激光人工皱缩在囊胚玻璃化冻融周期中的临床应用价值

本研究探讨了激光人工皱缩在囊胚玻璃化冻融周期中的临床应用价值。通过回顾性分析2014年1月至2016年7月期间在广西壮族自治区人民医院生殖医学与遗传中心进行囊胚玻璃化冻融移植的449个周期,根据囊胚冷冻前是否进行激光人工皱缩分为激光人工皱缩组(n=193)和未皱缩组(n=256),比较两组的囊胚解冻复苏率、生化妊娠率、临床妊娠率、胚胎种植率、早期流产率、多胎妊娠率、活产率等临床结局指标。研究结果显示,激光人工皱缩组和未皱缩组的女方年龄、子宫内膜厚度、囊胚复苏率和平均移植胚胎数差异无统计学意义(P>0.05),激光人工皱缩组的生化妊娠率(63.21%)、临床妊娠率(56.99%)、活产率(50.78%)均高于未皱缩组的(49.41%,45.88%,39.23%)且差异有统计学意义(P<0.05)。本研究结果表明激光人工皱缩在囊胚玻璃化冻融周期中具有一定的临床应用价值,能够改善临床治疗结局。     

激光辅助孵化对冻融第三天胚胎囊胚培养后移植结局的影响

目的:探讨实施激光辅助孵化对冻融的第三天胚胎进行囊胚培养后移植妊娠结局的影响。方法:回顾性分析冻融第三天胚胎行囊胚培养和移植的542例患者的临床资料,其中164例接受激光辅助孵化(LAH组),378例没有进行激光辅助孵化(NLAH组),比较两组患者的胚胎种植率、着床率、临床妊娠率及流产率。结果:LAH组和NLAH组患者的年龄、不孕年限、体重指数、解冻胚胎数目、存活胚胎数目、移植胚胎数目比较均没有显著性差异(P0.05),LAH组的临床妊娠率高于NLAH组,流产率低于NLAH组,但差异无统计学意义(P0.05)。LAH组中≤30岁患者的着床率和临床妊娠率均高于NLAH组中≤30岁患者,而流产率则较低;LAH组≤30岁,30~34岁以及34岁患者的流产率均分别低于NLAH组,但差异均无统计学意义(P0.05)。结论:激光辅助孵化并没有明显改善冻融第三天胚胎囊胚培养后移植的临床结局。     

年轻POR女性拮抗剂方案与长方案的新鲜移植周期临床妊娠结局的比较分析

目的:比较分析拮抗剂方案与长方案对年轻卵巢低反应(POR)女性体外受精(IVF)新鲜移植周期临床妊娠结局的影响,以探讨拮抗剂方案的应用价值。方法:回顾性分析2014年1月至2017年6月在广东省妇幼保健院生殖中心行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的204例妇女213个IVF新鲜移植周期的临床资料。按随机数字表法分为拮抗剂组83例(84治疗周期)与长方案组121例(129治疗周期),比较两组一般资料、实验室资料、促排卵资料及妊娠结局的差异。结果:拮抗剂组的窦卵泡计数(AFC)、抗苗勒氏激素(AMH)水平、促性腺激素(Gn)使用天数、Gn总量、HCG日雌二醇(E2)水平、HCG日内膜厚度、移植日内膜厚度、获卵数、成熟卵子数及正常受精数低于长方案组,基础FSH/LH、Gn启动量高于长方案组(P0.05),但两组优质胚胎数、移植胚胎数、移植囊胚比例、冷冻胚胎数、胚胎种植率及早期自然流产率比较均无统计学差异(P0.05)。拮抗剂组和长方案组的临床妊娠率较高,分别为58.14%和63.10%,但是两组临床妊娠率比较无统计学差异(P0.05)。结论:给予年轻POR患者两种方案均可获得较满意的IVF新鲜移植周期临床妊娠结局,拮抗剂方案获卵数较长方案少,但是其优势在于Gn使用量更少,使用时间更短。     

极严重少弱精症患者的新鲜周期移植中卵裂球数目对妊娠结局的影响

目的:探讨极严重少弱精症患者的新鲜周期移植中卵裂球数目对妊娠结局的影响。方法:回顾性分析392个新鲜胚胎移植周期,这些胚胎根据移植天数分为第二天移植(Day2)组68周期和第三天移植(Day3)组324周期,其中Day2组根据卵裂球数分为3个(A组,3周期),3～5个(B组,57周期),5个(C组,8周期),Day3组根据卵裂球数分为7个(D组,33周期),7～9个(E组,242周期),9个(F组,49周期)。每个组又根据胚胎评级分为三个亚组,亚组1均为移植1～2级的胚胎(A1～F1),亚组2均为移植3～4级的胚胎(A2～F2),亚组3为一个1～2级和一个3～4级移植胚胎(A3～F3)。综合比较各组和相应亚组之间的种植率,临床妊娠率,流产率及活产率的差别。结果:①在day2组中,ABC三组的胚胎种植率,临床妊娠率,流产率及活产率均无统计学差异(P0.05)。在Day3组中,E组的胚胎种植率,临床妊娠率及活产率均高于D组,差异具有统计学意义(P0.05)。而D组和F组及E组和F组之间差异均无统计学意义。②在相同卵裂球数组中,不同的胚胎分级各亚组之间(如B1,B2,B3间)的胚胎种植率,临床妊娠率,流产率及活产率均无统计学差异。不同卵裂球数其相应的同一亚组之间(A1,B1,C1等)上述妊娠结局指标无统计学差异。结论:严重少弱精形成的胚胎优先推荐第二天卵裂球数为3～5个及第三天卵裂球数为7～9个的优质胚胎进行移植。     

冷冻胚胎移植周期中内膜形态及内膜厚度对妊娠结局的预测价值分析

目的:评价内膜厚度及内膜形态对于体外受精-胚胎移植中冷冻胚胎解冻复苏移植的临床妊娠结局的预测价值。方法:回顾性分析1521个冷冻胚胎解冻复苏移植周期,将患者按子宫内膜厚度分为4组,子宫内膜≤6 mm、6.1-8.0 mm、8.0-12 mm、12.0 mm,根据子宫内膜形态分为A型内膜、B型内膜、C型内膜。分别比较不同内膜厚度分组及不同内膜形态分组患者的年龄,移植胚胎数目、内膜准备方案构成比、移植胚胎类型(卵裂期胚胎、囊胚)构成比及各组间的临床妊娠率和活产率。采用ROC曲线分析子宫内膜厚度、形态对临床妊娠结局的预测价值。使用逐步回归分析内膜厚度、形态、年龄及移植胚胎类型与妊娠结局的相关性。结果:纳入1521个解冻复苏周期中按内膜厚度分为4组,各组周期数分别为96周期、454周期、893周期、78周期,各组间平均年龄分别为34.1±5.5岁、33.3±5.4岁、32.5±5.2岁、33.7±6.0岁(P0.05)。内膜厚度≤6 mm组临床妊娠率为31.3%,子宫内膜≤6mm、6.1-8.0 mm、8.0-12 mm、12.0 mm组临床妊娠率分别为48.5%、51.8%、47.4%(P0.05)。子宫内膜≤6 mm、6.1-8.0 mm、8.0-12 mm、12.0 mm组间活产率分别为18.8%、37.7%、44.6%、39.7%(P0.05)。A型、B型及C型内膜组周期数分别为920周期、189周期及412周期,三组间平均年龄分别为32.3±5.1、33.0±5.7、34.2±5.5岁(P0.05)。A型/B型及C型内膜组临床妊娠率分别为51.2%、46.6%及46.4%,三组间活产率分别为42.1%、36.0%及37.1%,三组间差异无统计学意义(P0.05)。子宫内膜厚度ROC曲线下面积为0.534(95%可信区间0.505-0.564),子宫内膜形态ROC曲线下面积为0.526(0.476-0.955)。逐步回归分析纳入内膜厚度、内膜形态、年龄、胚胎类型4个可变量,女方年龄(OR=0.929,P0.001),移植胚胎中囊胚比例(OR=1.595,P0.001)与临床妊娠率明显相关,内膜厚度(OR=1.054,P=0.05)及内膜形态(OR=0.864)与临床妊娠率无相关性。结论:虽然子宫内膜薄临床妊娠率下降,但是子宫内膜厚度与内膜形态不能够预测体外受精-胚胎移植解冻复苏周期临床妊娠率,患者年龄以及移植胚胎的发育潜能才是预测临床妊娠率的参考指标。     

冻融胚胎移植中三种不同内膜准备方法的妊娠结局比较

目的：比较三种不同内膜准备方法中复苏胚胎移植的妊娠结局。方法：对因女方输卵管因素不孕的248个冻融囊胚移植周期的临床资料进行回顾性分析。将内膜准备方法分为自然周期组、全激素替代周期组和半激素替代周期组三种,分别对各组的着床率、临床妊娠率、生化妊娠率和早期流产率进行分析比较。结果：自然周期组的子宫内膜厚度显著高于全激素周期组和半激素替代周期组（P〈0．05）,差异有统计学意义。而这三组病人在年龄、不孕年限和移植胚胎数目上则均无明显差异（P〉0．05）。另外,三种内膜准备方法的着床率、临床妊娠率、早期流产率及生化妊娠流产率亦无显著性差异（P〉O．05）。结论：冻融胚胎移植中,对于排卵正常患者我们建议采用自然周期法更为经济、方便。而对于月经周期不正常,排卵障碍的病人应依实际情况采用全激素周期或半激素周期方案。     

小鼠胚胎徒手分割技术的研究

目的　研究不同分割液和分割前胚胎去致密化与否对昆明白系小鼠的桑椹胚和囊胚的徒手分割以及分割后胚胎移植的影响。方法　在mPBS、1 2 5 %蔗糖液和进口分割液三种不同分割液中对桑椹胚和囊胚进行徒手分割。结果和结论　在蔗糖液与进口分割液中分割桑椹胚 ,成功率显著高于mPBS处理组 (6 9 5 3%、77 4 0 %vs5 6 82 % ) (P <0 0 5 ) ,而半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三组差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;在蔗糖液与进口分割液中分割囊胚 ,分割后半胚培养的囊胚发育率显著高于mPBS处理组 (72 38%、74 2 9%vs 5 6 2 0 % ) (P <0 0 1 ) ,而分割成功率及囊胚细胞数三组差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;各处理组半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数都显著低于对照组体外培养桑椹胚的囊胚发育率 (98 70 % )和囊胚细胞数 (6 3 6 7± 5 78) (P <0 0 1 ) ;桑椹胚经去致密化处理后分割 ,其分割成功率显著高于未处理组 (82 90 %vs 5 6 6 0 % ) (P <0 0 1 ) ,处理组半胚培养的囊胚发育率也显著高于未处理组 (73 80 %vs 4 6 80 % ) (P <0 0 1 ) ;共移植 1 4 2枚 2分胚形成的囊胚移植于 1 1只受体 ,其中 3只妊娠 ,分别产仔 2只、3只和 4只     

体外受精-胚胎移植412个周期分析

IVF-ET(in vitro fertilization and embryo transfer)的临床妊娠率受多种因素的影响:妇女年龄,子宫内膜厚度,促性腺激素(Gonadtropin,Gn)的用量,移植胚胎数以及胚胎质量。回顾性分析本生殖中心2000年9月到2002年7月的IVF/ICSI(intra cytoplasmic sperm injection)共412个周期。并将所有周期按照年龄分成3组,随年龄的增长3组的妊娠率分别是42.31％、33.70％、28％;子宫内膜的厚度与临床妊娠率无显著性相关;促性腺激素的用量与临床妊娠率呈负相关(P<0.05);移植胚胎数及优质胚胎数与临床妊娠率呈显著性正相关(P<0.05)。     

移植胚胎数目对高龄不孕患者IVF-ET结局的影响

目的:探讨移植胚胎数目对高龄不孕患者IVF-ET结局的影响.方法:根据移植胚胎个数将年龄超过35岁的不孕患者338个周期分为单胚胎移植组(Ⅰ组),2个胚胎移植组(Ⅱ组),3个胚胎移植组(Ⅲ组).分析患者IVF治疗情况并按年龄分层比较三组患者的IVF-ET结局.结果:高龄不孕患者行IVF,随年龄增加,获卵数、优质胚胎率和临床妊娠率降低,流产率呈增高趋势.Ⅰ组的妊娠率9.43%,显著低于Ⅱ组(24.24%)和Ⅲ组(31.37%)(P＜0.05).对于40岁以下的患者,移植3个胚胎的妊娠率与移植2个胚胎差无异,但显著高于移植1个胚胎(P＜0.05).增加40岁以上患者移植胚胎的数目,妊娠率未出现有统计学意义的升高.三组的胚胎种植率分别为9.43%,12.12%和12.2%,无统计学差异.Ⅲ组中多胎率12.5%(6/48),其中35～36岁年龄段多胎率16.67%(5/30).结论:高龄不孕患者可移植的胚胎数目随年龄增加和获卵数目降低而降低.其中较年轻者(35～36岁年龄段),移植3个胚胎,对妊娠率提高无明显效果,但多胎发生显著增加.     

桂科Ⅰ号成年公猪体细胞核移植胚胎的体外生产

目前,关于桂科Ⅰ号猪体细胞核移植胚胎体外发育的研究尚未见报道。本研究结果表明,桂科Ⅰ号成年公猪来源的皮肤成纤维细胞(adult boar fibroblast cell,ABFC)和刚出生小公猪来源的皮肤成纤维细胞(newborn boar fibroblast cell,NBFC)对体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎的体外发育没有明显影响;在体外环境培养下,一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂—Scriptaid(SCR)对桂科Ⅰ号公猪SCNT胚胎的囊胚率具有促进作用。研究进行3个实验,实验一结果表明,细胞呈现典型的成纤维细胞形态,且生长呈现S型;实验二结果表明,通过将ABFC与NBFC注射到去核的卵母细胞制作SCNT胚胎,ABFC和NBFC来源的桂科Ⅰ号公猪SCNT胚胎的融合率、分裂率、囊胚率和囊胚细胞数没有明显的差异(53.2%vs 61.7%,p0.05;72.3%vs 75.7%,p0.05;11.9%vs 11.7%,p0.05;60.7 vs 57.5,p0.05);实验三结果表明,通过500 nmol/L SCR处理ABFC来源的SCNT胚胎,与对照组相比,处理组的分裂率和囊胚细胞数没有明显的差异(82.6%vs 80.1%,p0.05;42.9 vs 41.4,p0.05);但添加500 nmol/L SCR的ABFC来源的SCNT胚胎的囊胚率明显比对照组的高(21.6%vs 11.5%,p0.05)。数据表明桂科Ⅰ号成年公猪体细胞可作为供体细胞生产克隆胚胎,并且在体外环境培养下,通过500 nmol/L SCR处理极大地提高克隆胚胎的囊胚率,本研究可为下一步生产存活的桂科Ⅰ号SCNT猪奠定基础。     

评价两种消毒剂对IVF实验室微环境和妊娠结局的影响

目的 在辅助生殖体外受精（IVF,in vitro ferrtization）实验室的胚胎操作过程中,根据消毒剂对胚胎质量和妊娠结局的影响,评价季铵盐消毒剂是否比75%酒精消毒液更适合用于IVF实验室。方法 回顾分析2016年1月至9月在我中心行的619例新鲜移植周期,根据IVF实验室使用的消毒剂不同分为两组,A组383例为使用75%酒精消毒组,B组236例使用季铵盐组。对比两组的VOC浓度、获卵数、获卵率、受精率、多精率、卵裂率、优质胚胎率、优质囊胚形成率、着床率、临床妊娠率以及流产率。结果 相比于A组,B组的VOC浓度显著降低;A、B两组的获卵数、获卵率、受精率、多精率、卵裂率、优质胚胎率、优质囊胚形成率和流产率均不具有统计学差异（P＞0.05）;但B组的着床率和妊娠率显著高于A组（P<0.05）。结论 两组对胚胎的体外培养质量没有显著性的影响,但使用季铵盐组相比于75%酒精组胚胎着床率和妊娠率显著提高。因此,季铵盐消毒剂比75%酒精更适合作为IVF实验室消毒剂。     

小鼠休眠胚胎与正常胚胎冻融后体内外发育潜力的比较

目的检验小鼠休眠胚胎冻融后的质量及体内外发育潜力,为胚胎休眠技术的生产应用提供必要的参考。方法采用常规冷冻方法将正常孵化期胚胎和休眠胚胎进行冷冻,之后分别进行体外复苏培养实验和胚胎移植实验。随后利用双重荧光染色的方法分别对冻融前后的小鼠休眠胚胎与正常孵化期胚胎进行细胞计数,观察两种胚胎冻融前后的质量变化。结果休眠胚胎的冷冻解冻回收率、发育率均极显著高于孵化期胚胎(72.1%vs 50.2%,P<0.01;94.2%vs 73.9%,P<0.01)。休眠胚胎的移植妊娠率显著高于孵化期胚胎(40.8%vs 30.1%,P<0.05)。休眠胚胎的内细胞团细胞数显著高于孵化期胚胎(27.83 vs 19.53,P<0.05),滋养层细胞数差异不显著。冻融培养后休眠胚胎的内细胞团数,滋养层细胞数均显著高于孵化期胚胎(25.18 vs 14.68,P<0.05;114.09 vs 73.88,P<0.05)。结论小鼠休眠胚胎冻融后胚胎质量及体内外发育潜力均优于小鼠正常孵化期胚胎。     

体外受精-胚胎移植技术妊娠后流产的危险因素分析

目的:探讨体外受精-胚胎移植技术妊娠后流产的危险因素。方法:采用t检验、受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC曲线)以及二元Logistic回归分析分别对2015年1月至2017年12月我中心行体外受精-胚胎移植技术(In vitro fertilization and embryo transfer,IVF-ET)及卵胞浆内单精子注射技术(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)后妊娠的242例临床妊娠患者临床参数包括年龄、身体质量指数(Body mass index,BMI)、基础卵泡生成素(Follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(Luteinizing hormone,LH)、雌二醇(Estradiol,E2)水平、促性腺激素(Gonadotropins,Gn)总用量、Gn天数、人绒毛膜促性腺激素(Human choionic gonadotophin,HCG)日LH、E2、黄体酮(progesterone,P)水平、移植日子宫内膜厚度以及移植后14-16天血HCG浓度进行回顾性分析。结果:流产组与继续妊娠组年龄、移植后14-16天血HCG浓度分别31.44±4.40岁和29.59±3.94岁、396.96±377.66 IU/L和702.85±496.91 IU/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。通过ROC曲线对各临床参数分析后求得各参数的cut-off值并以此为标准分组,结果显示不同年龄(29.41%和9.42%)以及移植后14-16天血HCG浓度(4.20%和22.76%)分组流产率比较差异具有显著的统计学意义(P<0.01)。二元Logistic回归分析上述参数与流产率的相关性,结果提示仅年龄、移植后14-16天血HCG水平与妊娠后流产率有显著相关性(P=0.01,P=0.001)。结论:年龄>33岁、移植后14-16天血HCG浓度≤582.6IU/L是IVF/ICSI妊娠后流产的独立危险因素,对此类患者进行治疗时应考虑到其流产的风险并提前采取预防措施避免不良妊娠结局。     

无创胚胎染色体筛查技术在单囊胚冻胚复苏移植中的应用价值及其活产结局的因素分析

摘要 目的：探讨无创胚胎染色体筛查技术（NICS）在单囊胚冻胚复苏移植中的应用价值,分析影响活产结局的因素。方法：回顾性分析2019年1月至2021年12月我院收治的197例行单囊胚冻胚复苏移植患者的临床资料,53例行NICS检查且检测结果提示囊胚染色体拷贝数正常（NICS组）,26例NICS检测结果异常予以排除,118例未接受NICS检测（非NICS组）。收集临床资料并追踪妊娠结局,根据妊娠结局将患者分为活产组（75例）和非活产组（96例）,采用单因素及多因素Logistic回归分析影响单囊胚冻胚复苏移植活产的因素。结果：NICS组活产率高于非NICS组（P＜0.05）。单因素分析显示活产组女方年龄小于非活产组（P＜0.05）,基础卵泡雌激素（FSH）水平、常规试管婴儿（IVF）周期≥2个低于非活产组（P＜0.05）,优质胚胎数、移植日子宫内膜厚度和NICS检查比例、发育成囊胚时间为D5比例高于非活产组（P＜0.05）。多因素logistic回归分析显示女方年龄偏大、发育成囊胚时间为D6是影响单囊胚冻胚复苏移植活产的危险因素（P＜0.05）,NICS检查是其保护因素（P＜0.05）。结论：NICS筛查胎儿染色体异常可提高单囊胚冻胚复苏移植活产率,产妇高龄和囊胚发育速度过慢是影响活产的主要危险因素。在单囊胚冻胚复苏移植前有必要进行NICS检查,并尽量选择D5囊胚以提高活产率。     

源自睾丸精子冻融胚胎卵裂球完整性及恢复卵裂对生育结局的影响

目的:探讨源自睾丸活检或睾丸显微取精形成的胚胎冷冻复苏后卵裂球完整性及是否恢复卵裂与生育结局的关系。方法:回顾性分析658个冻融胚胎移植(FET)周期,根据精子来源将其分为手淫精子组(ICSI组)445周期,睾丸活检或睾丸显微取精组(TESA组)213周期。ICSI组根据复苏2枚胚胎后完整个数(0、1、2枚)分为3组(A、B、C组),TESA组也据此分为D、E、F组。ICSI组根据2枚胚胎复苏后恢复卵裂个数(0、1、2枚)分为3组(G、H、I组),TESA也据此分为J、K、L组。综合比较各组之间的生育结局。结果:①ICSI组与TESA组复苏后胚胎完整率、复苏18-20 h后胚胎卵裂率、种植率、临床妊娠率、活产率、分娩孕周及出生体重比较差异无统计学意义(P0.05)。但ICSI组早期流产率显著高于TESA组。②ICSI中B组与C组上述妊娠结局指标比较差异无统计学意义(P0.05),但种植率、临床妊娠率、活产率均显著高于A组(P0.05)。TESA三个亚组比较无统计学差异(P0.05)。ICSI与TESA组间比较差异无统计学意义(P0.05)。③ICSI中I组种植率、临床妊娠率、继续妊娠率均显著高于H组(P0.05),且I组与H组均显著高于G组(P0.05)。I组活产率显著高于G组和H组(P0.05)。TESA中L组种植率、临床妊娠率、继续妊娠率、活产率均显著高于J组(P0.05)。ICSI与TESA组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:尽管睾丸活检或睾丸显微取精的精子质量较差,但一旦形成有效胚胎,FET结局与手淫精子来源的胚胎并无差异。至少移植一枚完整胚胎较移植两枚均破损胚胎具有更好的生育结局。至少移植一枚恢复卵裂的胚胎较两枚均不卵裂胚胎具有更好的生育结局。解冻后无完整胚胎且过夜培养后又均未恢复卵裂的胚胎应慎重考虑该周期是否取消移植。     

实验兔胞内单精子注射技术

目的 建立实验兔胞内单精子注射技术(intracytoplasmic sperm injection,ICSI).方法 实验1比较了hCG注射后不同取卵时间对ICSI胚体外发育的影响.实验 2 比较了不同的激活方式对ICSI胚体外发育的影响.实验 3 比较了不同状态的兔精子ICSI胚胎体外发育结果.结果 (1)hCG注射后14 h取卵,其卵裂率、桑椹胚率和囊胚率(82.2%、72.9%和62.2%)都比16 h(75.9%、70.0%和53.3%)的高,但是差异无显著性(P>0.05);18 h取的卵注射后不能卵裂.(2)机械刺激组和离子霉素 6-DMAP组,ICSI后其卵裂率分别为82.2%和81.1%(P>0.05),桑椹胚率分别为72.9%和66.2%(P>0.05),囊胚率分别为51.3%和62.3%(P<0.05),机械刺激组和离子霉素组之间卵裂率和桑椹胚率差异无显著性,但是囊胚率差异有显著性.(3)新鲜精子组和冻融活精子组卵裂率(81.1%和68.8%)和囊胚率(62.3%和40.4%)差异有显著性(P<0.05),而桑椹胚率(66.2%和61.9%)差异无显著性(P>0.05).结论 精子冷冻前后,通过ICSI所得的桑椹胚均能孵化,表明已初步建立了实验兔的ICSI技术.     

卵丘细胞核移植技术生产克隆牛犊

分别以短期培养的5头牛卵丘细胞(1~5 BCC)为细胞核供体, 共用1188枚体外成熟的去核卵母细胞构建了931枚重构胚(78.4%).体外培养后,763枚(82%)发育至2-细胞期,627枚(67.3%)发育至8-细胞期,最后获得囊胚275枚(29.5%).囊胚的平均细胞数为124±24.5 (n = 20).分析不同个体来源的卵丘细胞,同一个体卵丘细胞饥饿与否以及饥饿时间的长短、融合后核/质相容时间(融合到激活的时间长短)等因素对核移植效率的影响发现,5个个体的体细胞核移植囊胚率(14.1%,45.2%,27.3%,34.3% vs 1.5%)有显著差异(P<0.05).同一供体细胞饥饿与否(47.1% vs 44.4%)、饥饿11~12 d (52.5%)和18~19 d (41.6%)均不影响核移植囊胚率(P≥0.05).核/质相容2~3 h的囊胚率(20.3%)显著低于3~6 h组(31.0%,P<0.05). 3~6 h范围内,囊胚率无差异(P≥0.05).其中63枚冷冻的核移植囊胚解冻后移植给31头受体牛,妊娠4例,最后顺利获得2头克隆牛犊.结果表明,牛卵丘细胞饥饿不是核移植成功的关键因素,核质相容程度和供体细胞的个体差异对核移植效率有一定影响.卵丘细胞能够获得全程发育的克隆牛犊.     

绵羊体细胞核移植去核前程序的优化

目前绵羊体细胞克隆效率仍然很低,本研究拟对去核前的操作环节进行优化。主要为卵巢保存时间(3 h和3–5 h)、卵母细胞体外成熟时间(18 h和24 h)、供核细胞贴壁率(10%和30%)和盲吸法去核时间(16 hpm和18 hpm)等4个方面优化。以成熟率、融合率和重构胚胎发育能力作为评价参数。结果表明:在卵巢保存方面,卵巢保存3 h组卵母细胞成熟率显著高于3–5 h组卵母细胞成熟率(60.18%vs 52.50%)(P0.05),重构胚胎发育力差异不显著(P0.05);在体外成熟时间方面,体外成熟18 h组和24 h组卵母细胞成熟率差异极显著(53.81%vs 89.06%)(P0.01),胚胎发育力差异不显著(P0.05);在融合率方面,贴壁率30%组极显著高于贴壁率10%组(80.85%vs 57.69%)(P0.01),在克隆胚胎发育率方面没有显著差异(P0.05),具有贴比率差异性的细胞在细胞生长平台期表现出差异性;在去核时间方面,16 hpm组和18 hpm组胚胎卵裂率差异显著,囊胚发育力差异不显著(P0.05),16 hpm组获得一只克隆羊,重复16 hpm获得4只妊娠克隆羊。组织微卫星序列经SDS-PAGE分析,DNA指纹与供体细胞相同。结论:去核前程序的优化保证了材料的质量,为提高克隆胚胎数量和质量奠定基础,可以获得体细胞克隆羊。     

子宫内膜容受性检测技术在反复种植失败患者冻融胚胎移植中的应用价值及其临床妊娠的影响因素分析

摘要 目的：探讨子宫内膜容受性检测（ERT）技术在反复种植失败患者冻融胚胎移植（FET）中的应用价值,并分析其临床妊娠的影响因素。方法：回顾性分析2019年10月~2022年4月期间海南省妇女儿童医学中心收治的150例反复种植失败患者的临床资料,根据是否接受ERT技术分为ERT组（n=78,接受ERT技术）和无ERT组（n=72,未接受ERT技术）。按照反复种植失败患者是否临床妊娠分为临床妊娠组和未临床妊娠组。采用单因素和多因素Logistic回归模型分析临床妊娠的影响因素。结果：两组异位妊娠率组间对比未见统计学差异（P>0.05）。ERT组临床妊娠率、活产率高于无ERT组,移植日内膜厚度大于无ERT组,移植胚胎数少于无ERT组,流产率低于无ERT组（P<0.05）。所有患者按照是否临床妊娠分为临床妊娠组（n=85）和未临床妊娠组（n=65）。单因素分析结果显示：临床妊娠与年龄、移植胚胎类别、移植胚胎数量、总周期数、FSH、子宫内膜厚度、子宫内膜类型有关（P<0.05）,而与体质量指数（BMI）、不孕年限、不孕类型、胚胎冷冻保存时间无关（P>0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：年龄偏大、FSH偏高是临床妊娠的危险因素,而移植胚胎类别为囊胚、移植胚胎数量偏多是临床妊娠的保护因素（P<0.05）。结论：ERT技术用于反复种植失败患者FET中,可有效改善患者的临床妊娠。年龄、FSH、移植胚胎类别、移植胚胎数量是临床妊娠的影响因素。     

丙种球蛋白在抗磷脂综合征所致复发性流产中的应用

目的:探讨静脉注射丙种球蛋白(IVIG)治疗抗磷脂综合征(APS)所致复发性流产的临床疗效,比较IVIG与传统治疗及阿司匹林 强的松 潘生丁治疗APS所致复发性流产的疗效差异.方法:248例APS所致复发性流产患者,随机分为4组;组1:传统保胎治疗(54例,黄体酮 HCG等);组2:阿司匹林 强的松 潘生丁(84例);组3:IVIG(38例);组4:阿司匹林 强的松 潘生丁联合IVIG(72例).观察疗效、妊娠结局、不良反应及妊娠并发症.结果:MG组(79.76%)与阿司匹林 强的松 潘生丁组(73.68%)妊娠成功率相比,差异无显著性(P＞0.05),此二组与传统保胎治疗组(18.52%)妊娠成功率相比,差异有显著性(P＜0.05).联合用药组(95.83%)妊娠成功率与其它三组相比,差异有显著性(P＜0.05).任意两组妊娠并发症无显著差异(P＞o.05).结论:阿司匹林 强的松 潘生丁联合IVIG治疗APS所致复发性流产,妊娠成功率较高,并发症无明显增加.