结核分枝杆菌抗原重组酿酒酵母免疫诱导小鼠特异性免疫应答

近年来基于重组酿酒酵母全细胞的新型疫苗研究报道不断出现。以结核杆菌重要保护抗原ESAT6和Ag85B为对象,采用pHR酿酒酵母表达系统,构建了两种分别表达ESAT6-Ag85B(EA)和IFN-γ-ESAT6-Ag85B(IEA)融合抗原的重组酿酒酵母Yeast-EA和Yeast-IEA。重组酵母以皮下注射方式免疫小鼠后,小鼠产生高水平Ag85B特异性抗体,淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子,无IL-4产生,发生Th1型细胞免疫应答,其中Yeast-IEA效应更强,优于传统的BCG疫苗。实验证实重组酵母能够刺激树突状细胞的成熟分化。研究结果显示结核分枝杆菌抗原重组酿酒酵母全细胞疫苗具有发展成为新型抗结核疫苗的潜力。     

鸟分枝杆菌PPE25蛋白对THP-1巨噬细胞免疫效应的影响

[目的]探讨鸟分枝杆菌PPE25在调控人源THP-1巨噬细胞免疫应答反应中的作用及机制.[方法]通过基因扩增、载体构建、诱导表达、分离纯化等过程制备鸟分枝杆菌重组PPE25蛋白;将重组PPE25蛋白作用于THP-1巨噬细胞后,利用流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率;运用ELISA方法检测细胞上清中TNF-α的浓度;采取Wes...     

白细胞介素1诱导激素对免疫应答的调节

在免疫应答中,由巨噬细胞产生的白细胞介素1(IL-1),不仅是介导免疫应答的一种重要因子,同时也是诱导激素对免疫应答进行反馈调节的一种重要媒介。胰岛素对免疫应答有促进作用,糖皮质激素对免疫应答有抑制作用;IL-1在低浓度时促进胰岛素分泌,在高浓度时则抑制胰岛素分泌,并诱导糖皮质激素产生。因此,不同浓度的IL-1可分别诱导激素对免疫应答的正负反馈调节,这种双向调节作用是维持免疫应答动态平衡的重要机制之一。     

常规接种卡介苗(BCG)引起免疫应答的非特异效应

<正>BCG是世界范围内最常接种的疫苗之一,它除了对结核病(TB)有预防作用外,研究表明,接种BCG还具有许多额外、有益的非特异性免疫效应,包括在高死亡地区降低由非TB引起的婴儿和儿童的整体死亡率。接种BCG引起的抗体应答,为研究BCG影响非相关抗原引起的免疫应答提供了机会。本研究比较了常规接种对已接种BCG和没有接种BCG的婴儿的抗体应答水平的影响。已接种BCG的婴儿来自于出生后就接种BCG的相关研究组,没接种BCG的婴儿来自于接种门诊。所有婴儿依澳     

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白诱导小鼠免疫应答的观察

用鹦鹉热衣原体 (Chlamydiapsittaci,Cps)重组主要外膜蛋白 (RecombinantMajorOuter Membraneprotein ,r MOMP)免疫小鼠 ,观察小鼠免疫后对r MOMP和Cps菌体蛋白的免疫应答。r MOMP皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,对照组仅注射佐剂。免疫前和第 3次免疫后 10d收集血清 ,以常规ELISA法检测抗体效价 ;MTT方法检测脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的特异性增殖反应。免疫组小鼠在免疫 38d后免疫血清中抗r MOMP的抗体效价可达 1∶2× 10 4,抗Cps菌体蛋白的抗体效价为 1∶4× 10 3 ;脾淋巴细胞对r MOMP和Cps菌体蛋白的增殖指数明显高于佐剂对照组 (p <0 .0 1,具有显著性意义。r MOMP在小鼠体内可诱导Cps特异性的体液免疫和细胞免疫应答 ,说明具有较好的免疫原性     

佐剂CpG-ODN与重组HBsAg疫苗联合免疫乙型肝炎病毒转基因小鼠的免疫应答研究

目的 以CpG-ODN为佐剂与重组HBsAg(rHBsAg)疫苗合用,研究其对乙型肝炎病毒转基因(HBV Tg)小鼠模型的免疫应答效果.方法 40只HBV Tg小鼠随机分为4组,每组小鼠分别注射rHBsAg疫苗(单用rHBsAg组)、rHBsAg疫苗+CpG-ODN(试验组)、rIFNα-2b(IFN组)、生理盐水(对照组).经多次免疫HBV转基因小鼠,于免疫前、后不同时间采血,动态观察各组小鼠血清中HBsAg量、抗-HBs阳性率和HBV DNA的变化,检测肝组织中HBsAg的表达.检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群和白细胞介素2(IL-2)、IL-12(p70)以及γ干扰素(IFN-γ)的含量,分别检测免疫小鼠的脾细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤功能并计算各组小鼠肝组织活性指数(HAI).结果 rHBsAg组和rHBsAg+CpG组在免疫小鼠后2周100%诱导抗-HBs;rHBsAg+CpG组能显著降低血清中的HBsAg量或使HBsAg转阴,rHBsAg+CpG组肝组织中HBsAg的表达量与血清中一样降低,并降低血清中HBV DNA的拷贝数.rHBsAg组的CD3+、CD4+、CD8+细胞在T细胞中所占百分比,IL-2、IL-12(p70)和IFN-γ的含量以及淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应均明显高于对照组(P＜0.05).rHBsAg+CpG组与rHBsAg组比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞应答(P＜0.05),且以Th1型细胞免疫应答为主.在rHBsAg+CpG组肝组织中出现大量淋巴细胞,肝脏的HAI在4个组中最高.结论 CpG-ODN作为佐剂可以增强重组HBsAg疫苗诱导HBV转基因小鼠产生抗病毒免疫应答,重组HBsAg疫苗辅以CpG ODN可作为免疫治疗慢性HBV感染的可行性途经.     

两株不含c-di-GMP代谢相关基因的重组卡介苗菌株引起的免疫应答对不同毒力的结核菌株的抵抗作用

菌膜是一种生物膜,作为一种类似于结核分枝杆菌感染过程中出现的某些特征的结构,如抗生素耐药性和感染的长期性,以及作为感染豚鼠的体液反应抗原的来源,在结核病领域重新引起了人们的兴趣。有充分的证据表明,在其他细菌中,第二信使c-di-GMP调节从浮游细胞到生物膜形成的转变。在这项工作中,作者使用牛分枝杆菌活疫苗BCG来确定与c-di-GMP代谢相关的基因缺失是否会影响与巨噬细胞的相互作用,在小鼠细胞系和小鼠中诱导免疫应答的能力,以及在表面膜的生长过程中如何改变蛋白谱。     

DNA疫苗初免-BCG加强免疫法提高小鼠抗结核分枝杆菌感染效率的研究

对结核分枝杆菌DNA四价疫苗(编码Ag85B,MPT64,MPT70和TB10.4抗原)初发免疫、卡介苗(BCG)加强免疫后小鼠产生免疫应答的能力和抗结核杆菌感染效率进行了分析.攻毒后细菌计数结果显示,DNA初免、BCG加强组肺脏和脾脏载菌数的对数值比阴性对照组下降1.0～1.3(P<0.01),且显著低于DNA四价苗和BCG组(P<0.05).3次免疫后,BCG加强组外周血中CD4 和CD8 T淋巴细胞显著增多(P<0.05);经4种抗原分别刺激,BCG加强组脾细胞产生的抗原特异性IFN-γ和IL-2水平显著高于其他免疫组,其中Ag85B抗原诱导产生的IFN-γ浓度为1250ng/L,IL-2浓度为230ng/L,分别是DNA四价苗组的1.6,1.7倍(P<0.05),是BCG组PPD诱导产生相应细胞因子浓度的2.6倍和2.2倍(P<0.05);此外,BCG加强组肺脏中分泌穿孔素的淋巴细胞数量也显著增加(P<0.05).结果表明,DNA初发免疫、BCG加强免疫法能显著提高小鼠CD4 ,CD8 T细胞介导的免疫应答,增强小鼠抗结核杆菌感染能力,是提高结核病疫苗免疫效果的新途径.     

结核分枝杆菌Rv2626c诱导的细胞免疫应答特性

全球有近1/4的人感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)并长期处于潜伏感染状态。Rv2626c是结核分枝杆菌受DosR调控的重要潜伏感染相关蛋白。本研究对Rv2626c蛋白进行了原核表达和纯化,并以RAW264.7细胞和小鼠为感染模型,对其免疫生物学特性进行了分析。SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明,Rv2626c-His融合蛋白主要以可溶形式表达,能与兔抗H37Rv多抗血清发生特异性免疫反应。此外,本研究发现Rv2626c蛋白能结合到巨噬细胞RAW 264.7表面并上调细胞NO的生成;显著诱导促炎细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-6和MCP-1的产生;并能诱导小鼠产生更强的Th1免疫应答。上述研究有利于揭示结核分枝杆菌的致病机制,为新型结核病疫苗的研制奠定了理论基础。     

戊型肝炎病毒重组颗粒性蛋白疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答研究

HEV 239是福建省医学分子病毒学研究中心实验室研制的一种戊型肝炎病毒（HEV）重组颗粒性蛋白疫苗,该文旨在研究HEV239蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况.将5μg HEV 239蛋白疫苗（239-Pro）、加铝佐剂疫苗（239-Vac）或加弗氏佐剂疫苗（239-CFA）肌肉注射免疫BALB/c鼠3次,第8周检测鼠血清抗HEV抗体及其亚类,同时用ELISPOT方法检测细胞毒性T细胞（CTL）应答.结果显示：239-Vac诱导的抗体滴度与239-CFA相当,高于无佐剂的239-Pro.239-Vac诱导的抗体中,IgG1/IgG2a比值显著高于239-CFA和239-Pro,主要为Th2型应答.除239-CFA之外,239-Vac和239-Pro也可诱导出一定的HEV抗原特异性I型Tc应答.提示：重组抗原HEV 239能诱导良好的抗体应答及一定的Tc1应答.     

紫外灭活CVB3 病毒诱导BALB/c小鼠产生免疫保护作用的研究

目的:探讨紫外灭活型CVB3病毒诱导BALB/c小鼠产生特异性免疫应答及保护作用的评估。方法:采用紫外灭活的方法处理野生型CVB3m株,按照0.1 LD50(10~4 PFU)的剂量免疫小鼠,设置PBS免疫组作为对照,免疫后第3,5,7天收集小鼠血清,检测细胞因子含量;在第3,5,7,14天分离小鼠脾脏,流式分析T细胞亚群的分布比例;在免疫后一个月分离小鼠血清,检测中和抗体的滴度;同时间给予小鼠100LD 50野生型CVB3感染,观察小鼠的死亡率。结果:与对照组相比,在检测日期内紫外灭活型CVB3组小鼠血清中细胞因子IL-1α,TNF-α,IL-6的表达量明显增高(P0.05),IL-4的表达量没有明显差异;免疫后第14天CD3~+CD4~+T细胞的分布较对照组明显升高(P0.05);在免疫后一个月,紫外灭活型CVB3免疫组可以诱导机体产生高滴度中和抗体,同时,小鼠应对高致死量CVB3感染时有较高的存活率。结论:紫外灭活型CVB3感染能诱导机体产生特异性免疫应答,同时,产生的中和抗体可以提高小鼠应对致死剂量CVB3感染时的生存率,对机体有明显的保护作用。     

腹腔注射重组腺病毒诱导的免疫反应

为研究重组腺病毒接种实验动物后的免疫反应性,利用RT-PCR方法,从HAV的RNA中克隆了结构蛋白基因插入穿梭质粒pXCX2Not I,通过磷酸钙-DNA共沉淀技术,将复制缺陷型腺病毒载体与线形化的pXCX2 CMV-HAV共转染293细胞.一系列检测方法证明产生了重组腺病毒rAdHAV.纯化后的rAdHAV滴度为1×109TCID50/mL,腹腔注射免疫昆明种小白鼠后,可诱导产生抗HAV IgG和HAV中和抗体.复制缺陷型腺病毒可作为发展基因工程病毒疫苗载体的有效系统.     

腹腔注射重组腺病毒诱导的免疫反应

为研究重组腺病毒接种实验动物后的免疫反应性,利用ＲＴ－Ｐ　Ｃ　Ｒ方法,从ＨＡＶ的ＲＮＡ中克隆了结构蛋白基因插入穿梭质粒ｐＸＣＸ２Ｎｏｔ　Ｉ,通过磷酸钙－ＤＮＡ共　沉淀技术,将复制缺陷型腺病毒载体与线形化的ｐＸＣＸ２－ＣＭＶ－ＨＡＶ共转染２９３细胞。一系列检测方法证明产生了重组腺病毒ｒＡｄＨＡＶ。纯化后的ｒＡｄＨＡＶ滴度为１×１０９ＴＣＩＤ５０／ｍＬ　,腹腔注射免疫昆明种小白鼠后,可诱导产生抗ＨＡＶ　ＩｇＧ和ＨＡＶ中和抗体。复制缺陷型腺病毒　可作为发展基因工程病毒疫苗载体的有效系统。     

表达轮状病毒G2和G3型vp7基因重组腺病毒的免疫效果

为探索以非复制型腺病毒为表达载体的多价轮状病毒(Rotavirus,RV)基因工程疫苗的可行性,在前期工作的基础上,对表达我国G2和G3型RV流行毒株vp7基因的重组腺病毒的免疫效果进行了研究。分别用表达G2和G3型vp7基因的重组腺病毒rvAdG2VP7、rvAdG3VP7经滴鼻和灌胃两种途径免疫Balb/c小鼠,对免疫后小鼠的血清抗体、黏膜抗体和相关的细胞因子水平进行了检测和比较。结果表明,用表达G2和G3型vp7基因的重组腺病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠后,均可诱导机体产生较强的RV特异性免疫反应,包括体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫,并能产生中和抗体。但免疫反应以Th2类为主,Th1类反应也占有相当的比例。本研究为新型RV基因工程疫苗的深入研究奠定了基础。     

表达轮状病毒G2和G3型vp7基因重组腺病毒的免疫效果

为探索以非复制型腺病毒为表达载体的多价轮病毒(Rotavirus,RV)基因工程疫苗的可行性,在前期工作的基础上,对表达我国G2和G3型毒株νp7基因的重组腺病毒的免疫效果进行了研究.分别用表达G2和G3型的νp7基因的重组腺病毒rvAdG2vp7、rvAdG3VP7经滴鼻和灌胃两种途径免疫Balb/c小鼠,对免疫后小鼠的血清抗体、黏膜抗体和相关的细胞因子水平进行了检测和比较。结果表明,用表达G2和G3型νp7基因的管理费用腺病毒经滴鼻和灌胃两种途径免疫小鼠后,可诱导机体产生较强的RV特异性免疫反应,名手体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫,并能产生中的抗体.但免疫反应以Th1类反应也占有相当的比例.本研究为新型RV基因工程疫苗的深入研究奠定了基础.     

多次注射乌拉坦诱导的BALB/C及C57BL/6J小鼠肺癌模型的比较

目的探讨一种稳定的多次乌拉坦注射诱导小鼠肺癌模型的构建方法,比较BALB/C及C57BL/6J小鼠对该肺癌模型的敏感性。方法 10只BALB/C小鼠及10只C57BL/6J小鼠适应性饲养3周,随后每只小鼠分别被给予每周1次腹腔注射1 g/kg体重乌拉坦,连续注射10周,继续喂养15周后处死小鼠取肺组织。由3名不同的检测者在解剖显微镜下观察计数肺组织表面肿瘤数目并以直径记录肿瘤大小;HE染色检测肺组织病理变化。结果多次乌拉坦注射诱导的BALB/C及C57BL/6J小鼠肺癌发生率均为10/10(100%);BALB/C小鼠荷瘤数明显多于C57BL/6J小鼠(P0.01),同时,直径也大于C57BL/6J小鼠(P0.05);HE染色显示多次乌拉坦注射诱导的肺癌有非典型性腺瘤增生及腺瘤两种病变类型。结论 BALB/C和C57BL/6J小鼠均可以作为多次注射乌拉坦诱导性肺癌模型的动物,BALB/C小鼠对该肺癌模型的敏感性高于C57BL/6J小鼠。     

BALB/c突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究

目的　BALB c突变无毛小鼠的皮肤和被毛结构的突变是否影响机体的免疫功能 ,为此研究其免疫功能。方法　通过流式细胞仪和ELISA方法。对特异性免疫指标CD4+ 、CD3+ 、CD8+ 、CD19+ 、IgG进行检测。结果　各项指标雌雄之间差异不显著 ,无毛小鼠的各项指标均低于其他表型的指标。各组之间方差分析结果 :CD8+ 差异显著 ,其他指标差异不显著。IgG抗体的吸光度的结果 ,三种表型之间差异不显著。结论　该小鼠的皮肤和被毛突变对免疫功能有一定的影响。     

小鼠对表达HBV截短肽的耻垢分枝菌的免疫应答

分别以生理盐水、pcDNA3.1(-)空质粒、重组真核质粒pcDNA3.1(-)-C-preS1(简称基因免疫组)、耻垢分枝杆菌和重组耻垢分枝杆菌(简称重组耻垢免疫组)注射BALB/c小鼠,各组均免疫2次,每次间隔3周。末次注射后进行连续抗体测定,最后处死小鼠分离脾细胞,进行淋巴细胞增殖实验和细胞毒性T细胞杀伤实验。重组耻垢免疫组抗体滴度升高幅度前期低于基因免疫组(P<0.05),后者45 d达到峰值1∶5 100。前者抗体滴度第60 d达到峰值1∶6 900,45 d后重组耻垢免疫组抗体滴度高于基因免疫组(P<0.05),且维持时间较基因免疫组更长(P<0.05)。基因免疫组诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖刺激指数低于重组耻垢免疫组(P<0.05)。后者诱导的特异性CTL杀伤率最高可达到50.2%,而前者最高为31.6%,二者有显著区别(P<0.05)。     

Immune Cells from SR/CR Mice Induce the Regression of Established Tumors in BALB/c and C57BL/6 Mice

Few experimental models are available for the study of natural resistance to cancer. One of them is the SR/CR (spontaneous regression/complete resistance) mouse model in which natural resistance to a variety of cancer types appeared to be inherited in SR/CR strains of BALB/c and C57BL/6 mice. The genetic, cellular, and molecular effector mechanisms in this model are largely unknown, but cells from the innate immune system may play a significant role. In contrast to previous observations, the cancer resistance was limited to S180 sarcoma cancer cells. We were unable to confirm previous observations of resistance to EL-4 lymphoma cells and J774A.1 monocyte-macrophage cancer cells. The cancer resistance against S180 sarcoma cells could be transferred to susceptible non-resistant BALB/c mice as well as C57BL/6 mice after depletion of both CD4+/CD8+ leukocytes and B-cells from SR/CR mice. In the responding recipient mice, the cancer disappeared gradually following infiltration of a large number of polymorphonuclear granulocytes and remarkably few lymphocytes in the remaining tumor tissues. This study confirmed that the in vivo growth and spread of cancer cells depend on a complex interplay between the cancer cells and the host organism. Here, hereditary components of the immune system, most likely the innate part, played a crucial role in this interplay and lead to resistance to a single experimental cancer type. The fact that leukocytes depleted of both CD4+/CD8+ and B cells from the cancer resistant donor mice could be transferred to inhibit S180 cancer cell growth in susceptible recipient mice support the vision of an efficient and adverse event free immunotherapy in future selected cancer types.