槲皮素下调hTERT表达对肝癌HepG2细胞生长影响研究

目的观察槲皮素对肝癌HepG2细胞生长及对hTERT基因表达的影响。方法以台盼蓝拒染法计数肝癌细胞的生长抑制率,透射电镜从形态变化上了解凋亡的发生,流式细胞术检测细胞周期变化,western-blot、RT-PCR检测hTERT基因表达改变,PCR-TRAP法检测端粒酶活性。结果台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48h后的Ic50为25.5μm。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经10～20μm/L的槲皮素处理,肝癌HepG2细胞周期阻滞于G0/G1期,且HepG2细胞hTERT蛋白和mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制。结论槲皮素能抑制肝癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导HepG2细胞发生凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。     

JKA97诱导HepG2凋亡及其分子机制研究

目的:研究药物JKA97对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用及其分子机制.方法:采用MTT法观察药物JKA97对细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测线粒体融合蛋白mfn2表达水平变化.结果:药物JKA97抑制人肝癌细胞HepG2细胞增殖,5、10、20 μmol/L作用组24 h抑制率分别为34.26%、43.08%、54.02%;药物JKA97诱导人肝癌细胞HepG2凋亡,10、20 μmol/L JKA97作用HepG2细胞24h,细胞凋亡率分别为22.9%、72.9%;线粒体融合蛋白mfn2表达水平显著降低.结论:药物JKA97对人肝癌细胞HepG2生长具有明显的增殖抑制作用,诱导细胞凋亡;线粒体融合蛋白mfn2表达水平降低可能是其重要的分子机制之一.     

莫诺苷对人恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的调控机制

目的:探究莫诺苷对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖及凋亡的影响及作用机制。方法:将莫诺苷作用于A375细胞,采用MTT法测定细胞活力,Annexin-FITC/PI双染色流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western印迹检测细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果:与空白对照组比较,顺铂阳性药和高中低浓度莫诺苷均能明显抑制细胞增殖(P0.01),明显下调周期蛋白D1和凋亡因子Bcl-2的表达水平(P0.01或P0.05),明显上调P21和促凋亡因子Bax的表达水平(P0.01)。结论:莫诺苷能抑制人恶性黑色素瘤细胞增殖和促进其凋亡,其机制可能是通过下调周期蛋白D1和Bcl-2蛋白的表达水平,上调P21和Bax蛋白的表达水平,调控周期蛋白D1-CDK-P21通路及凋亡通路,从而促进恶性黑色素细胞的凋亡。     

无患子皂苷对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

为了探究无患子皂苷对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响。本研究采用不同浓度的无患子皂苷对Hep G2细胞进行处理,分别利用MTT法、流式细胞术、qPCR的方法检测细胞增殖、周期和凋亡情况以及NF-κB和Caspase3的表达情况。结果发现25μg/m L~100μg/m L的无患子皂苷分别作用12、24和36 h后,显微镜下发现细胞形态发生明显变化,MTT法检测发现细胞的增殖受到明显的抑制。无患子皂苷作用24 h后流式细胞术检测出现明显的凋亡峰,细胞周期阻滞在G0/G1期。qPCR检测发现随着皂苷浓度的提高,Caspase3的表达上调,而NF-κB的表达下调。以上结果说明无患子皂苷能够抑制人肝癌细胞HepG2的增殖并诱导其凋亡。     

NF-kB 拮抗剂PDTC 对HepG2 细胞的抑制及对caspase-3 表达的影响

目的:研究NF-kB拮抗剂PDTC诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对凋亡相关基因caspase-3表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法:以不同浓度的PDTC处理人肝癌HepG2细胞,利用MTT法检测对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响;利用RT-PCR和Western-blot检测caspase-3mRNA和蛋白的表达。结果:不同浓度PDTC作用人肝癌HepG2细胞不同时间后,能够显著抑制HepG2细胞的生长增殖,存在剂量和时间依赖性(P<0.05);PDTC能够上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。结论:NF-kB拮抗剂PDTC对人肝癌HepG2细胞产生显著抑制,并能上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。     

ASPP2增强结肠癌HCT116细胞对奥沙利铂的化疗敏感性

为研究ASPP2对奥沙利铂诱导的结肠癌细胞系HCT116 p53+/+(野生型)凋亡及周期的影响.利用ASPP2（rAd-ASPP2）及p53腺病毒（rAd-p53）感染HCT116 p53+/+细胞,经奥沙利铂50 μmol/L诱导细胞凋亡及周期改变.Western印迹检测ASPP2及p53的表达水平;MTT法检测ASPP2腺病毒对奥沙利铂诱导的HCT116细胞活性的影响;Calcein/PI吸收试验检测细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期分布. 结果显示,ASPP2、p53共同过表达,或者ASPP2单独过表达均能增强奥沙利铂诱导的HCT116 p53+/+细胞增殖抑制,以及S期抑制并伴有细胞凋亡水平的升高;而无奥沙利铂诱导时,ASPP2对HCT116 p53+/+细胞的活性、细胞周期及细胞凋亡水平的影响无统计学意义. 上述结果表明,ASPP2能够增强奥沙利铂诱导HCT116 p53+/+细胞的增殖抑制、细胞周期抑制和细胞凋亡.     

纳米银抑制肝癌HepG2细胞活力

目的探讨纳米银(AgNPs)对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的AgNPs处理肝癌HepG2细胞,采用细胞形态学观察及细胞活力测定(MTT法)来评价AgNPs对HepG2细胞体外增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布并检测细胞凋亡率。结果 AgNPs使细胞增殖活性降低,且呈浓度和时间依赖性,细胞呈凋亡形态改变;流式细胞仪检测到细胞凋亡,细胞平均凋亡率呈时间依赖性。AgNPs处理组S期细胞逐渐增多,而G0/G1、G2/M期细胞逐渐减少。结论 AgNPs抑制HepG2细胞生长,使HepG2细胞阻滞于S期,并诱导其凋亡。     

TGF-β信号通路抑制剂LY364947对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

该文旨在探讨抑制TGF-β信号通路对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞体外增殖、凋亡和侵袭能力的影响。使用不同浓度TGF-β信号通路抑制剂LY364947处理AML细胞系(KG1a、OCI-AML3)后,采用CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况; Western blot检测细胞周期调控因子Cyclin D1/p21、凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax以及上皮细胞间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和vimentin的表达; Transwell实验测定AML细胞迁移及侵袭能力的变化。结果显示:LY364947作用后,白血病细胞生长明显受抑制;细胞周期阻滞在G1期,伴有Cyclin D1表达下调和p21表达上调;细胞凋亡率增加,同时细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降,促凋亡蛋白Bax表达增高;细胞体外迁移和侵袭能力减弱。此外, E-cadherin表达增高, N-cadherin和vimentin表达下降。该研究结果提示,抑制TGF-β信号通路能够抑制白血病细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移及侵袭能力。     

溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD联合阿霉素抑制肝癌细胞HepG2生长

目的:研究溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD与阿霉素联合使用对肝癌细胞HepG2生长的影响。方法:MTT法检测经CD55-TRAIL-IETD-MnSOD与阿霉素联合处理后HepG2细胞生存率的变化,Hoechst33342染色及流式细胞术检测联合处理诱导细胞凋亡时细胞形态变化及凋亡细胞数量,Western印迹检测联合处理所引发的凋亡通路。结果:MTT实验显示,联合使用CD55-TRAIL-IETD-MnSOD和阿霉素能更有效地抑制HepG2细胞的生长,且阿霉素与CD55-TRAIL-IETD-MnSOD是协同作用;Hochest染色实验和流式细胞术实验结果均显示联合使用CD55-TRAIL-IETD-MnSOD和阿霉素增强了诱导细胞凋亡的作用;Western印迹表明CD55-TRAIL-IETD-MnSOD和阿霉素联合使用激活了Caspase细胞凋亡途径。结论:阿霉素能促进溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD的复制,联合阿霉素和溶瘤腺病毒CD55-TRAIL-IETD-MnSOD可更有效激活Caspase细胞凋亡通路,抑制肝癌细胞HepG2生长。     

survivin在二烯丙基二硫诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究survivin在二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导HepG2细胞凋亡中的作用。方法:MTT法检测细胞的生长活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测survivin mRNA水平;Western blot法检测survivin蛋白水平。结果:用药组HepG2细胞活性与正常组相比,随着药物浓度的增加(25,50,100,200μmol/l),分别下降了9．3%、10．4%、21．6%、31．2%,HepG2细胞凋亡率分别增加0．83%、1．97%、6．0%、9．9%,低浓度(25,50μmol/l)的DADS可以诱导survivin mRNA和蛋白表达升高,而高浓度的(100,200μmol/l)DADS可以降低survivin mRNA和蛋白表达。结论:DADS诱导HepG2细胞survivin表达增加,抵抗DADS诱导HepG2细胞的凋亡作用。     

香蜂草苷诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其作用机制

为了研究香蜂草苷对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响,并探讨其作用机制,利用MTT法检测香蜂草苷对HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,试剂盒检测caspase-3和caspase-9活性,Western blot检测Bcl-2、Bax、RKIP、ERK、p-ERK蛋白表达。实验结果表明香蜂草苷可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与提高caspase-3和caspase-9活性,上调Bax和下调Bcl-2表达有关。此外,我们的研究显示香蜂草苷诱导HepG2细胞凋亡可能还与其增加RKIP表达,抑制ERK/MAPK信号通路有关。     

青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制

目的:探讨青蒿素诱导人白血病细胞K562凋亡的线粒体机制.方法:用青蒿素处理K562细胞.通过MTT比色法检别细胞增殖抑制的效果;荧光显微镜观察细胞的凋亡;流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行细胞周期分析;Western-blotting测定药物作用前后线粒体、细胞浆细胞色素C的表达.结果:青蒿素抑制K562细胞的增殖,IC5D为1.5× 10-5mol·L-1;Hoechst33342/PI双荧光染色可观察到明显的核浓缩、凝集等细胞凋亡表现;流式细胞仪检测G2期细胞比例增高,S期减少;Western-blotting检测药物处理细胞后线粒体细胞色素C表达水平下调,细胞浆出现明显细胞色素C蛋白条带.结论:青蒿素可能通过线粒体细胞色素C途径诱导K562细胞凋亡.     

NF-kB拮抗剂PDTC对HepG2细胞的抑制及对caspase-3表达的影响

目的：研究NF-kB拮抗剂PDTC诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对凋亡相关基因caspase-3表达的影响,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法：以不同浓度的PDTC处理人肝癌HepG2细胞,利用MTT法检测对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响;利用RT-PCR和Western-blot检测caspase-3mRNA和蛋白的表达。结果：不同浓度PDTC作用人肝癌HepG2细胞不同时间后,能够显著抑制HepG2细胞的生长增殖,存在剂量和时间依赖性（P〈0.05）;PDTC能够上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。结论：NF-kB拮抗剂PDTC对人肝癌HepG2细胞产生显著抑制,并能上调HepG2细胞中caspase-3mRNA和蛋白的表达。     

Tagitinin D诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用机制研究

菊科植物肿柄菊中富含tagitinin D,该化合物具有较强的抑制肿瘤细胞的作用。本文研究了tagitinin D诱导HepG2细胞凋亡的作用机制。采用克隆形成实验检测细胞成瘤能力、流式细胞仪测细胞周期及凋亡,DCFH-DA探针测活性氧的水平及Western blot检测ER stress相关蛋白表达。结果表明,tagitinin D抑制细胞成瘤,将细胞周期阻滞在G2/M期,诱导细胞凋亡,使细胞内ROS积累,增加了ER stress伴侣蛋白PDI、Calnexin、Ero1-Lα、Bip的表达并激活了IRE1α和PERK信号通路。综上所述tagitinin D依赖于ROS途径激活ER stress诱导细胞凋亡。     

复方木鸡冲剂诱导人白血病细胞HL-60凋亡机制研究

目的:探讨复方木鸡冲剂诱导人白血病细胞HL-60细胞凋亡的作用和机制,为相关中药开发提供实验资料.方法:用MTT法检测复方木鸡冲剂对HL-60细胞增殖活性的影响,光镜下观察细胞形态的变化;流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡,并分析细胞周期;免疫细胞化学法检测Bcl-2、caspase-3、p21WAF1的表达.结果:MTT法显示复方木鸡冲剂能抑制HL-60细胞的生长,细胞呈凋亡形态学变化.流式细胞仪检测结果为细胞凋亡率明显增高,出现GO/G1期阻滞.Bcl-2表达降低,caspase-3表达增高,p21WAF1表达强阳性.结论:复方木鸡冲剂明显抑制HL-60细胞的生长,其抗肿瘤的机制与诱导肿瘤细胞凋亡、促进细胞分化有关.     

D609 对Neuro-2a 脑神经瘤细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨小分子化合物D609对脑神经瘤细胞Neuro-2a的生长抑制及诱导细胞周期阻滞的效应,并初步研究其机制。方法:采用CCK-8法检测D609对Neuro-2a细胞的生长抑制作用;利用流式细胞术(FACS)检测D609处理对细胞周期进程的影响;利用免疫印迹实验(Western blot)检测不同浓度的D609处理后,细胞裂解液中细胞周期蛋白抑制因子p27的表达水平。结果:CCK-8的实验结果显示,加入150μmol/L D609处理72小时后,细胞生长受到明显地抑制,且伴有剂量依赖效应;流式细胞术的结果表明,D609处理使细胞周期阻滞在G0/G1期;免疫印迹的结果表明药物处理提升了p27的表达,且随药物浓度升高其表达亦增强。结论:D609可以有效地抑制Neuro-2a细胞的生长;进一步研究表明药物处理可以提升p27的表达水平并可以诱导将细胞阻滞在G0/G1期。因此,此研究将为脑神经瘤的治疗提供借鉴。     

重楼皂苷Ⅰ对肝癌细胞的增殖及凋亡的影响

探讨重楼皂苷Ⅰ(paris saponinⅠ,PSⅠ)在体外对人肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响及相关机制.MTT法检测PSⅠ对肝癌SMM-C7721细胞株的增殖抑制作用,Hoechst 33528染色法观察细胞核的形态学变化,流式细胞术Propidium iodide(PI)染色检测细胞周期及凋亡的情况,免疫印迹的方法检测Fas、Bcl-2、Bax、细胞周期素D1(cell cycle regulatory factor D1,Cyclin D1)和细胞周期素E(cell cycle regulatory factor E,Cy-clin E)的表达情况.PSⅠ能时间和浓度依赖性的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).干预后的SMMC-7721细胞染色质浓缩,核碎裂,凋亡小体形成,呈典型的凋亡变化.细胞周期阻滞于G1期,并且有凋亡峰形成,呈浓度依赖性.PSⅠ能浓度依赖性地上调Fas和Bax的表达,下调Bcl-2、Cyclin D1和Cyclin E蛋白的表达水平.PSⅠ可能是通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制,从而抑制肝癌细胞的增殖.     

丹参酮通过VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌细胞迁移和侵袭能力的实验研究

目的:探究丹参酮通过VEGF/VEGFR信号通路抑制肝癌细胞迁移和侵袭能力的机制。方法:体外培养人肝癌细胞Hep3B、HepG2,并分为:实验组、阳性对照组和空白对照组,实验组使用丹参酮处理,阳性对照组使用阿霉素处理,空白对照为加入10μL DMSO或生理盐水,使用CCK8检测肝癌细胞的增殖情况;分别加入浓度为31μmol/L和2.5μmol/L的丹参酮及阿霉素显微镜下观察细胞形态变化;使用流式细胞术检测肝癌细胞的凋亡情况和细胞周期情况;使用Western blot检测肝癌细胞VEGF及VEGFR蛋白表达情况。结果:MTT实验结果显示,随着丹参酮和阿霉素使用浓度的升高人肝癌细胞Hep3B、HepG2生长受到显著的抑制(P0.05);显微镜下观察发现丹参酮可以抑制肝癌肿瘤细胞增殖;流式细胞检测发现相比空白对照组,阳性对照组和实验组(人肝癌细胞Hep3B、HepG2)细胞凋亡率显著增加(P0.05);相比空白对照组,实验组和阳性对照组G0/G1期细胞百分比显著增加(P0.05),S期和G2/M期细胞百分比显著降低(P0.05);蛋白质印记实验结果显示,相比空白对照组,实验组和阳性对照组VEGF及VEGFR蛋白表达显著降低(P0.05),且实验组表达显著低于阳性对照组(P0.05)。结论:参酮通可以通过抑制VEGF/VEGFR信号通路,将肝癌细胞分裂阻滞在G0/G1,达到抑制肝癌细胞的增殖及迁移和侵袭能力的效果。     

β榄香烯对人脑胶质瘤SHG44细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨中药提取物β-榄香烯对胶质瘤SHG44细胞增殖抑制作用及对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,并进一步探讨发生的机制。方法:用不同浓度的β-榄香烯对体外培养的SHG44细胞进行干预,分别采用MTT、流式细胞仪检测法,观察β-榄香烯对SHG44细胞增殖的抑制和凋亡诱导作用,并通过Western blot检测凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2蛋白表达情况。结果:经β-榄香烯处理SHG44细胞后,MTT结果其发现SHG44细胞生长受药物浓度和时间的影响,细胞生长明显被抑制,且(P0.05),流式细胞术显示,β-榄香烯诱导SHG44细胞后,细胞凋亡指数伴随药物作用时间的延长凋亡显著增加;Western blot结果发现,β-榄香烯对SHG44细胞的诱导后,使促凋亡蛋白Bax和抑凋亡蛋白Bcl-2与对照组相比发生了显著改变,且实验组Bax蛋白表达明显高于对照组,而抑凋亡蛋白Bcl-2的表达伴随β-榄香烯的作用时间的增加,表达也逐渐减少。结论:β-榄香烯能显著抑制胶质瘤SHG44细胞的增殖,促进其凋亡;其机制可能与调控Bcl-2和Bax表达有关。     

无花果叶超声提取物体外诱导肝癌HepG2细胞凋亡

为探讨新鲜无花果叶超声提取物(fig leaf extract,FLE)对体外培养的人肝癌细胞株HepG2增殖和凋亡的影响,用不同浓度FLE处理肝癌HepG2细胞.采用细胞形态学观察、细胞活力测定(MTT法)来评价FLE对HepG2细胞体外增殖的影响,应用凋亡相关蛋白caspase3和p53免疫组织化学法及流式细胞术的膜联蛋白V/碘化丙啶法(Annexin V/PI法)来检测细胞凋亡情况.形态学观察发现FLE处理24 h细胞出现明显凋亡,细胞增殖活力显著降低(P0.05或P0.01),流式细胞仪检测到FLE处理12 h所有剂量组细胞平均凋亡率均高于对照组(P0.05或P0.01),免疫组化结果显示caspase3表达增强(P0.05,P0.01),p53蛋白表达减弱(P0.05),以上作用效果呈现剂量依赖性.以上结果说明无花果叶提取物能够通过激活caspase3和p53诱导肝癌HepG2细胞凋亡从而抑制其体外的生长与增殖.