苏云金杆菌79007发酵上清液对棉铃虫的毒力作用

79007菌是一株对棉铃虫高效的苏云金杆菌。该菌与已知的7216、HD-1菌的发酵晶体毒素含量基本一致,但其上清液具有一种明显的增效作用。     

一株抑真菌、对甜菜夜蛾高效的苏云金芽胞杆菌菌株

为了扩大苏云金芽胞杆菌的杀虫谱及生防范围,通过抑真菌和杀虫生物活性测定,筛选到一株抑真菌并对甜菜夜蛾高效的菌株Bt519-1.此菌株对所测试的小麦赤霉、黄瓜灰霉等8种真菌都有不同程度的抑制作用,且完全抑制这些真菌孢子的萌发.通过室内生物测定发现该菌株对甜菜夜蛾具有很高的杀虫活性,半致死浓度(LC50>)仅为5.5 μg/mL.经特异引物检测,证明该菌株含有6种杀虫蛋白基因:crylAa、crylAb、crylAc、cry1I、cry2和vip3A.经SDS-PAGE分析,Bt519-1菌株分别产生分子量大约为135 kD～130 kD、95 kD、80 kD、70 kD和65 kD～60 kD的几种杀虫晶体蛋白.在有无几丁质的培养基中都能产生较高活性的几丁质酶.试验证明苏云金芽胞杆菌Bt519-1是一株既杀虫又拮抗真菌的多功能生防菌株.     

抗夜蛾科苏云金芽孢杆菌WY-197菌株的生物学特性研究

苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,Bt)WY 197菌株是从 4 0 0多株野生型Bt菌中筛选分离的1株对甜菜夜蛾和棉铃虫都具有高效杀虫活性的菌株。初步比较WY -197菌株和HD 1的形态特征、生理生化特性和伴孢晶体蛋白 ,结果表明 ,WY -197属于H3a3b3c血清型 (subsp .kurstaki) ;伴孢晶体形态主要为大小不一的菱形、小正方形。SDS -PAGE电泳图谱表明主要由 135ku和 6 5ku两种蛋白成分组成 ,在菌株生长形态、发酵培养特征、生理生化特性方面与生产菌株HD-1差别不大。采用生物测定的方法 ,进一步鉴定比较它们对甜菜夜蛾初孵、二龄、三龄幼虫和棉铃虫的毒效差异。结果表明 ,BtWY 197菌株发酵液对甜菜夜蛾初孵、二龄、三龄幼虫的LC50 分别为 0 .31、0 .6 1、2 .5 7μL/mL ,其中对甜菜夜蛾初孵幼虫的毒效是对照菌HD 1发酵液的 7倍 ,表明BtWY 197菌株对甜菜夜蛾三龄以下幼虫具有高毒力。对棉铃虫的毒力效价为 30 0 0IU/ μL ,略低于HD- 1菌株。     

苏云金芽孢杆菌两株溶原性噬菌体的生物学特性

研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的溶原性及其噬菌体的生物学特性,从生产菌株MZ1中分离了两株溶原性噬菌体。MZ1经诱导后产生直径约为3mm和1mm的噬斑,分离获得属长尾噬菌体科的噬菌体MZTP01和MZTP02两株;分别对6株和7株不同亚种的Bt菌株具有侵染力;免疫血清与相应噬菌体的中和反应K值分别为45和326,且两者无相关抗原性。MZTP01抵抗酸、碱、紫外线和热的能力比MZTP02强,但抵抗有机溶剂的程度比MZTP02弱。MZTP01的潜伏期为80min,裂解量为55;MZTP02的潜伏期为40min,裂解量为175。核酸结构分析均表明为线性dsDNA分子。两基因组DNA的凝胶电泳表明分子量均在9.4~23kb之间,并被HindⅢ酶切分别产生8条和9条清晰条带。该菌株被证明为二元溶原菌,可能是造成生产损失的主要原因;为防治溶原性噬菌体提供了生物学信息。     

苏云金杆菌“79007”菌株发酵工艺的研究

对苏云金杆菌79007菌进行了生长条件的研究,获得了该菌最佳发酵培养基配方和最优发酵工艺。最佳培养基配方(g/100 mL):豆饼粉2.5,淀粉2.0,酵母粉2.0,玉米浆2.0,添加剂Ⅰ号0.1,葡萄糖1.0,KH2PO40.3,CaCO30.1,CaCl20.05,MgCl20.01,CuCl20.005,ZnSO40.002,CoCO30.005;15 m3发酵罐最优工艺:通气量1∶0.5~1.1,培养温度28~33℃,搅拌转速0~200 r/min。40 m3发酵罐连续4批试验表明,平均发酵效价6 053.5 IU/μL、平均晶体蛋白含量达0.5%,产品质量达到原粉优质品。     

苏云金杆菌79007菌的研究

城湖北省天门县岳口镇采用到一自然死亡的舍蝇幼虫,从中分离到一株对棉铃虫高毒的Ｂｆｔ菌株,代号为７９００７,该菌具有苏云金杆菌天门变种（７２１６）的典型特征,经鉴定,该菌的生理生化特征与已知的Ｈ３ａ３ｂ的弋尔斯德变种（ＨＤ－１）天门变种（７２１６）略有差异,血清型与ＨＤ－１,７２１６完全一致,但对棉铃虫的毒力却大大高于两个对照菌株,为我国防治棉铃虫的一株新的高效菌。     

一株对小菜蛾高毒力的苏云金杆菌的选育及研究

利用醋酸钠 抗生素法从土壤中分离出 1株对小菜蛾 (Plutellaxylostella)高毒力的苏云金杆菌Bt 990 5。该菌对小菜蛾 4 8h的平均死亡率为 98.5 %。高于标准菌株HD 1(81.2 % )。同时 ,对该菌的形态、培养特征 ,生化特性和杀虫晶体蛋白的分子量的测定以及cry基因类型的鉴定进行了研究。     

苏云金杆菌δ-内毒素、芽孢及苏云金素A对棉铃虫毒性及拒食性的比较

苏云金杆菌库斯塔克变种HD-1的晶体蛋白与芽孢、HD-1无晶体突变株(Cry-)的芽孢以及苏云金素A对棉铃虫Helicoverpa armigera毒性和拒食性的比较研究显示,HD-1晶体蛋白对棉铃虫的杀虫毒力高, 拒食作用强; HD-1芽孢对棉铃虫具有一定的杀虫活性和生长抑制作用, 并有很强的拒食作用; HD-1无晶体突变株(Cry-)芽孢对棉铃虫无毒也无拒食作用;苏云金素A对棉铃虫的生长发育有极显著的抑制作用, 但对棉铃虫无拒食作用,由此证明晶体蛋白是苏云金杆菌杀虫活性和拒食作用的主要来源。苏云金素A与苏云金杆菌芽孢晶体混合物一起使用, 可使棉铃虫的死亡率显著提高。     

棉铃虫中肠类胰蛋白酶的部分纯化和性质测定及其对苏云金杆菌δ—内毒素的降解作用

将棉铃虫Helicoverpa armingera中肠液经SephadexG-75、DEAE-SephadexA-50阴离子交换和CM-SephadexC-50阳离子交换柱层析进行分离纯化,得到部分纯化的24.5kD蛋白,该蛋白可以水解胰蛋白酶的专性底物BApNA和TAME,不能水解胰凝乳蛋白酶的专性底物BTEE,蛋白酶抑制剂的抑制试验显示,TLCK、PMSF、STI及SBBI均可显著抑制该蛋白对BApNA的水解作用,而TPCK无抑制作用,由此推断,24.5kD蛋白是棉铃虫的类胰蛋白酶。以BApNA为底物,类胰蛋白酶的最适pH为10.5-11.0。SephadexG-75分离得到了4个洗脱峰,电泳结果显示,各洗脱峰均能使苏云金杆菌库斯塔克变种Bacillus thuringiensis var.kurstakiHD-1原毒素降解为60.5kD的活力片段,峰Ⅳ虽然不能水解BApNA和TAME,但仍可对原毒素进行降解,而类胰蛋白酶活力最高的峰Ⅱ已将60.5kD蛋白完全降解,当减少用量至1/3时,才出现60.5kD蛋白。因此,苏云金杆菌δ-内毒素在棉铃虫中肠内的降解有多种蛋白酶参与,类胰蛋白酶在其中起重要作用,CM-SephadexC-50进一步分离得到的类胰蛋白酶可对原毒进行降解,其降解作用受到TLCK、PMSF、STI及SBBI的显著抑制,不受TPCK的影响。     

苏云金杆菌伴孢晶体的溶解和降解作用对棉铃虫杀虫毒力的影响

SDS－PAGE的研究结果表明Bt原毒素的酶解速率大于晶体,即晶体蛋白溶解后更易于被棉铃虫中肠蛋白酶所降解。与棉铃虫中肠液、牛胰蛋白酶和牛胰凝乳蛋白酶在30℃孵育17h,随着缓冲液PH值由6．9增至10．5,晶体的降解程度也随之加重。在PH为10．5时,晶体蛋白完全降解,产生的活力片段分子量分别为60．5±1．26Kd,61．6±1,16Kd,61．7±2．0Kd。生物测定结果显示,晶体蛋白在碱性缓冲液中孵育后,可提高其对棉铃虫的杀虫毒力,而酶解作用对毒力影响不大。人工饲料的PH值直接影响伴孢晶体对棉铃虫的杀虫毒力。以pH为8．0的0．01mol·L-1Tris－HCl缓冲液及pH为10．0的0．01mol．L-1glycine－NaOH缓冲液配制饲料,晶体的毒力显著增高。     

RESISTANCE ALLEVIATION IN THE LARVAL COTTON BOLLWORM TO FENVALERATE AFTER PRE-TREATMENT WITH BACILLUS THURINGIENSIS

Abstract  Resistance alleviation and mechanism in the 2nd instar larvae of one susceptible and two resistant strains of the cotton bollworm, Helicoverpa armigera to fenvalerate were studied at 24 h after the larvae were treated with Bacillus thuringiensis Berliner ( B.t. ) preparation. The results showed that responses of larvae with B. t pretreatment to fenvalerate were much more sensitive than those without B. t pretreatment. Compared with the susceptible strain (YZ-S), net ratios between LD₅₀s with and without B. t pretreatment in the two resistant strains increased approximate 62. 6% and 80. 9%, respectively) inhibition of specific inhibitors to esterases displayed that efficacy of malaoxon and paraoxon methyl to acetyl-cholinesterase increased from 66.1% to 99. 8% in vitro and in vivo ; dynamic factors of acetylcholinesterase were significantly changed, in which K _m and V _max values decreased from 45. 58% to 68. 62% and K _i values of malaoxon and paraoxon methyl to acethylcholinesterase increased approximate 60%. It suggested that the sensitivity of the 2nd instar larvae of resistant H. armigera to fenvalerate might increase after B. t pretreatment for 24 h, and change of acetylcholinesterase was an important factor during resistance alleviation by B. t pretreatment. The research showed that it is practicable to bring the coordinated use of B. t and chemical insecticides in IPM system.     

中国Btken-Ag的特性及其杀虫毒肽的研究

苏芸金芽孢杆菌肯尼亚亚种Ag株(Bacillus thuringiensis serovar.kenyae strainAg,以下简称为Btken-Ag)是血清型H4a-4c中对棉铃虫、粘虫等多种夜蛾科害虫具有高毒力的优良品系,经生理生化、H抗原、酯酶谱、抗生谱和质粒谱等性状比较分析,与标准株肯尼亚亚种023大体相同,但其质粒谱及伴孢晶体多肽组分与023明显有别.该菌株伴孢晶体多形,其主要杀虫成分为61000多肽,经ELISA同源分析,此毒肽与同血清型中的023、7501晶体蛋白高度同源,与商品生产株H3a-3b—HD-1株部分同源,与对蚊虫高效的H14-1897及球形芽孢杆菌Ts-1无同源性.此外,对H4中10株相关株、H7-5、HD-1及1897共13株进行了对棉铃虫、粘虫及蚊虫的杀虫毒力比较测定,其中Btken-Ag的优选株H4-1及b1-4对棉铃虫的毒力高于023株及HD-1株.     

苏云金杆菌预处理棉铃虫二龄幼虫对氰戊菊酯抗性缓解及机理研究(英文)

本文研究了Ｂ．ｔ预处理棉铃虫二龄幼虫对氰戊菊酯抗性缓解及其机理。结果表明,Ｂ．ｔ预处理后的幼虫对氰戊菊酯的敏感性提高。与敏感性种群相比较,在Ｂ．ｔ预处理和未处理两个抗性种群的幼虫对氰戊菊酯的ＬＤ_５０之间纯比值分别大约增加了６２．６％和８０．９％。特异性酶抑制剂对乙酰胆碱酯酶的抑制作用显示,在活体内,马拉氧磷和甲基对氧磷对乙酰胆碱酯酶抑制效率提高了６６．１％和９９．８％;在活体外抑制效率（Ｉ_５０） ６０％和６７．５％及５５．６５％和８６．４％。同时,乙酰胆碱酯酶动力学各因子变化显著。在Ｂ．ｔ预处理的抗性棉铃虫幼虫中,Ｋｍ值从４５．５８％减少到６８．６２％;Ｋｉ值分别增加了２１．２％和４０．９％及３８．２％和６１．５％。这些结果证实Ｂ．ｔ预处理２４ｈ抗性棉铃虫二龄幼虫对氰戊菊酯的敏感性提高,乙酸胆碱酯酶的变化是重要原因之一。这一研究为在ＩＰＭ系统中将微生物杀虫剂和化学杀虫剂协调使用缓解棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性提供理论基础。     

EFFECT OF FEEDING STIMULANT ON THE FEEDING BEHAVIOR AND MORTALITY OF HELICOVERPA ARMIGERA ON DIETS WITH BACILLUS THURINGIENSIS*

Abstract Bacillus thuringiensis (Bt) was noticed to be highly deterrent to the feeding of Helicoverpa armigera larva when incorporated into diets, even at the non‐lethal dosage. As the dosage of Bt increased, the deterrence showed a tendency of elevation. Feeding stimulant, FS‐1 could attract larvae for feeding, and increase larval feeding time and consumption. Addition of 1% (vlv) FS1 could alleviate the deterrent effect of Bt, especialy in low concentration. In no‐choice test, it was observed that while 1% (v/v) FS1 was added, LC₅₀, of Bt underwent a 41% decrease, but in the choice test, the mortality of larvae was not significantly enhanced.     

取食刺激剂对棉铃虫在含苏云金杆菌饲料上的取食行为和死亡率的影响(英文)

苏云金杆菌在非致死剂量下对棉铃虫有强的抑食作用 ,且随着浓度的增加 ,抑食作用有进一步加强的趋势。棉铃虫取食刺激剂不仅对棉铃虫具诱引作用 ,可增加幼虫的取食时间和取食量 ,而且可减轻苏云金杆菌对棉铃虫的抑食作用。苏云金杆菌浓度越低 ,取食刺激剂的效果越好。非选择性实验中 ,加入取食刺激剂可使苏云金杆菌致死中浓度降低 4 1%。但在选择性实验中 ,幼虫死亡率无显著提高。     

苏芸金杆菌高毒力菌株筛选方法研究

通过对36株苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株孢晶混合物的蛋白图谱和其对小菜蛾(Plutella xylostella)。致倦库蚊(culex pipens)二十八星瓢虫(Epjlachna vigintioctopunctata)三种昆虫幼虫的致死率研究,我们建立了一套快速高效的苏芸金杆菌内毒素高毒力菌株筛选程序。该程序是将蛋白电泳方法引入苏芸金杆菌菌株筛选,经过一个简单的苏芸金杆菌孢品混合物的蛋白电泳后,可以迅速辩别出对所有试虫毒力均很低的菌株,这一类菌株在苏芸金杆菌分离物中的比例可高达80％以上。除此之外,根据电泳的结果还可以预测该菌株大概的宿主范围和发现新的杀虫晶体蛋白类型。运用该方法,可以大大提高苏芸金杆菌菌株筛选的效率并降低筛选所需的费用。     

棉铃虫幼虫小网膜细胞对光暗的反应

用透射电镜观察了棉铃虫Heliothis armigers(Hübnner)5龄幼虫小网膜细胞内一些细胞器的昼夜变化.其中色素颗粒,内质网,多泡体和多片层体变化特别显著.天亮3小时后,细胞内出现大量多泡体,多片层体和形态介于两者之间的细胞器.它们的数量随光照时间的延长而下降.天亮10小时后,大部分在细胞内消失.从天黑后2小时至天亮前2小时的细胞内含有大量的由滑而内质网构成的髓样体.天亮后它们在细胞内消失.昼夜交替还导致细胞内屏蔽色素颗粒周期性的水平和垂直移动.结合现有资料,我们对上述现象的意义进行了探讨.     

棉铃虫的取食营养特点与棉花抗虫素分布的关系

通过研究棉花8个部位对棉铃虫Helicoverpa armzgera的营养效果和其所含次生物质类萜烯和单宁的浓度及在组织中的分布,揭示了棉铃虫取食营养特点与棉花次生化学的关系。棉铃虫取食顶尖、转移蛀食蕾铃的习性,与有关器官或组织对幼虫的营养效果密切相关,而营养效果主要取决于类萜烯和单宁的含量。棉花顶尖嫩叶中单宁浓度随着棉花的生长发育呈升高的趋势;类萜烯浓度在第四真叶期、第六真叶期和现蕾初期之间出现一个明显的底谷,而此期幼虫主要为害顶尖。蕾铃外层的苞叶、花萼、花瓣和铃皮,因次生物质含量高,不利于幼虫生长,相反内部的花粉、子房和铃心,次生物质含量低,营养效果好,顶尖嫩叶则介于其间。类萜烯存在于组织的色素腺内,分布集中;单宁则散布于组织中,偏多分布于组织外层。结果证实,昆虫在寄主植物上的取食方式是昆虫对寄主体内变动的次生化学的一种适应,它使昆虫付出尽少代价获得最适营养效果。