3p与ELAVL1的靶向作用。Western Blot检测细胞中Cleaved Caspase-3、STAT3、Caspase-3、p-STAT3蛋白表达。两组间比较采用两样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。
结果H2O2组心肌细胞中miR-142-?3p(0.26±0.06)、p-STAT3表达水平(0.36±0.04)、细胞存活率(61.73±6.48)﹪与正常对照组相比下降(P均< 0.01),而ROS水平(1?566.38±121.57)、细胞凋亡率(27.46±1.73)﹪、Cleaved Caspase-3(0.68±0.08)及ELAVL1表达水平(4.23±0.31)均升高(P均< 0.01);双荧光素酶报告实验证实ELAVL1是miR-142-3p的靶基因;miR-142-3p过表达或沉默ELAVL1表达可明显促进心肌细胞存活、上调p-STAT3表达,而抑制细胞凋亡及Cleaved Caspase-3表达;ELAVL1过表达可逆转miR-142-3p对过氧化氢处理H9C2细胞的保护作用。
结论miR-142-?3p可通过抑制ELAVL1表达进而减轻过氧化氢诱导的心肌细胞损伤,其可能通过影响STAT3信号通路而保护心肌细胞。 相似文献
11.
Oxidant-sensitive protein phosphorylation in endothelial cells 总被引:1,自引:0,他引:1
Aaron Barchowsky Mary E. Williams Christopher C. Benz Kenneth P. Chepenik 《Free radical biology & medicine》1994,16(6):771-777
Reactive oxygen is an important regulator of vascular cell biology; however, the mechanisms involved in transducing signals from oxidants in endothelial cells are poorly defined. Because protein phosphorylation is a major mechanism for signal ransduction, cultured aortic endothelial cells were exposed to nonlethal concentrations of H2O2 to examine oxidant-sensitive changes in phosphorylation state. Addition of H2O2 increases the phosphorylation of the heat shock protein 27 (HSP27) within 2 min. This response is maximal by 20 min and remains constant for more than 45 min. Levels of intrcellular free Ca2+ in endothelial cells did not change following addition of 100 μM H2O2, nor did the ability of the cells to respond to bradykinin. H2O2-induced phosphorylations were either not affected or were slightly increased in cells pretreated with PKC inhibitors (H-8, staurosporin, or calphostin c). Two-dimensional analysis of phosphoproteins from homogenates of 32P-labeled cells revealed that phorbol myristate acetate (PMA) did not cause the same degree of HSP27 phosphorylation as H2O2. Simultaneous addition of 10 ηM PMA and 50 μM H2O2 decreased the oxidant-stimulated phoshorylation of the most acidic HSP27 isoform. These data suggest that signal transduction for H2O2-sensitive endothelial cell responses are not only independent of PKC, but may also be suppressed by the action of the kinase. 相似文献
12.
目的 探讨低浓度过氧化氢(H2O2)对创面愈合的促进作用及其可能的作用机制.方法 建立大鼠全层皮肤缺损创面模型,将大鼠分为对照组(使用生理盐水)、高、低浓度H2O2组(分别使用3%、0.01%H2O2干预).选取第0、3、6、9、12、15、18天共7个时间点评估创面愈合率,并在第3、6、9天对创面组织样本进行组织病理... 相似文献
13.
Characterization of H2O2-induced acute apoptosis in cultured neural stem/progenitor cells 总被引:2,自引:0,他引:2
In the present study, we characterized hydrogen peroxide (H2O2)-induced cell apoptosis and related cell signaling pathways in cultured embryonic neural stem/progenitor cells (NS/PCs). Our data indicated that H2O2 induced acute cell apoptosis in NS/PC in concentration- and time-dependent manners and selectively, it transiently increased PI3K-Akt and Mek-Erk1/2 in a dose-dependent manner. Inhibition of PI3K-Akt with wortmannin, a PI3-K inhibitor, was found to significantly increase H2O2-induced acute apoptosis and dramatically decrease basal pGSK3β levels. The level of pGSK3β remained unchanged with H2O2 exposure. We conclude that the transient activation of PI3K-Akt signaling delays the H2O2-induced acute apoptosis in cultured NS/PCs in part through maintaining the basal pGSK3β level and activating other downstream effectors. 相似文献
14.
Coyle CH Martinez LJ Coleman MC Spitz DR Weintraub NL Kader KN 《Free radical biology & medicine》2006,40(12):2206-2213
Hydrogen peroxide, produced by inflammatory and vascular cells, induces oxidative stress that may contribute to endothelial dysfunction. In smooth muscle cells, H2O2 induces production of O2− by activating NADPH oxidase. However, the mechanisms whereby H2O2 induces oxidative stress in endothelial cells are poorly understood. We examined the effects of H2O2 on O2− levels on porcine aortic endothelial cells (PAEC). Treatment with 60 μmol/L H2O2 markedly increased intracellular O2− levels (determined by conversion of dihydroethidium to hydroxyethidium) and produced cytotoxicity (determined by propidium iodide staining) in PAEC. Overexpression of human manganese superoxide dismutase in PAEC reduced O2− levels and attenuated cytotoxicity resulting from treatment with H2O2. L-NAME, an inhibitor of nitric oxide synthase (NOS), and apocynin, an inhibitor of NADPH oxidase, reduced O2− levels in PAEC treated with H2O2, suggesting that both NOS and NADPH oxidase contribute to H2O2-induced O2− in PAEC. Inhibition of NADPH oxidase using apocynin and NOS rescue with L-sepiapterin together reduced O2− levels in PAEC treated with H2O2 to control levels. This suggests interaction-distinct NOS and NADPH oxidase pathways to superoxide. We conclude that H2O2 produces oxidative stress in endothelial cells by increasing intracellular O2− levels through NOS and NADPH oxidase. These findings suggest a complex interaction between H2O2 and oxidant-generating enzymes that may contribute to endothelial dysfunction. 相似文献