由2种单克隆抗体构成鸡尾酒疗法有效保护猕猴对抗埃博拉病毒Makona突变株

<正>2014~2015年西非埃博拉疫情爆发,空前急需特异性治疗策略。人鼠嵌合单克隆抗体(mAb)ZMapp曾被证明连续使用5 d对埃博拉病毒(Kikwit毒株)致死剂量感染的非人灵长类(NHPs)有效,在此次疫情中用于一些患者的治疗。在本研究中,我们证明了使用2个抗体组成的MIL77E鸡尾酒,其剂量为50 mg/kg、3 d,对Makona突变株(导致2014~2015年埃博拉疫情爆发的毒株)致死剂量攻毒的NHPs起到了完全保护作用,而同样的ZMapp配方则保护了3只NHPs中的2只。MIL77E含2个嵌合型mAb,基于ZMapp中的mAb c13C6和c2G4的结构,由CHO细胞表达。仅使用MIL77E的2个抗体的方法开启了一扇新的埃博拉病毒抗体鸡尾酒治疗方案之门。     

表达埃博拉病毒表面糖蛋白的rVSV载体疫苗的效力与效果

正以表达扎伊尔埃博拉病毒表面糖蛋白的重组、可复制水泡性口炎病毒为基础的疫苗(rV SV-ZEBOV)是有希望的埃博拉病毒候选疫苗。本文主要描述了在西非的几内亚地区所做临床试验临时分析的结果。此次标签开放、群随机的环状疫苗接种实验,Basse-Guinée(几内亚,西非)的埃博拉病毒疑似病例由国家检测系统的埃博拉应急小组独立进行确诊。     

腺病毒载体疫苗对埃博拉感染的非人灵长类提供暴露后保护

正埃博拉病毒(EBOV)在其感染的人群中引起高达90%的致死性疾病。疫苗中,只有疱疹性口炎病毒平台已经成功地在非人灵长类动物中提供了暴露后的保护。在这里,作者表明,人类腺病毒5型(Ad5)作为载体的佐剂疫苗(Ad5-扎伊尔埃博拉病毒糖蛋白)在埃博拉病毒攻击后30 min和24 h进     

重组腺病毒载体埃博拉疫苗的工艺特点和技术创新

<正>埃博拉病毒病(Ebola virus disease,EVD),是迄今发现的感染性最强的传染性疾病之一。埃博拉病毒属分5个亚种,即埃博拉-扎伊尔型(EBO-Zaire)、埃博拉-苏丹型(EBO-Sudan)、埃博拉-莱斯顿型(EBO-Reston)、埃博拉-科特迪瓦型(EBO-tai forest)和本迪布焦型(EBO-bundibugyoe)~([1])。不同亚种具有不同的特性,EBOZaire和EBO-Sudan对人类和非人类灵长类动物的致病性和致死率很高;2014年西非爆发的埃     

扎伊尔埃博拉病毒糖蛋白基因的克隆和表达

埃博拉病毒属丝状病毒科,能引发动物和人出血热症状,人感染后病死率高达90%以上,目前还没有有效预防和治疗的药物和疫苗。近年来,这种烈性传染病病毒传入我国的可能性不断加大,给我国公共卫生应急体系带来新的挑战。本研究针对埃博拉病毒的最主要结构蛋白——糖蛋白(GP),构建了重组原核表达载体pET28a(+)-GP1(33~313aa)、pET28a(+)-GP1(190~313aa)、pET28a(+)-GP2(502~632aa)、pET28a(+)-sGP,以及重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-edited GP、pcDNA3.1(+)-GP1、pcDNA3.1(+)-GP。结果表明,GP1(33~313aa)、GP1(190~313aa)和sGP能在大肠埃希菌BL21(DE3)中以包涵体的形式表达,GP、GP1和GP2能在HEK293T细胞中表达,但均不能在BHK21细胞中表达。本研究为进一步探索埃博拉病毒GP的结构和功能及GP抗体制备奠定了基础。     

埃博拉腺病毒-5载体重组疫苗在中国健康成人中的安全性和免疫原性

正到目前为止,所有用于试验的埃博拉病毒疫苗都是基于1976年扎伊尔暴发的病毒株。这里,作者旨在评估表达2014病毒流行株糖蛋白的基于腺病毒-5的新型重组型埃博拉载体疫苗的安全性及免疫原性。这项随机、双盲、安慰剂对照的一期临床试验在中国江苏省台州县开展。年龄18~60岁的健康成人被列入试验对象并用计算机生成的随机化区组(区组大小为6)进行随机化分组(2∶1),分别接受     

埃博拉病毒截短型糖蛋白GPdmucin的表达与纯化

目的:确定黏蛋白区缺失的埃博拉病毒包膜糖蛋白(GPdmucin)的最佳表达系统,并获得纯化的GPdmucin。方法:从埃博拉病毒的包膜糖蛋白(GP)全长基因上扩增GPdmucin序列,构建至pET32a、pFast Bac1和pcDNA3.4三种不同表达系统的质粒中,分别在原核、昆虫和哺乳动物表达系统中进行表达,并用特异抗体鉴定表达情况。结果:原核系统表达的GPdmucin不稳定,活性差;在昆虫表达系统中,GPdmucin在细胞内以不溶形式表达;利用Expi293瞬时蛋白表达系统,GPdmucin在哺乳动物细胞中可溶性表达,Ni柱亲和层析获得的目的蛋白纯度达90%以上,且与特异抗体具有很好的结合活性。结论:获得哺乳动物细胞表达系统表达的GPdmucin蛋白,将用于GPcl的制备、GP抗体筛选、疫苗效果评价及病毒致病机理的研究。     

用痘苗病毒天坛疫苗株做载体表达乙型肝炎病毒Adw亚型表面抗原

近几年,美国Moss和Paoletti等的实验室,成功地用痘苗病毒做载体,表达乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、流感病毒血凝素、单纯疱疹等基因。並且观察到,用含有HBsAg基因的重组痘苗病毒免疫的猩猩,对乙型肝炎病毒的攻击,有明显的保护作用。 我们用从美国Joklik实验室引进的、含痘苗病毒WR株Hind Ⅲ F片段的质粒p169,     

腺病毒载体在基因治疗和疫苗研究中的应用

自从二十世纪五十年代开始认识腺病毒(Adenovirus)以来,对腺病毒的生物学和免疫学特征已经有比较多的认识.腺病毒科包括禽腺病毒属(Aviadenovius)和哺乳动物腺病毒(Mastadenov irus)两个属.     

腺病毒载体在基因治疗和疫苗研究中的应用

自从二十世纪五十年代开始认识腺病毒（Adenovirus）以来,对腺病毒的生物学和免疫学特征已经有比较多的认识。腺病毒科包括禽腺病毒属（Aviadenovius）和哺乳动物腺病毒（Mastadenov irus）两个属。除人腺病毒以外,一些哺乳动物的腺病毒和禽腺病毒也成为基因治疗和载体疫苗研究的热点,如猪腺病毒3型（PAV-3）、牛腺病毒3型（BAV-3）、绵羊腺病毒（Ovine adenovirus,OAV）、禽腺病毒（Aviadenovirus）、犬腺病毒（Canine adeno virus,CAV）和黑猩猩腺病毒（Chimpanzee adenovirus）。不同种属的腺病毒虽然基因组序列完全不同,但其结构和功能却非常相似,而且各型腺病毒之间很少有交叉免疫反应,这就为利用这些腺病毒研制基因治疗载体和活载体疫苗提供了丰富的材料。近年来的研究也发现,如果利用一种腺病毒载体来进行重复免疫,宿主针对腺病毒载体蛋白的免疫反应比较强大,造成转基因表达时间缩短,重复免疫的效果较差,换用不同的病毒载体,则可以回避这种免疫反应,提高转基因的表达时间和保护性免疫反应。腺病毒可以感染很多分裂期或静止期细胞,即使在一些高度分化的组织细胞中也可增殖,如可有效的感染肌肉组织、心、肺和脑组织,并能高效的复制、表达其基因产物,因此腺病毒成为基因治疗和活病毒载体疫苗研究的首选工具。     

中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表达

在对中国鸡痘病毒疫苗株２８２Ｅ４基因组ＤＮＡ进行克隆与亚克隆的基础上,进一步插入Ｐ１１－ＬａｃＺ标记基因,根据蓝斑选择原理筛选出３个病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段,为了便于外源基因的插入,特将Ｐ７．５－Ｐ１１－ＬａｃＺ基因框转移至ＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴＳＫＭ１３－的Ａｐａｌ将ＭＣＳ－Ｐ７．５－Ｐ１１－ＬａｃＺ框切下,置入一个亚克隆的非必需片段中,构建成中国鸡痘病毒插入载体ｐＦＧ１１７５－１,以     

采用我国痘苗病毒天坛株载体表达单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D

木文从单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)基因组EcoRI H片段中分离出含有糖蛋白D(gD)基因的2.5kb DWA片段,插入带有痘苗病毒天坛株TK基因区段的pJC—2质粒p7.5k启动子的下游,转染TK~-143细胞,获得带有HSV-1 gD基因的重组痘苗病毒。采用HSV-1 gD单克隆抗体免疫胶体金技术进行电镜观察表明,重组痘苗病毒感染的细胞内有特异性HSV-1 gD抗原.重组病毒免疫家兔后6周可产生明显的HSV-1中和抗体。     

汉滩病毒囊膜糖蛋白G1、G2腺病毒载体的表达及免疫分析

为了研究利用腺病毒载体表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1、G2的可行性及免疫原性。通过克隆76-118株G1、G2基因至腺病毒表达载体pAdTrackCMV,得到阳性克隆padTrackCMV-G1、G2。PmeI线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAdeasy-1共转化BJ5183宿主菌,经同源重组后得到重组病毒rAdeasy-G1、rAdeasy-G2。重组病毒经PacI线性化后,脂质体介导转染293细胞,使重组病毒得到扩增。将重组病毒免疫Balb／c小鼠,并通过ELISA和间接免疫荧光对免疫小鼠血清进行了分析。结果表明,rAdeasy—G1组六只免疫小鼠、rAdeasy—G2组4只免疫小鼠均产生了能与汉滩病毒抗原发生反应的特异抗体。该研究为进一步研制以腺病毒为活载体的汉坦病毒工程疫苗奠定了基础。     

汉滩病毒囊膜糖蛋白G1、G2腺病毒载体的表达及免疫分析

为了研究利用腺病毒载体表达汉滩病毒囊膜糖蛋白G1、G2的可行性及免疫原性.通过克隆76-118株G1、G2基因至腺病毒表达载体pAdTrackCMV,得到阳性克隆pAdTrackCMV-G1、G2.PmeI线性化的阳性克隆与腺病毒骨架载体pAdeasy-1共转化BJ5183宿主菌,经同源重组后得到重组病毒rAdeasy-G1、rAdeasy-G2.重组病毒经PacI线性化后,脂质体介导转染293细胞,使重组病毒得到扩增.将重组病毒免疫Balb/c小鼠,并通过ELISA和间接免疫荧光对免疫小鼠血清进行了分析.结果表明,rAdeasy-G1组六只免疫小鼠、rAdeasy-G2组4只免疫小鼠均产生了能与汉滩病毒抗原发生反应的特异抗体.该研究为进一步研制以腺病毒为活载体的汉坦病毒工程疫苗奠定了基础.     

一种辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建及其在小鼠体内 …

腺病毒载体具有在离体细胞和动物体内高效转移和表达外源基因的优点,但由于第一代腺病毒载体能在靶细胞内表达病毒结构蛋白,并诱导机体的细胞和体液免疫反应,影响了大体内的稳定表达。为了克服这一缺点,构建了一种辅助病毒依赖型腺病毒载体ＨＡｄＩ－ｈＦＶＩＩＩ。该载体去除了病毒基因组的ｌ３、Ｌ１、Ｌ２、ＶＡＩＶＡＩＩ、ｐＴＰ等基因序列。在第一代重组病毒ＡｄＩ－ｈＦＶＩＩＩ辅助下,能在２９３细胞包装和扩增。经氯化