用反向间接血凝试验检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)

本文介绍一种简便、快速、敏感、适宜于一般临床化验室使用的反向间接血凝检测HBsAg方法。以丙酮醛、甲醛固定羊红细胞,在酸性条件下,用四种不同方法纯化的抗-HBs／豚鼠血清直接致敏。其中以免疫纯或固相吸收经DEAE-纤维素层析-葡聚糖凝胶G-200过滤的抗-HBs／豚鼠血消致敏效果最好,效价最高可达220。这种致敏羊红细胞检测HBsAg灵敏度高,特异性强,凝集模式稳定,重复性良好,比对流免疫电泳法的敏感度提高500倍左右。作者老对不川红细胞作了选择,比较了几种常用固定剂,井对致敏红细胞的pH、时间、温度、蛋白量等条忭进行了摸索。用反向间接血凝试验,免疫粘附血凝试验,放射免疫对流自显影三种敏感方法测定796份样品,阳性率分剧为28．57％、28.39％、27.18％。以反向间接血凝法稍高。     

微量间接血凝试验用于斑疹伤寒诊断

用鼠肺培养的普氏立克次体提取的ESS(Erythrocytes Seasltizlng Substance)可溶性抗原致敏6种经醛固鞣化的红血球,结果证明人“O”型、绵羊、家兔红血球较敏感;在37℃或4℃条件下用2．5％戊二醛、1：20,000鞣酸各处理15分钟所致敏的血球抗原血凝滴度高;以2．5％浓度醛固鞣化血球加入等量ESS可溶性抗原致敏为宜。此法制备的血球抗原可冻干保存。血凝反应比补体结合、外斐氏试验敏感性高,特异性强,没有非特异性交叉反应。可用微量塑料板法,便于基层流行病学及临床早期诊断用,亦可用作间接血凝抑制试验检查抗原。     

流行性出血热病毒单克隆抗体的反向被动血凝和被动血凝抑制试验在诊断中的初步应用

本文用流行性出血热病毒单克隆抗体致敏羊血球,做反向被动血凝和被动血凝抑制试验。检查出血热病毒抗原和抗体,不仅敏感,性能稳定,而且操作简便、快速。     

流行性出血热冻干致敏人O型血球的研制及其应用

本文应用致敏的人O型血球研究反向间接血凝(RPHA)和反向间接血凝抑制(RPHI)方法用以检测流行性出血热抗原抗体,并试验成功用pH9.0硼酸盐水制备灭活鼠脑病毒液作为抗原。为抗原制备提供了一种简便的方法。以上RPHA法用于检测组织培养内病毒与用荧光法检测细胞内病毒抗原法结果一致,用RPHI检测病人血清抗体效价,特异性高,敏感性与IFA相同。该致敏血球和抗原是冻干制品,稳定性好、使用方便,是一种代替荧光检测病毒抗原和抗体的良好制品。     

用单克隆抗体检测霍乱肠毒素

Holmes等在1978年曾报道了一种检测霍乱肠毒素的快速而又灵敏的方法——反向间接血凝试验,但致敏红细胞的抗体提纯相当复杂。我们在建株了霍乱肠毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞以后,利用该杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体致敏醛化羊红细胞从而检测霍乱肠毒素,不仅方法简单,而且快速敏感,同时重复性也相当好。现将其方法和结果介绍如下:     

被动血凝试验测定伤寒Vi抗体

作者从拘橼酸杆菌中提取纯化获得其Ｖｉ多糖抗原,该抗原具有伤寒沙门氏菌Ｖｉ抗原的免疫学特性,而不含伤寒沙门氏菌０,Ｈ抗原,用其致敏新鲜羊血球作被动血凝试验,特异性敏感性均很好。所需Ｖｉ抗原致敏浓度极低,仅为０．０５ｕｇ／ｍｌ。使用新鲜羊血球凝模式较好,便于观察结果,采用被动血凝试验检测１０６名健康中学生肌肉注射３０ｕｇ伤寒Ｖｉ多糖菌苗前后Ｖｉ抗体的变化情况,发现免疫后血清抗体的四倍增长率达８９％,表明伤寒Ｖｉ多糖苗具有良好的免疫原性。     

用反向被动血凝及血凝抑制方法检测流行性出血热病毒抗原和抗体

本文建立了检测流行性出血热病毒(EHFV)液体抗原及抗体的反向被动血凝(RPHA)和血凝抑制(RPHI)方法,RPHA检测EHFV抗原的敏感性与ELISA相近;RPHI检测EHFV抗体与IFA的符合率为97.3％,敏感性略低。     

用反向血凝技术检测脑脊液中抗原诊断隐球菌脑膜炎

本室曾报道过用微量补体结合反应及对流免疫电泳技术检测脑脊液中新型隐球菌抗原。这两种免疫学方法的敏感性还不够理想,而且敏感性较好的补体结合反应方法又比较烦琐,因而我们继续研究应用反向间接血凝技术检测隐球菌抗原,此方法的优点是敏感性、特异性及重复性均很好,并操作简单,容易掌握,出结果快。现将结果报道如下:     

用巨细胞病毒抗原致敏的冻干血球作间接血凝试验

本文报告用巨细胞病毒(CMV)抗原致敏的冻干绵羊红细胞(简称冻干血球)做间接血凝试验。用5％正常兔血清和10％蔗糖磷酸盐缓冲液作保护剂,将巨细胞病毒抗原致敏的绵羊红细胞进行真空冷冻干燥,制成了冻干血球。经反复检测发现,用含百万分之一Tween20、2％正常兔血清的磷酸缓冲液稀释冻干血球,可消除冻干过程中产生的非特异性凝集反应。所建立的方法重复性较好,特异性与ELISA相同,敏感性比CF高。     

甲种胎儿蛋白放射对流免疫电泳的定量测定

本文介绍一种新的放射对流免疫电泳测定甲胎蛋白的方法,此方法系用放射免疫的原理,对流电泳的条件建立的微量定量测定法。在电泳过程中,抗原抗体进行反应同时也就将复合的抗原-抗体与游离的抗原分开。这一新的方法比以往放射免疫方法简便快速,而具有同样的灵敏度。用放射对流免疫电泳法及放射免疫法对12例正常人及2例肝癌患者血清中甲胎蛋白的含量进行了比较,所得结果基本相符。另外,还用此方法观察了大鼠胚肝细胞培养过程中培养液内甲胎蛋白浓度的变化。     

血凝法的生物载体选择与处理

用ＨＢｓＡｇＲＰＨＡ做为模式,选用羊、火鸡、鹅、人Ｏ型血球为载体,醛化后分成致敏和不致敏两种,与异嗜性抗体、中国生物制品药品检定所的参比品等作凝集试验。结果表明,无论特异性还是灵敏度都以人Ｏ型血球为最佳。在此基础上,设计了五种醛化方法处理人Ｏ型血球,共得出１８个醛化样品,经７３种不同的比较试验,筛选出最佳醛化方法为改良丙酮醛──甲醛法,采用该法醛化后血球为褐色,阴性血清和空白对照背景清晰,血球沉集点致密,下滑程度好。致敏抗—ＨＢｓＭｃＡｂ后,使ＨＢｓＡｇ灵敏度达到１～２ｎｇ／ｍｌ。为制备高质量的血凝试剂提供了最佳载体。     

放射对流免疫电泳自显影术测定血清甲种胎儿蛋白

本文介绍放射对流免疫电泳自显影术测定甲种胎儿蛋白(简称AFP)。此方法具有快速、敏感、简易等特点,是一种比较适合农村的放射免疫测定方法。它的检测范围在25毫微克-25微克/毫升之间, ~(131)I-AFP的有效使用期限较长。用此方法进行普查得到了较为满意的结果。对偶尔发生的非特异性反应,可用放射免疫双向扩散自显影术鉴别。近年来,放射免疫测定血清甲种胎儿蛋白已在临床上广泛应用。饱和分析和放射对流免疫电泳定量法,虽可精确定量10毫微克/毫升左右,但操作过程较长,需要计数仪。为了更好地落实毛主席“把医疗卫生工作的重点放到农村去”的伟大号召,简化放射免疫测定是必要的。标记抗原参人火箭电泳自显影法(简称放射火箭自显影)的建立和应用,为普及放射免疫测定AFP开创了新的途径,但建立多种敏感度高、特异性强、并适合于普查用的放射免疫测定法,仍是临床和研究的需要。本文介绍的放射对流免疫电泳自显影术(简称放射对流自显影),可能成为简单、易行,便于普及的放射免疫测定方法之一。     

Vi-PHA试剂的研制及其在检测伤寒带菌者中的应用

用纯化伤寒沙门氏菌的Vi抗原,以1 μg／ml量致敏鞣化醛化绵羊红细胞,研制成Vi—PHA试剂,用于伤寒病后慢性带菌者的检出及食品从业人员伤寒健康带菌者的筛选。具有敏感性高、特异性强和稳定性好等特点。本试剂能检出1．16μg／ml Vi-抗体。对健康人群血清无交叉,而与非伤寒病种患者血清仅有0．84％交叉反应。用于检测274例伤寒病后3个月以上和1年以内康复者血清,阳性19例,占6．93％。其中14例粪便培养出伤寒沙门氏菌,占Vi—PHA总阳性率的73．68％o 106例疫区食品从业人员Vi—PHA阳性3例,其中1例培养出伤寒沙门氏菌。255例Vi—PHA≤1：20的伤寒病后康复者,无1例粪检阳性。结果表明,伤寒康复者血清中Vi抗体与其体内带菌具有较高的特异性和相关性。此外,本试剂所采用的方法操作简便,时间快速,结果判断清晰,易在基层推广。     

用免疫学方法检测脑脊液中抗原诊断隐球菌脑膜炎

1．本文报道成功地用改良的对流免疫电泳及微量补体结合技术检测隐球菌脑膜炎病人脑脊液中多糖体抗原的方法。对流免疫电泳的改进要点是电泳凝胶板采用国产琼脂糖。由于琼脂糖电渗流很弱,将凝胶板放在冰箱中7天后使用或在紧急待用时,在琼脂糖中掺入30％普通琼脂就可以使抗体产生足够的负向移动。改良对流免疫电泳后敏感度提商10倍左右。 2．本室制成的1号抗血清与本市所收集的9个菌株都能起凝集反应,也能与9个菌株的多糖体抗原起免疫反应,特异性和敏感性都是比较满意的。 3．用多糖体对1号抗血清的吸收试验,初步证叫所有多糖体实际上都可移走1号扰血清的凝集活性,但是用5号菌株吸收后,残留有少量的对几个菌株的凝集素,这可能是指它们存在有不能完全吸收的微量抗原。 4．用这批抗血清检测了临床几年来收集的16份脑脊液标本和11份血清标本,其中三例临床确诊为新型隐球曲脑膜炎,我们的抗原测定也全部阳性,其它疾病的24份标本抗原测定 全部阴性。 5．测定抗原的效价能反映出病情严重程度,迁延和治疗效果。     

MacELISA、RPHI和IFAT用于流行性出血热早期诊断的比较

比较了IgM捕获ELISA(MacELISA)、反向间接血凝抑制试验(RPHI)和间接免疫荧光抗体试验(IFAT)检测流行性出血热(EHF)病人血清特异性抗体的结果。MacELISA对急性期血清IgM抗体的阳性检出率与RPHI对总抗体的阳性检出率相近,两法都具有较高的敏感性。而IFAT检测IgG抗体的阳性率则较低。总抗体滴度(RPHI)与IgG抗体滴度(IFAT)相关(r=0.542,P<0.01),而与IgM抗体滴度(MacELISA)无明显相关(r<0.1)。但进一步研究发现,3日内血清IgM抗体滴度与总抗体滴度(RPHI)存在相关关系(r=0.701,P<0.01),表明IgM抗体可能也与发病初期RPHI的较高的阳性检出率有关。本工作表明,MacELISA作为一种早期诊断方法具有高度的特异性和敏感性,而RPHI操作简便、快速、敏感性高,但存在一定的非特异性。研究还发现,流行区临床诊断为EHF的病人,IFAT(IgG)和RPHI检测均阳性,而MacELISA(IgM)阴性,提示用RPHI进行血清学诊断时,检查双份血清是必要的。     

反向被动血凝改良一步法检测血清HBsAg

反向被动血凝改良一步法检测血清ＨＢｓＡｇ大连市劳动卫生研究所大连１１６０１１曹桂荣,王月芬反问被动血凝法（ＢＰＨＡ）检测乙型肝炎表面抗原（ＨＢｑＡｇ）,具有灵敏、快速、简便等优点［１］。为了避免非特异性凝集反应,通常采取中和抑制试验作为对照。测定时间...     

严重急性呼吸综合征患者血清特异性抗体消涨规律的长期追踪研究

目的:追踪检测SARS冠状病毒(SARS-CoV)抗体在严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中的产生及其转归规律,为SARS诊断及防治提供依据。方法:对41例临床诊断SARS患者的血清进行了连续3年的检测,分别应用间接免疫荧光(IFA)检测患者血清特异性IgG抗体平均滴度,应用双抗原夹心ELISA法检测患者血清核衣壳蛋白(N蛋白)抗体的平均滴度,绘制消涨曲线,得出消涨规律。结果:应用IFA检测患者血清特异性IgG抗体与应用双抗原夹心ELISA法检测N蛋白抗体所得到的消涨规律不同,前者测得康复者血清IgG抗体滴度维持在较低水平,但后者检测35例康复者血清N蛋白抗体仍维持在较高水平。结论:SARS-CoV的N蛋白是免疫原性较强的抗原,感染3年后仍存在高滴度抗体;抗原夹心ELISA检测SARS-CoV N蛋白抗体的灵敏度较IFA方法高。     

免疫沉淀法用于A群流脑多糖菌苗的鉴别试验

本文将免疫沉淀法——免疫双扩散及对流免疫电泳法用于Ａ群流脑多糖菌苗的鉴别试验。并对其检测Ａ群流脑多糖菌苗的特异性及敏感性与传统采用的间接血凝抑制试验法进行了比较。试验结果表明,免疫沉淀法准确、特异性好、操作简便、经济。完全符合ＷＨＯ规程及中国规程中对《Ａ群脑膜炎球菌多糖菌苗制造及检定规程》鉴别试验的要求。因此可望替代现行的间接血凝抑制试验,以作为今后Ａ群流脑多糖菌苗鉴别试验的常规测定法     

柯萨奇病毒A组16型灭活抗原对小鼠免疫保护作用的研究

为了研究柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)灭活抗原在小鼠体内所产生免疫保护作用效果,我们选用CVA16临床分离株521-01T,在Vero细胞中进行大量培养,并对培养产物进行甲醛灭活及超速离心纯化。SDS-PAGE和Western blot对纯化的灭活病毒纯度及性质进行初步分析。Al(OH)3+CVA16及单独CVA16抗原,分别经皮下注射免疫雌性ICR小鼠;相同免疫途径、剂量于第14和28d加强免疫2次。ELISA法检测CVA16特异性血清IgG抗体滴度;微量中和试验法鉴定血清中和抗体滴度;酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测特异性T淋巴细胞的活化。对Al(OH)3+CVA16抗原免疫组母鼠所产仔鼠进行脑腔攻毒,检测母传抗体对新生乳鼠的保护作用。结果显示,Al(OH)3+CVA16灭活抗原在小鼠体内能诱生高滴度的特异性抗体,3次免疫后产生的特异性血清IgG抗体滴度最高可达1∶1×105(P=0.000),中和滴度高于1∶256。同时,该抗原还可以诱导特异性T淋巴细胞的活化。以1 000LD50的病毒量脑腔接种48h内新生乳鼠的病毒攻击实验显示,该母传抗体对新生乳鼠具有100%的保护。这一结果表明该灭活CVA16病毒抗原具有较好的免疫原性及保护性,为CVA16灭活疫苗的研究及评价体系提供了参考。     

抗MRSA-PBP2a鸡卵黄抗体的制备及乳胶凝集检测法的建立

制备抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a( MRSA- PBP2a)抗原的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立检测MRSA的乳胶凝集方法.采用体外诱导的方法制备PBP2a蛋白,胸部肌肉多点注射方式免疫6只海蓝蛋鸡,水稀释法提取IgY,BCA法测定蛋白含量,Western blotting进行特异性分析,用提取的IgY抗体致敏聚苯乙烯乳胶,建立检测PBP2a的乳胶凝集方法.成功诱导并制备获得纯化的PBP2a蛋白,首次免疫后1月每枚鸡蛋提纯后可获得约48 mg IgY抗体,Western blotting结果显示IgY抗体能有效识别纯化的PBP2a蛋白;成功建立检测PBP2a的乳胶凝集法,敏感性达1 mg/L.抗MRSA- PBP2a鸡卵黄抗体具有较高的敏感性和特异性,基于其建立的乳胶凝集检测方法具有较好的灵敏性.