胰酶液在果蝇唾腺染色体制片中的应用

用黑腹果蝇的三龄幼虫作制备唾腺染色体的材料,由于其唾腺小,周围粘有脂肪体,较难去除,很容易把唾腺弄碎;而脂肪体的存在,又影响压片时唾腺染色体的展开。我们发现,用胰酶液对唾腺预处理,易制得理想的压片。现将此法介绍如下: 1.剖取唾腺在载玻片上滴一滴0.7％氯     

中国D.virilis果蝇唾腺染色体的初步观察

果蝇的唾腺染色体是一种由数千条核蛋白纤维丝形成的一束巨大染色体。唾腺染色体上呈现出许多染色深浅不同、粗细各异的横纹,清晰可辨。正是这些横纹,代表了不同基因的分布。横纹的宽窄、疏密程度以及排列顺序和数目都具有种的特异性。 果蝇D.virilis属于Drosopbila亚属,Virilis种胁种群中的体型较大的黑色种,体长约     

中国D. virilis果蝇唾腺染色体的初步观察

果蝇的唾腺染色体是一种由数千条核蛋白 纤维丝形成的一束巨大染色体。唾腺染色体上 呈现出许多染色深浅不同、粗细各异的横纹，清 晰可辨。正是这些横纹，代表了不同基因的分 布。横纹的宽窄、疏密程度以及排列顺序和数 目都具有种的特异性。     

多线染色体制片法

多线染色体是一种巨大染色体。由于它存在于一些双翅目昆虫幼虫(如摇蚊幼虫、果蝇幼虫)的唾腺细胞中,所以又称为唾腺染色体。实际它不只存在于唾腺细胞,也存在于其     

果蝇唾腺染色体制片技术的改进

观察果蝇唾腺细胞染色体,是高中生物学中的一个主要实验。通过实验使学生对遗传物质的载体——染色体有一个感性认识。虽然在许多书刊上较详细地介绍了果蝇唾腺染色体装片的制作方法,但许多中学教师仍感到困难。主要问题是染色体成团,染色体的臂伸展不开,影响实验效果。为此我们进行了多方面的实验探索,以三龄幼虫低温冷冻方法效果较好,现     

果蝇唾腺染色体的几种染色方法比较

《生物学通报》编委 :您好。笔者对贵刊 2 0 0 2年第 37卷第 2期第 2 3页刊登的“用 Feuglen染色法制作果蝇唾腺染色体”一文感兴趣 ,但笔者认为文中几处不妥 ,比如 1)水浴温度波幅偏高 ;2 )染色时间不确定 ;3)试剂配方不全 ;4 )盐酸的浓度单位有误 ,mol?M?;5 )注意事项影响实验结果表述不清。特撰写下文与各位读者商榷。双翅类昆虫如黑腹果蝇 (Drosophila melanogaster)的唾腺染色体 (Salivary chromosome)比普通染色体大的多 ,处于体细胞同源染色体的配对状态 ,是由于唾腺染色体经过多次复制而并不分开形成的 ,大约有 10 0 0～4 0 0 0根…     

用Feuglen染色法制做果蝇唾腺染色体

制作果蝇唾腺染色体通常以改良苯酚品红或醋酸洋红为染色剂 ,这些常规方法存在 1个共同的弊病 ;染色体被着色的同时 ,细胞质也着色较深 ,染色体与其背景形成的反差很小 ,不利于显微摄影。为此笔者改变传统方法用 Feuglen染色法对果蝇唾腺染色体进行染色制片 ,收到了良好的效果。1　方法和步骤1)将盛有 1mol盐酸的小烧杯置于 6 0℃的恒温水浴中 ,待用 ;2 )取较肥大的果蝇三龄幼虫 ,置于滴有 0 .85 %生理盐水中 ,在解剖镜下剖出唾腺 ;3)弃去杂物 ,剔除唾腺上的脂肪 ;　　 4 )将唾腺小心移至 1mol盐酸的恒温小烧杯中 ,2 0～ 30 s;5 )取出唾腺 …     

果蝇唾腺染色体实验的改进

果蝇唾腺巨型染色体是大约1000-4000多条同源染色线精确配对聚集而成的多线染色体,这是染色体多次复制,但细胞只生长、不分裂的结果.染色体长达0.5mm.粗细是一般体细胞染色体的100-200倍左右,其上有深浅间隔、宽窄不等的染色带,果蝇4对唾腺染色体上已确定了6000多条染色带,它们宽窄、疏密、顺序、数目恒定,有种的特异性,同种个体的是相同的,不同的种则不一样,因此果蝇多线染色体可以建立染色带及间带分布图,它们的表现和遗传学图大致平行,多数遗传学家认为这些横纹与基因有对应关系,     

实验室果蝇(Drosophil melanogaster)唾腺染色体制备前期技术优化

经过多年的实践积累,从果蝇(Drosophil melanogaster)品系的选择、培养基的配制和果蝇的饲养等方面摸索出了一套改进的制备果蝇唾腺染色体的经验方法。     

果蝇唾腺染色体观察材料的制备

选择夜间气候为南风、多云、20～28℃的条件下,用香蕉培养基引诱、采集果蝇.室内或恒温箱中培养12 d,取野外果蝇三龄幼虫替代实验室长期饲养的果蝇幼虫,制作果蝇唾腺染色体.经剥离、解离、染色、压片,观察到比实验室饲养的果蝇染色体较大、个体更清楚的片子.     

不同浓度的苯酚品红对果蝇唾腺染色体的染色效果

以不同浓度的苯酚品红为染色液,观察其对果蝇唾腺染色体的染色效果,结果表明,8％－12％苯酚品红为染色液,可获得背景清楚,染色体横纹清晰的图像。     

灵活操控果蝇翅芽中wingless基因表达水平的策略

【目的】灵活操控靶基因的表达水平对于研究基因的功能十分重要。Gal4/UAS系统已被广泛应用于调控基因表达,可研究果蝇Drosophila等模式生物复杂的生物学问题。受采用载体的特性及插入位点的影响,Gal4或UAS转基因品系在构建好之后,其调控靶基因的能力基本是确定的。本研究旨在在现有Gal4/UAS系统的基础上,开发一种新的策略,实现在果蝇翅芽中灵活操控wingless(wg)基因的表达水平。【方法】用遗传学手段将黑腹果蝇Drosophila melanogaster品系的UAS-wg和UAS-wg-RNAi转基因重组到同一黑腹果蝇品系中。将该重组黑腹果蝇品系与dpp-Gal4黑腹果蝇品系杂交,同时驱动UAS-wg和UAS-wg-RNAi在果蝇幼虫翅芽中共表达。杂交子代幼虫分别放置在不同的温度(18, 25和30℃)下培养。将幼虫翅芽解剖并进行免疫组化染色,测量染色的荧光强度,分析翅芽中wg的表达水平。【结果】在低温(18℃)下,UAS-wg在基因表达调控中起主要作用,wg表现为超表达,但其超表达的效率可被UAS-wg-RNAi有效地削弱。相反,在高温(30℃)下,UAS-wg-RNAi起主导作用,wg的表达受到抑制。并且通过转换温度,可实现wg在翅芽发育的不同阶段在超表达和抑制之间相互转化,从而灵活地操控wg基因在翅芽中的表达水平。【结论】该方法可以灵活操控果蝇翅芽中wg基因的表达水平,对于调控转基因的表达有重要的意义。     

野生果蝇的收集和培养

果蝇实验可从收集野生果蝇开始。培养野生果蝇可用于 :1为做唾腺染色体装片提供三龄期幼虫 ;2观察突变性状和进行杂交试验 ;3观察动物完全变态发育的全过程。本文将介绍收集和培养野生果蝇的经验和方法。1　果蝇的形态和生活习性果蝇是双翅目昆虫 ,成蝇体长约 0 .5cm,体色多数为檀黄色 ,故又称“黄果蝇”,也有灰身和黑身的。眼睛为复眼 ,在放大镜或显微镜下观察 ,如向日葵状 ,多为红色。卵椭圆形 ,长约 0 .0 5cm。受精卵约需 36h孵化出白色幼虫 ,经两次蜕皮发育成三龄期幼虫。一龄二龄幼虫较小 ,三龄幼虫长约 0 .0 3～ 0 .0 5cm。成熟三龄期…     

寄生黑腹果蝇的日本开臂反颚茧蜂生物学特性及其寄生对寄主发育及免疫反应的影响

[目的]调查寄生黑腹果蝇Drosophila melanogaster的日本开臂反颚茧蜂Asobara japonica的生物学特性,明确其寄生对寄主生长发育及免疫反应的影响.[方法]运用解剖成像和实时荧光定量PCR技术调查分析了日本开臂反颚茧蜂的各发育阶段发育历期、形态特征,以及日本开臂反颚茧蜂寄生黑腹果蝇2龄幼虫后...     

异色瓢虫捕食胁迫对黑腹果蝇繁殖与后代发育的影响水

以模式昆虫黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)及捕食性天敌异色瓢虫(Harmonia axyridis)为研究系统,通过把异色瓢虫接入到有黑腹果蝇的指形管中,研究了黑腹果蝇雌、雄成虫单独或共同被异色瓢虫捕食胁迫后,其自身寿命、子代的生长发育、繁殖和适合度的变化。结果表明:当雄性黑腹果蝇受到异色瓢虫成虫胁迫时,其寿命明显延长,但胁迫与否对雌性黑腹果蝇的寿命无明显影响;当黑腹果蝇的雌雄成虫同时受到胁迫时,其子代幼虫的发育历期延长,雄性后代寿命也增加,而雌性或雄性黑腹果蝇单独受到胁迫,其子代幼虫发育进度没有明显改变;当初孵黑腹果蝇幼虫受到异色瓢虫成虫直接或间接捕食胁迫后,其后续幼虫的发育历期都会受到影响,其中1龄期受到的间接捕食胁迫作用的影响大于直接捕食胁迫作用,直接捕食胁迫1龄幼虫比间接捕食胁迫更能延长其将来雌性成虫的寿命。     

敲低piwi基因对黑腹果蝇血细胞增殖及分化的影响

[目的]探究敲低piwi基因对黑腹果蝇Drosophila melanogaster血细胞增殖及分化的影响.[方法]利用黑腹果蝇e33C-Gal4和Hml-Gal4-UAS-2×EGFP品系分别与野生型W1118和UAS-piwi RNAi品系杂交,实现在黑腹果蝇游离血细胞或淋巴腺中降低piwi基因的表达;采用免疫荧光...     

果蝇唾腺染色体制片方法的改进

对果蝇唾腺染色体制片方法进行了改进．结果表明：改良苯酚品红染色液配好15d后使用,浓度为6％时,染色5～8min可以获得染色体横纹和背景清晰的图像;通过改变脂肪剥离的顺序即染色后再去除脂肪,压片效果明显提高。     

果蝇唾腺多线染色体研究进展及其在遗传学教学中的应用

果蝇唾腺多线染色体是细胞遗传学的3大经典染色体之一,从1934年至今因其具有显著的特点已经作为一个优异的模型用在不同的遗传学研究中。果蝇唾腺多线染色体最大的贡献就是为研究间期染色体结构和基因的表达调控提供了一个非凡的视角;另外,果蝇唾腺多线染色体还可以用于解释一些特殊的遗传现象,例如剂量补偿效应和花斑位置效应。文章一方面就以上进展作一简要总结,另一方面尝试将这一典型案例系统地用于遗传学教学中,引导和激发学生学习遗传学的兴趣。     

沙丁胺醇对黑腹果蝇基因组稳定性、细胞凋亡和蛋白表达的影响

【目的】已有研究表明,食用了饲喂以沙丁胺醇为主要成分的瘦肉精的动物肉类后,瘦肉精成分会在人体内富集,摄入过量沙丁胺醇会对生物体造成不良影响,但是,其具体毒性作用机理目前尚不明确。作为一种模式生物,黑腹果蝇Drosophila melanogaster与哺乳动物的基因具有较高的同源性,且具有繁殖周期短、方便进行遗传操作等优势。因此,我们通过研究过量沙丁胺醇对黑腹果蝇基因组稳定性、细胞凋亡和蛋白表达的影响,来探究它对生物体毒性作用的机理。【方法】将野生型黑腹果蝇3龄幼虫用含沙丁胺醇（120 μg/mL）的饲料饲喂2 h后,对幼虫翅成虫盘进行H2Av抗体免疫染色。选取rpr-lacZ转基因黑腹果蝇1龄幼虫用含沙丁胺醇（40 和120 μg/mL）的饲料饲喂,对幼虫翅成虫盘进行lacZ活性测定。提取沙丁胺醇处理后的野生型3龄幼虫总蛋白,采用SDS-PAGE比较对照组和实验组蛋白表达的差异,并通过质谱分析差异蛋白的氨基酸序列。【结果】沙丁胺醇处理后,经免疫荧光染色发现野生型黑腹果蝇幼虫翅成虫盘部分细胞中组蛋白H2Av的量有显著增加。随着沙丁胺醇浓度的增加,转rpr-lacZ报告基因黑腹果蝇成虫盘细胞lacZ活性增强。采用SDS-PAGE和质谱分析表明,沙丁胺醇处理后黑腹果蝇肌动蛋白（Actin-87E）和异柠檬酸脱氢酶表达量上升。【结论】沙丁胺醇处理会引起黑腹果蝇细胞核DNA损伤,对基因稳定性有显著影响,并且会促进细胞凋亡和蛋白表达的改变。沙丁胺醇可能通过促进肌肉收缩和加速生物体能量代谢这两方面来减少脂肪积蓄。     

黑腹果蝇头部中RNA结合蛋白RBP9的互作蛋白筛选

【目的】筛选RNA结合蛋白RBP9在黑腹果蝇Drosophila melanogaster头部中的互作蛋白。【方法】利用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,分别将3×Flag和V5标签编码序列插入到黑腹果蝇成虫头中RBP9和FNE基因起始密码子ATG的后面,构建黑腹果蝇转基因品系3×Flag-RBP 9/3×Flag-RBP9(3FRBP9)和V5-FNE/V5-FNE(VFNE);利用免疫沉淀和质谱法鉴定黑腹果蝇3FRBP9和野生型品系成虫头部中RBP9的互作蛋白并进行生物信息学分析。利用免疫共沉淀方法检测RBP9与FNE蛋白之间的相互作用。【结果】质谱法从黑腹果蝇成虫头部共鉴定了190个与RBP9相互作用的蛋白,其中包括ELAV和FNE。KEGG富集分析显示这些蛋白的基因主要参与核糖体、碳代谢、三羧酸循环、氨基酸生物合成等通路。免疫共沉淀实验结果验证了RBP9与FNE蛋白之间存在相互作用。【结论】RNA结合蛋白ELAV家族成员在黑腹果蝇成虫头部中具有相互作用。本研究为RBP9在果蝇神经系统发育中的功能研究提供了重要实验依据。