天花粉胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及DNA序列分析

从天花粉块茎中分离纯化的天花粉胰蛋白酶抑制剂ＴＴＩ是目前已知的最小的蛋白酶抑制剂,它属于南瓜族蛋白酶抑制剂家族;由２７个氨基酸残基组成,含三对二硫键。本文用ＰＣＲ方法扩增一特异探针;结合传统的筛库方法,从天花粉ｃＤＮＡ基因库中筛选到含ＴＴＩ基因的克隆,经序列测定,得到了ＴＴＩ的ｃＤＮＡ全序列。其读框编码区编码的是一个由６５个氨基酸组成的Ｐｒｅ－Ｐｒｏ－ＴＴＩ,Ｐｒｅ与Ｐｒｏ分别含有２４个和１４个氨基酸。由ｃＤＮＡ序列推论的氨基酸序列和已测定的氨基酸序列完全相同。     

草甘膦对微生物影响的研究进展

草甘膦是世界上应用最广、生产量最大的农业除草剂.它在节省劳动成本、提高农业生产效率、推动转基因农作物的发展等方面发挥了重要作用.随着草甘膦在环境中的不断积累,在越来越多的生物体内发现其残留.草甘膦对植物和微生物的作用机制相似,以微生物为工具研究抗草甘膦转基因农作物是目前研究热点,但有关草甘膦对微生物的生长繁殖及菌群演变...     

芦丁对胃蛋白酶部分性质的影响

采用紫外光谱和荧光光谱研究芦丁与胃蛋白酶的相互作用。实验结果表明,加入芦丁使胃蛋白酶的紫外吸收差谱迅速增强,特征荧光峰产生静态淬灭,并求得芦丁与胃蛋白酶作用的形成常数。     

组织胺对猪胃蛋白酶分泌的影响

組織胺能否引起胃蛋白酶的分泌,是一个多年来爭論未休的問題。Babkin,Gilman和Cowgill在狗身上进行的实驗表明:注射組織胺的初期,胃蛋白酶总輸出量和濃度都显著的增加,但是,随着胃分泌量和胃酸的增加,胃蛋白酶的总輸出量和濃度却很快地减少。因此他們认为組織胺不能引起胃蛋白酶的分泌。至于注射組織胺初期引起的胃蛋白酶增加,他們认为是泌酶腺管中原已存留的胃蛋白酶,随着胃分泌量的增加而被冲洗出来的緣故。Dj(?)rkman等在猫身上也获得了类似的結果。此外Alley又在狗身上观察到組織胺有抑制胃蛋白酶分泌的作用。     

葛根素对胃蛋白酶部分性质的影响

考察葛根素对胃蛋白酶的抑制作用,并通过紫外光谱法和荧光光谱法研究葛根素与胃蛋白酶的结合方式。以1/v对抑制剂量用Dixon作图法得出ki值为0.51×103mol/L,抑制剂类型为非竞争性抑制。葛根素与胃蛋白酶分子结合形成稳定缔合物,从而改变后者分子构象,使胃蛋白酶的紫外吸收差谱迅速增强,特征荧光峰产生静态淬灭。     

粪臭素对胰蛋白酶部分性质的影响

研究发现粪臭素对胰蛋白酶活性具有抑制作用。采用紫吸收法察到粪臭素使胰蛋白酶紫外吸收峰增强,采用荧光光谱法发现粪臭素对胰蛋白酶有很强的荧光淬灭作用。根据Stern-Volmer方程测得胰蛋白酶的表观猝灭常数Kq为2.72×1012L/mol.s。表明粪臭素对胰蛋白酶的荧光猝灭很可能是静态猝灭。     

一种改进的禽类线粒体DNA提取方法

介绍一种碱变性法从禽类脏器中提取大量线粒体DNA,比较了从不同脏器提取mtDNA的难易程度和得率。结果表明：肝脏、脾脏的匀桨操作易于心脏,且肝脏的得率高于心脏,更高于脾脏;同时对影响mtDNA产量和质量的匀桨速度和次数,差速离心速度,溶液Ⅱ中SDS含量及溶液pH值等因素进行了初步分析和探讨。在借鉴前人研究基础上对禽类脏器mtDNA提取方法上进行了改进和优化,建立了一种从禽类脏器中有效制备mtDNA的方法。结果表明,这种方法得到的mtDNA可以满足限制性酶切实验的要求。     

草甘膦对叶绿体能量转换的影响

除草剂草甘膦抑制植物叶绿体光合磷酸化活力,促进希尔反应活力,表现出明显的解偶联效应。它对叶绿体膜上腺三磷酶(ATPase)活力也起抑制效应,说明ATP合成被抑制不是由ATP酶活力变化所引起。这种解偶联现象主要是因光下质子转移受到抑制,在较低浓度的草甘膦影响下,先抑制质醌转移的质子进入膜内腔,浓度增加到20 mM,对水释放质子也有抑制。所以草甘膦对叶绿体能量转换的影响主要反映在质子转移被抑制,引起磷酸化活力受抑制。     

鳜鱼胰蛋白酶和淀粉酶与胃蛋白酶原基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR及RACE法,克隆得到鳜鱼(Siniperca chuatsi)肝胰脏胰蛋白酶(trypsin, Try)、淀粉酶(amylase, Amy)基因 cDNA全序列.结果表明,鳜鱼Try基因cDNA全长为896 bp,其中开放阅读框 (open reading frame,ORF)为744 bp,编码247个氨基酸. 序列同源性分析发现,鳜鱼Try与 斑马鱼(Danio rerio)、非洲爪蟾(Xenopus laevis)、 小鼠Try和人TRY氨基酸序列同源性分别为81.4%、75.3%、74.5%和71.4%.鳜鱼Amy 基因cDNA全长为1 647 bp,其中ORF为1 539 bp,编码512个氨基酸.鳜鱼Amy与斑马鱼 、非洲爪蟾、小鼠Amy和人AMY氨基酸序列同源性分别为79.7%、75.4%、71.9%和70.9%. 同时对鳜鱼基因组进行PCR,获得鳜鱼Try、Amy与胃蛋白酶原(pepsinogen, Pep)全基因组DNA序列.序列分析表明,鳜鱼Try基因由4个内含子和5个外显子组成,全长1 362 bp;鳜鱼Amy基因由8个内含子和9个外显子组成,全长4 267 bp;鳜鱼Pep基因由8个内含子和9个外显子组成,全长 4 032 bp,与其它脊椎动物基因结构相似.应用Genome walker方法在鳜鱼克隆得到长度分别为1 189 bp、413 bp和527 bp的Try、Amy和Pep基因的5′侧翼区序列以及1段长为704 bp的Pep 基因3′侧翼区序列,并利用相关软件预测其中具有多个可调节其表达的调控元件.鳜鱼Try、Am y和Pep基因组全序列的克隆及其序列、结构分析和分子系统进化等的研究,为鱼类消化代谢相关基因的生理功能及表达调控机理进一步研究提供依据.     

粪臭素对胃蛋白酶部分理化性质的影响

采用紫外光谱法和荧光光谱法研究了粪臭素与胃蛋白酶的结合作用。观测到粪臭素使胃蛋白酶的紫外吸收峰增强,特征荧光峰淬灭。Stern-Volmer淬灭曲线显示,粪臭素对胃蛋白酶的荧光淬灭很可能是一个单一的静态淬灭过程。     

胰蛋白酶抑制物对尼罗非鲫生长的影响

本实验研究了生、熟大豆中含有的胰蛋白酶抑制物(TI)对尼罗非鲫生长的影响。实验结果表明:沸水热处理不仅使生大豆中81.4％的TI失去活性,而且还显著地提高了大豆蛋白质系数,PER从1.12提高到1.76。当颗粒饲料的Tl含量低于0.9mg/g时,尼罗非鲫的生长正常;但高于此量吋,其生长速度明显降低。       

甲醇对胰蛋白酶催化活性影响的机理研究

为了探索甲醇影响胰蛋白酶催化活性的作用机理,将胰蛋白酶纯化到电泳纯的水平,用纯酶进行了催化动力学研究;测定了酶分子的紫外吸收光谱、紫外差示光谱和荧光发射光谱的变化.试验结果表明:胰蛋白酶经7%甲醇处理时,其比活力比对照提高了17.97%.经甲醇处理后的胰蛋白酶,其动力学参数Km值及Vmax值均得到提高,且Vmax提高幅度比较大.甲醇处理后,酶的紫外吸收光谱基本没有变化,其差示光谱出现明显的正峰和负峰,而其荧光发射光谱也基本不变,只是荧光强度有所增加.实验结果证明,在7%甲醇存在下,胰蛋白酶分子构型不变,酶活性的变化是甲醇引起酶分子构象改变的结果.     

草甘膦、乙草胺对日本三角涡虫摄食与再生的影响

研究了草甘膦和乙草胺对日本三角涡虫的急性毒性及其摄食与再生的影响.结果表明,草甘膦和乙草胺对日本三角涡虫的24和48 h LC₅₀分别为41.78和12.22 mg·L^-1、35.48和8.41 mg·L^-1.≥6.20 mg·L^-1的草甘膦和≥1.00 mg·L^-1的乙草胺对涡虫的再生影响显著（P<0.05）,且其影响均随处理时间的延长而逐渐减小;术后84 h,除1.40和2.00 mg·L^-1乙草胺处理外,其余浓度乙草胺和各浓度草甘膦处理的涡虫均完成再生.表明乙草胺对日本三角涡虫的急性毒性及其摄食与再生的影响均大于草甘膦.表明日本三角涡虫可作为监测草甘膦和乙草胺污染的指示生物.     

胰蛋白酶对红细胞膜生物物理特性的影响

通过胰蛋白酶作用于红细胞膜,造成红细胞膜不同程度的损伤,改变其膜的生物物理特性。采用新型激光衍射法测量了上述血样的弹性模量Ｅ和膜粘度μｍ。同时通过ＤＰＨ标记的萤光偏振法测定了这些红细胞膜的流动性,并采用ＭＳＬ标记的电子自旋共振波谱技术（ＥＳＲ）测量了红细胞膜蛋白构象的动态变化,对上述红细胞膜结构改变所引起的微观流变特性的变化进行了初步探讨。     

胰蛋白酶消化对菠菜叶绿体萤光影响的分析

用胰蛋白酶消化菠菜叶绿体,叶绿体的F_(684)相对萤光强度下降。在反应液中加入光系统Ⅱ的电子受体(DCIP或Fecy)和光系统Ⅱ的电子传递抑制剂—DCMU,可以改变叶绿体F_(684)的相对萤光强度,但不影响与胰蛋白酶消化有关的萤光强度下降。用不同波长的光(436nm和470nm)激发胰蛋白酶消化过的叶绿体,所测得的F_(684)变化、叶绿体中叶绿素含量变化以及吸收光谱变化的实验结果,说明用胰蛋白酶消化叶绿体后,使部分叶绿素从叶绿体上脱落,其中叶绿素b的脱落量较高。表明胰蛋白酶消化所诱导的萤光强度下降与色素蛋白复合体受损有关。     

草甘膦对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的毒性

【背景】草甘膦是一种灭生性除草剂,对防治多年生杂草效果明显。近年来,草甘膦被广泛用于防治鱼塘水生杂草,其对鱼类的安全性逐渐受到关注。【方法】采用半静态法测试了草甘膦对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的急性毒性,并计算出其对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的安全浓度。【结果】随着受试鱼苗在药液中暴露时间的延长,LG50值逐渐减小;草甘膦对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的96h LC50值分别为0．2518、0．2588和0．2599mg·L^-1;草甘膦对草鱼、鲢鱼和鲫鱼的安全浓度分别为0．0252、0．0259和0．0260mg·L^-1。【结论与意义】草甘膦对草鱼、鲢鱼和鲫鱼高毒,该结果对指导淡水养殖区杂草防除时科学使用草甘膦具有重要的实践意义。     

胰蛋白酶消化对菠菜叶绿体萤光影响的分析

用胰蛋白酶消化菠菜叶绿体,叶绿体的F_(684)相对萤光强度下降。在反应液中加入光系统Ⅱ的电子受体(DCIP 或Fecy)和光系统Ⅱ的电子传递抑制剂—DCMU,可以改变叶绿体F_(684)的相对萤光强度,但不影响与胰蛋白酶消化有关的萤光强度下降。用不同波长的光(436nm 和470nm)激发胰蛋白酶消化过的叶绿体,所测得的F_(684)变化、叶绿体中叶绿素含量变化以及吸收光谱变化的实验结果,说明用胰蛋白酶消化叶绿体后,使部分叶绿素从叶绿体上脱落,其中叶绿素b 的脱落量较高。表明胰蛋白酶消化所诱导的萤光强度下降与色素蛋白复合体受损有关。     

草甘膦对香附子及其他杂草的防治

香附子系莎草科多年生杂草,其地下部由根茎,基部鳞茎及块茎组成。因为香附子的主要繁殖器官是处于地下的鳞茎和块茎,所以只杀地上部难于根除。该草分布于北纬35°以南,在我国分布广、危害重,人工及机械防治收效微。国外对其分布、危害及防     

草甘膦对茶树叶片主要生化成分的影响

以金观音茶树为试材,将草甘膦定量施于栽培基质,通过观察叶片的表观药害,并采用超高效液相串联质谱方法测定草甘膦施用前(0天)和施用后(7天和33天)叶片中的农药残留(草甘膦及氨甲基膦酸)及生化成分(游离氨基酸、儿茶素和生物碱)的含量变化,从而科学地评估草甘膦的使用对茶叶质量安全的影响.结果表明:草甘膦施用33天,茶树叶片...     

不同固定液及保存温度、时间对小鼠组织DNA的影响

比较10％甲醛、95％乙醇、Saccomanno3种固定液及不同保存温度、保存时间对小鼠肝、肺组织DNA的影响。取材后将标本分为无固定液组、甲醛组、乙醇组和Saccomanno组,不同温度保存至一定时间后提取DNA进行比较。结果无固定液时,保存3d后,室温且与低温组差别不大。甲醛固定时,对不同保存温度、时间、不同组织的DNA影响不同。乙醇、Saccomanno法室温放置1个月后DNA仍保存良好。短时间室温保存对DNA影响不大。10％甲醛使DNA降解,95％乙醇、Saccomanno法固定则可以保护DNA的完整性。