实验技术

疟原虫血涂片的复染与褪色作为教学标本的疟原虫血片,因常用香柏油观察、二甲苯擦拭、封片的加拿大胶 pH 偏低及空气中二氧化碳可致血膜褪色;或因血片染色过深,致虫体难以辨认。为此,进行了复染和褪色试验。     

2011-2017年大连市输入性卵形疟原虫感染病例的实验室诊断

目的分析大连市2011-2017年7例输入性卵形疟原虫感染病例的病原、抗原及核酸检测结果,以提高卵形疟原虫诊断的准确率和效率。方法收集7例疑似疟疾患者的血样,对血样进行血涂片镜检、快速疟疾诊断试纸条检测(RDT)及荧光定量PCR检测。结果血涂片镜检结果显示7例患者均感染卵形疟原虫。RDT检测结果显示2例阴性,另外5例为泛疟原虫抗原阳性。荧光定量PCR结果显示7例患者均检出疟原虫属和卵形疟原虫核酸。结论综合镜检、RDT及荧光定量PCR检测结果确定该7例患者均为卵形疟原虫感染。     

疟原虫厚血膜染色最佳条件的经验介绍

本文介绍疟原虫厚血膜染色采用一种瑞氏-姬姆萨混合快速染色法,并对其最佳条件作了初步摸索。当溶血剂(0.6%甲醛PBS)的pH值在7.0、溶血时间2分钟、染色时间6分钟获得的效果最佳。不仅缩短了染色时间,且被感染的红细胞仍保留淡红色残影。其它红细胞多被溶解。疟原虫形态完整,核红浆蓝,清晰易辨,而且标本可长期保存。克服了瑞氏或姬姆萨染色的不足,适用于临床和教学。现将操作方法简介于下:取血1小滴于玻片中央,按常规涂成直径约0.6cm的厚血膜。平置干燥后,滴加溶血剂6滴于血膜上溶血2分钟,再用同样大小的滴管加瑞氏-姬姆萨染液(4:1)配成的…     

东北虎和华南虎血象及血液生化指标的测定

东北虎(Pnathera tigris amureusis)和华南虎(P.t.amoyensis)是濒于灭绝的珍稀动物,有关其血液学研究还未见报道。本文首次测定了东北虎和华南虎的血象及血液生化指标,现报道如下。1.材料与方法所用材料系苏州市动物园饲养繁殖的仔虎(东北虎5只,华南虎6只),虎龄为出生后35—80天,后肢静脉采血5毫升。血涂片用Wright和Giemsa染色,每只动物计数1000个有核细胞进行细胞分类。红细胞、白细胞、血小板计数均以血球计数板统计。血红蛋白采用光电比色法;二氧化碳结合力     

新的血液染色剂与方法

目前常用的血液染色法,如姬姆萨氏(Giemsa’s)法和赖特氏(Wrigh’s)法染色,在配制和染色过程中,都要使用缓冲液,使用很不方便, 最近在探讨次甲基紫Methylene Violet(Bernthsen)的化学性质时发现与其他染料配合使用,对血液涂片的染色效果较好,不亚于赖特氏     

巴尔通体分离培养特性观察

从鼠类血液中分离巴尔通体(Bartonella),观察其分离培养特性。被检鼠血为2004年收集自云南省的4个县,采用含5%去纤维兔血脑心浸液琼脂培基置于35℃含5%CO2培养箱中分离培养巴尔通体,进行观察,涂片革兰染色镜检,疑似菌落用巴尔通体属特异性引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增特异基因片段[枸橼酸合酶基因(gltA)的379 bp片段],电泳图中出现目标带即判断为阳性菌株。从397份鼠血分离到巴尔通体47份,分离率为11.8%。阳性菌落长出时间最早为3 d,多数为1~2周,占70.2%(33/47)。阳性菌落形态随培养时间延长而改变,特点多样。PCR阳性的菌经革兰染色,镜下均可见革兰阴性小杆菌。结果可见,可先用涂片革兰染色镜检,对疑似菌落进行初筛,巴尔通体种类多、形态多样,培养时间延长,菌落形态可能发生变异,有待进一步探索。     

中华稻蝗血细胞染色方法的比较

通过Giemsa、Wright和Giemsa-Wright混合染色3种方法,对中华稻蝗Oxya chinensis(Thunberg)的血细胞进行了染色和血细胞的形态学观察,其结果是Giemsa染液染色时间较长,对细胞核染色效果较好,细胞质界限清晰,但对细胞质中的颗粒染色较差;Wright染液染色时间较短,对细胞核和细...     

红内期人恶性疟原虫体外连续培养

在诺氏疟原虫体外连续培养180天成功后,进行了人恶性疟原虫体外培养。从现场选用患者血,用脱纤维方法抗凝,加甘油葡萄糖保护剂,在液氮内保存。培养时将冻血融化后,加入高渗葡萄糖并经微孔超滤膜透析后,移种100毫升三角瓶,按诺氏疟原虫培养方法,连续传代培养,到目前为止已培养70天。实验证明只要每天更换营养液,每2—3天添加新鲜人的红细胞,可以达到连续传代的目的。从血片上见到各期原虫形态正常,并有不同形态配子体的出现。本文对人怨性疟原虫体外培养有关因素进行了讨论。     

免疫组化染色和特殊染色对显示幽门螺杆菌的效果影响对比

目的探讨分析免疫组化染色和特殊染色对显示幽门螺杆菌的效果影响对比。方法选取2013年9月-2014年9月在我院的胃黏膜活检的组织标本共120例,将进行三种染色方法的检测,分为三组。Giemsa组:使用Giemsa染色法进行染色;中红组:使用中性红染色法进行染色;免疫组:使用免疫组织化学法进行染色,比较三组染色的特点。结果结果显示,染色阳性率:Giemsa组为45.0%,中红组为37.5%,免疫组为62.5%。结论可见免疫组化染色阳性率最高,具有比较好的检测显示效果,因此随着免疫组织化学技术的发展,未来会给检测幽门螺杆菌带来更大的发展和进步。     

逐步判别分析在疟原虫血涂片细胞分类中的应用

本文应用逐步判别分析方法对疟原虫血涂片细胞进行了分类研究。用169个红细胞(其中正常红细胞为130个,带疟原虫的红细胞为39个)作为训练集,192个红细胞(其中正常红细胞为157个,异常的为35个)作为考试集进行了统计分析,并通过实验调整判别阈值。对考试集的判别:假阴性率为11.4％,假阳性率为7.6％,结果较为理想。     

结核分枝杆菌滤过型的初步研究

目的研究结核分枝杆菌滤过型的生物学特性与检测方法。方法菌阴肺结核患者的结核分枝杆菌及其L型的液体培养物经0.45μm滤膜过滤后,涂片观察细菌形态,滤液分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用荧光基因定量法进行结核菌DNA检测。培养物用免疫组化染色鉴定,并采用透射电镜观察。结果30例痰、血滤前、滤后FQ-PCR检测同时阳性为53%,同时阴性为13%,滤前、滤后FQ-PCR结果符合率为67%。滤过后液体培养9例涂片见少许抗酸颗粒或椭圆性球菌。透射电镜见细胞壁缺失的"致密体"样细菌和细胞壁缺如菌。结论菌阴肺结核痰及血培养物中存在结核菌滤过型,滤过型携带遗传信息并可自我复制,采用生物学方法可以对其进行检测。     

约氏疟原虫蚊期体外培养：动合子和动合子形成的扫描电镜观察

为了开展疟疾防治以及疟原虫生物学的研究,进一步了解在体外培养中疟原虫的发育规律、形态结构等生物学特性,我们于1985年对离体培养的约氏疟原虫约氏亚种动合子和动合子形成进行了扫描电镜的观察。 材料和方法 约氏疟原虫约氏亚种(Plasmalium yoelii yoelii)用血传和蚊传保种。在昆明株小鼠(KM/AMS)体内多次血传做为供血鼠。C_(57)6JB/ax 小鼠保种。定期感染斯氏按蚊(Anpheles stephensis)MEM     

疟原虫重新染色的研究

疟原虫染色的血片标本,常因着色不佳或保存过久褪色,需要重新再染。半个世纪以来,许多寄生虫学工作者不断地改进与研究,但是重染的结果仍很不理想。1985—1990年,我们对此工作进行研究,先后进行共1219次试验,终于获得满意的结果。现报道如下: 材料与方法 1.去掉油迹、污垢及残留的染色痕迹将褪色和着色不佳的陈旧疟原虫染色标本,置于装有二甲苯的染色缸内浸泡10分钟,更换酒精二甲苯(100％酒精与二甲苯各半混合均匀)5分钟,再更换     

玉米花粉母细胞减数分裂染色体Giemsa显带

本报告叙述了玉米花粉母细胞染色体Giemsa显带的结果。在Giemsa染色下玉米花粉母细胞减数分裂的各个主要时期的染色体均能显带。所显现的带型主要为端粒带、近端粒带,个别染色体有中间带。但各个染色体上带的形态、大小、数目、位置和着色深浅程度等均不一样。有一个染色体不显带纹。     

应用计算机图像技术识别间日疟原虫的初步研究

目的应用数字图像技术识别间日疟原虫。方法基于图像预处理、图像分割、特征提取、判决分类等步骤,分别对间日疟原虫薄血膜的裂殖体图像进行处理,观察其识别效率和准确度。结果边缘检测和图像灰度值检测两种方法均能够识别间日疟原虫裂殖体,而二者的联合方法可以得到较好的识别效果。结论初步探索采用边缘和图像灰度联合检测的方法能够识别间日疟原虫薄血膜的裂殖体。     

一种放大凋亡细胞Giemsa染色法及其在抗癌药物研究中的应用

本文介绍了一种用甲醇、冰醋酸、水处理细胞再经Giemsa染色的方法,经该方法处理后,细胞体积增大,凋亡细胞形态尤其胞核结构在普通光学显微镜下非常清晰.采用高三尖杉酯碱诱导四种不同类型肿瘤细胞凋亡,经放大细胞Giemsa染色之后,可获得清晰的不同时期凋亡细胞形态学表现及动态变化特征.进一步用琼脂糖电泳法检测四种细胞的DNA降解程度,结果表明,这种放大细胞的方法比琼脂糖电泳法更适用于形成凋亡小体之前细胞形态学特征的分析,为抗癌药物及细胞凋亡的研究提供了一种直观、准确的方法.     

重庆地区中华蟾蜍指名亚种肠道内三种异养鞭毛虫的研究

采用Giemsa染色及活体观察方法,显示并描述了采自重庆北碚地区中华蟾蜍指名亚种Bufo gargarizans gargarizans肠道内的卵形后线虫Metanema ovula sp.nov.,切断沟滴虫Petalomonas abscissa(Dujardin,1841)Stein,1859和蛙毛线虫Trichomitus batrachorum(Perty,1852)等3种异养鞭毛虫的形态及其鞭毛、核器等结构的特征。     

三倍体草鲂杂种及其双亲的红细胞(核)大小和DNA含量

采用血液涂片、Wright和Giemsa染色、CMSD微测目镜数显仪测量草鱼、三角鲂及其杂交一代(简称草鲂杂种)的红细胞和核的大小。草鲂杂种红细胞和核的面积明显增大,其中比草鱼的红细胞和核都增大1.3倍,比三角鲂的红细胞和核分别增大1.3和1.5倍。用Feulgen染色,MPV-Ⅱ型显微分光光度计测定草鲂杂种及其双亲的红细胞DNA含量,草鲂杂种的红细胞DNA相对含量分别是草鱼和三角鲂的1.57和1.27倍,也表现出增大的现象,作者认为草鲂杂种是一个通过杂交产生的异源多倍体。另外,本文还就鱼类多倍化形成的途径及其应用作了探讨。     

用恶性疟原虫红内期体外培养技术筛选人疟动物模型

采用恶性疟原虫红内期体外培养技术筛选人疟动物模型,井用培养的疟原虫接种实验动物进行对比观察。 白掌长臂猿红细胞对海南两个虫株和柬埔寨株都易感,用培养海南l株的猿血接种原输血猿,引起的原虫血疟持续38天,接种后第2周原虫密度升至11.6／104 红细胞)高峰。蜂猴和猕猴对恶性疟原虫都不敏感。实验结果表明,恶性疟原虫体外连续培养技术可作为人疟动物模型初步筛选之用。     

怎样配制和使用瑞特氏染料

瑞特氏染料是碱性美蓝(亚甲蓝)与酸陛伊红钠盐混合而成的染色粉。当溶于甲醇后即发生解离,分成酸性染料和碱性染料两种。常用于血涂片的染色,染色后能清楚地区分不同种类的白细胞。但如果染料配制或使用不当,则得不到较理想的染色效果。