甜菊含甙量的变异及R—A型良种的选育

从甜味成分种类及含量的不同,研究甜菊实生群体和单株无性系的变化,从中选育优质甜味成分含量高的良种。主要结果：（１）在实生群体中,丰产株型（圆纺锤形株）占７．３％,其中,优质甜味成分Ｒ－Ａ含量超过Ｓｔ含量的Ｒ－Ａ型株占１０．９６％,它们的Ｒ－Ａ含量变幅为３．３－１２．０％。（２）Ｒ－Ａ型良种Ｊ－２单株无生系在繁殖达２０００万株时,叶片大小和含甙量均存在极显著差异,Ｒ－Ａ含量变幅为４．５－１２．２％。     

R－A型甜菊糖甙的研制

以甜菊（ＳｔｅｖｉａｒｅｂａｕｄｉａｎａＢｅｒｔｏｎｉ）的干叶为原料生产的甜菊糖甙是一种食用天然甜味剂。提高甜菊糖甙（Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅｓ）中优质甜味成分Ｒ－Ａ（甜菊Ａ３甙：ＲｅｂａｕｄｉｏｓｉｄｅＡ）的含量比例是生产中急待解决的课题。本文以Ｒ－Ａ型和Ｓｔ（甜菊甙Ｓｔｅｖｉｏｓｉｄｅ）型甜菊叶为原料,采用Ａ和Ｂ两种方法进行甜菊糖甙的提取,通过Ｂ法获得Ｒ－Ａ含量比例高的甜菊糖甙即Ｒ－Ａ型甜菊糖甙,为甜菊糖甙产品优质化提供了新方法、新技术     

甜菊良种的单株选育

经高效液相色谱分析及部分农艺性状的综合评价 ,从 3个甜菊 (SteviarebaudianaBertoni)优良品系 (中山一号、YS0 0 3和YS0 0 4)的自然并辅助人工授粉结实得到的 13株单株中筛选出 2株优良单株SZ990 0 40 0 3和SZ990 0 40 11,SZ990 0 40 0 3单株干叶总甙含量为 16 .6 4% ,R A甙 13.34 % ,R A甙 /总甙为 80 .17% ;SZ990 0 40 11单株干叶总甙含量 19.2 0 % ,R A甙 12 .30 % ,R A甙 /总甙为 6 4.0 6 %     

R—A型甜菊糖甙的研制

以甜菊为干叶为原料生产的甜菊糖甙是一种食用天然甜味剂。提高甜菊糖甙中优质甜味成分Ｒ－Ａ的含量比例是生产中急待解决的课题。本文以Ｒ－Ａ型和Ｓｔ型甜菊叶为原料,采用Ａ和Ｂ两种方法进行甜菊糖甙的提取通过Ｂ法获Ｒ－Ａ含量比例甜菊糖甙即Ｒ－Ａ型甜菊糖甙,为甜菊糖甙产品优势化提供了新方法,新技术。     

一株将甜菊苷转化为甜茶甙的细菌鉴定及转化特性

摘要：【目的】筛选一株对甜菊苷具有特异转化性能的细菌,并对该菌及转化产物进行鉴定,探讨转化酶及酶对甜菊苷的转化特性。【方法】通过16S rDNA序列分析,构建该菌系统进化树,结合菌体形态及菌落特征,确立该菌系统发育学地位。通过高效液相色谱（HPLC）及液质联用（LC－MS）法检测并鉴定转化产物。用菌液直接对甜菊苷进行转化以研究菌的转化能力。用静息细胞、胞外液和胞内液对甜菊糖分别转化法,确定转化酶与菌体的关系,并用该酶液进行转化特性研究。【结果】该菌株与黄杆菌属的16S rDNA序列相似性为99%,结合菌体     

高效液相色谱法测定大黄及含大黄中成药中番泻甙A的含量

本文报道了用高效液相色谱法分离测定大黄及其制剂中番泻甙A的含量。色谱住为Hibar Cica-Merck NH_2柱(4.6×250mm);流动相:乙腈-水-36％乙酸(65:35:4),340nm检测,外标定量。结果表明,建立的方法完全适用于大黄及含大黄制剂中番泻甙A的含量测定。     

一株快速转化甜菊苷的细菌鉴定、产酶及转化特性

【目的】本研究鉴定了一株筛选的甜菊苷特异降解菌、优化了该菌产β-葡萄糖苷酶的条件以及研究了该菌对甜菊苷的转化特性。【方法】经16SrRNA基因序列测序和系统发育学分析,结合形态学特征确定该菌株的系统发育地位。用单因素及多因素分析探讨了其对甜菊苷的降解,通过液质联用检测了降解产物。【结果】菌株-J2与巨大芽孢杆菌的16SrRNA基因序列相似性达到100%,结合形态学特征,鉴定该菌为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。在玉米淀粉4%、豆粕粉1%、硫酸镁0.04%、pH7.0、37℃、220r/min、接种量10%、培养36h的条件下,该菌产β-葡萄糖苷酶活力为779.68U/mL。甜菊苷转化的结果表明:3d可将10mg/mL甜菊糖溶液中甜菊苷转化74%,使莱鲍迪甙A和甜菊苷的比例(RA/SS)由转化前的0.38上升至0.99,RA的相对量增加160.5%,5d时转化完全。转化产物经液质联用鉴定为甜菊双糖甙。【结论】确定菌株-J2为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium),该菌对甜菊苷具有高效、特异的转化能力,为首次报道的新型、安全菌株。     

含维生素A功能稻紫宝香糯1号的选育与利用

紫宝香糯1号是江西省玉山县特种水稻研究中心利用紫香糯诱变产生的突变体与地方品种八月香糯杂交配组选育而成的新型水稻品种。糙米中富含钙、硒、维生素E、维生素B1和维生素B6等功能营养成分;且糙米中维生素A含量为11 IU/100g,是目前世界上第一个栽培稻内源基因型含天然维生素A的水稻品种,对人类具有较高的营养及保健功能,2006年通过江西省品种审定委员会审定,命名为赣晚糯6号。     

PP2R1A逆转录病毒的构建及对细胞周期的影响

目的：构建重组PP2R1A基因的逆转录病毒感染HEKTER细胞,观察其定位,验证表达,研究过表达PP2R1A对细胞生长及周期的影响。方法：逆转录病毒载体pMIG-Flag-PP2R1A-IRES-GFP与Pcll0A1瞬时共转染293T细胞,收集病毒感染HEKTER细胞,在荧光显微镜下观察定位,标记荧光单克隆。挑取不同表达强度单克隆做western验证PP2R1A蛋白表达。运用流式细胞分析、体外创伤试验及生长曲线试验研究单克隆细胞的增殖及周期。结果：获得了过表达PP2R1A的单克隆细胞株,PP2R1A在细胞内广泛表达,结合western及细胞试验证实PP2R1A高表达阻滞细胞周期并减慢细胞生长。结论：PP2R1A是丝苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A的结构A亚基的a亚型,在细胞内广泛表达。本文成功构建了表达PP2R1A的细胞株,研究发现PP2R1A高表达会影响细胞生长及细胞周期,减缓了细胞增殖。为进一步深入研究PP2R1A对PP2A全酶活性及功能、细胞转化的影响奠定了重要的实验基础。     

PP2R1A 逆转录病毒的构建及对细胞周期的影响

目的:构建重组PP2R1A基因的逆转录病毒感染HEKTER细胞,观察其定位,验证表达,研究过表达PP2R1A对细胞生长及周期的影响。方法:逆转录病毒载体pMIG-Flag-PP2R1A-IRES-GFP与Pcl10A1瞬时共转染293T细胞,收集病毒感染HEKTER细胞,在荧光显微镜下观察定位,标记荧光单克隆。挑取不同表达强度单克隆做western验证PP2R1A蛋白表达。运用流式细胞分析、体外创伤试验及生长曲线试验研究单克隆细胞的增殖及周期。结果:获得了过表达PP2R1A的单克隆细胞株,PP2R1A在细胞内广泛表达,结合western及细胞试验证实PP2R1A高表达阻滞细胞周期并减慢细胞生长。结论:PP2R1A是丝苏氨酸蛋白磷酸酶PP2A的结构A亚基的a亚型,在细胞内广泛表达。本文成功构建了表达PP2R1A的细胞株,研究发现PP2R1A高表达会影响细胞生长及细胞周期,减缓了细胞增殖。为进一步深入研究PP2R1A对PP2A全酶活性及功能、细胞转化的影响奠定了重要的实验基础。     

甜叶菊RAPD反应体系的优化

以甜叶菊为试材,对影响其RAPD反应体系的7个因子进行优化.结果表明,20 μL的优化体系包括:双蒸水13.6 μL,10×Buffer(含15 mmol/L MgCI2)溶液3μL,2.5 mmol/L的dNTPS 1.2 μL,10 μmol/L的引物1μL,20 ng的模板DNA 1μL,1UTaq聚合酶;热循环...     

基于天然低共熔溶剂的甜叶菊中甜菊糖绿色提取方法及优化

尝试利用天然低共熔溶剂(NADES)提取甜叶菊(Stevia rebaudiana)中的甜菊糖, 探索一种高效、绿色和环保的甜菊糖提取新方法。以甜叶菊干叶为原料, 对照传统提取溶剂水, 以甜菊糖中甜菊苷和莱鲍迪苷A的提取浓度作为指标, 筛选出最优的NADES提取配方, 然后通过Box-Behnken响应面法对NADES提取甜叶菊中甜菊糖的工艺条件进行筛选优化。结果表明, 提取效率最高的NADES配方为1,2-丙二醇:甘油:水=8:1:1 (v/v/v), 提取的甜菊苷浓度为2.59 mg∙mL^-1, 比水提取高16.40%, 提取的莱鲍迪苷A浓度为1.06 mg∙mL^-1, 比水提取高12.62%; 通过响应面法得到最优提取条件: 提取时间90分钟, 提取温度60°C, 超声功率为80 J∙s^-1, 预测甜菊苷提取浓度为3.49 mg∙mL^-1, 莱鲍迪苷A提取浓度为1.43 mg∙mL^-1, 与实验验证值(甜菊苷浓度为3.48 mg∙mL^-1, 莱鲍迪苷A浓度为1.42 mg∙mL^-1)接近。在最优条件下, 甜菊苷提取浓度比初始条件提高了34.36%, 莱鲍迪甘A提取浓度比初始条件提高了33.96%。NADES绿色环保, 且提取效率高于传统溶剂, 可用于甜叶菊中甜菊糖的绿色提取; 同时, 该提取方法可为后续推广至其它大宗经济植物类天然产物的绿色工业生产提供参考。     

不同施肥处理对甜菊生长及糖苷含量和积累量的影响

采用盆栽法,以甜菊( Stevia rebaudiana Bertoni)品种‘中山4号'(‘Zhongshan No.4')当年生扦插苗为研究对象,研究不同形态氮肥(硫酸铵、硝酸钠和尿素)及不同施氮量(纯氮)、施磷量( P2 O5)和施钾量( K2 O)对幼苗生长及糖苷含量和单株积累量的影响。结果显示：随氮肥、磷肥和钾肥施用量的提高,甜菊幼苗的株高、茎粗、叶长、叶宽、单株叶干质量和单株茎干质量均呈先升后降的变化趋势,且总体上与对照无显著差异,仅施磷量300 mg·kg-1处理组的叶长显著高于对照;根据施肥量与单株叶干质量的回归方程,确定硫酸铵、硝酸钠、尿素、磷肥和钾肥的施用量分别为64.87、660.21、735.84、211.54和775.92 mg·kg-1时,幼苗单株叶干质量最高。在硫酸铵处理组中,300 mg·kg-1处理组甜菊叶片中的莱鲍迪苷A( R-A)含量及甜菊苷( St)、R-A和总苷的单株积累量以及600 mg·kg-1处理组的St单株积累量高于对照,多数处理组的St、R-A和总苷含量及单株积累量均低于对照;在硝酸钠处理组中,1200 mg·kg-1处理组的R-A和总苷含量、600和900 mg·kg-1处理组的St单株积累量以及300~900 mg·kg-1处理组的R-A和总苷单株积累量高于对照,其他处理组的St、R-A和总苷含量及单株积累量均低于对照;在尿素处理组中,1500 mg·kg-1处理组的R-A和总苷的含量和单株积累量以及600和900 mg·kg-1处理组的R-A和总苷单株积累量高于对照,其他处理组的St、R-A和总苷含量及单株积累量均低于对照;各施氮处理组中,仅1500 mg·kg-1处理组的R-A含量与对照差异显著,其他指标均与对照无显著差异。在施磷处理组中,100 mg·kg-1处理组的R-A含量以及100和200 mg·kg-1处理组的St、R-A和总苷的单株积累量高于对照,多数处理组的St、R-A和总苷含量及单株积累量低于对照且与对照均无显著差异。在施钾处理组中,各处理组的St、R-A和总苷含量及单株积累量均高于对照,其中仅900 mg·kg-1处理组的St、R-A和总苷含量与对照显著差异。各施肥处理组的St含量占总苷含量的百分率均低于对照、R-A含量占总苷含量的百分率均高于对照,且总体上与对照无显著差异。经过综合分析,建议在甜菊生育期内的施肥量为纯氮600~900 mg·kg-1、P2 O5200~300 mg·kg-1和K2 O 600~900 mg·kg-1,其中氮肥以尿素为宜。     

Effects of plant-growth-promoting rhizobacteria and arbuscular mycorrhizal fungus on plant growth,stevioside, NPK,and chlorophyll content of Stevia rebaudiana

Stevia rebaudiana Bertoni is a unique medicinal plant which is mostly utilized as a sugar substitute for diabetic patients. In this research, regenerated plantlets of stevia in tissue culture is transferred to pots in greenhouse and inoculated with plant-growth-promoting rhizobacteria (PGPRs) (Bacillus polymixa, Pseudomonas putida, and Azotobacter chroococcum) and arbuscular mycorrhizal fungus (AMF) (Glomus intraradices). The results showed that in comparison to control, inoculation with a single microorganism, significantly increased root and shoot biomass as well as stevioside, chlorophyll, and NPK content in plants. However, such increased effects have been found to be further enhanced significantly due to dual compatible mixtures of inoculants resulting from their strong synergistic relationships among themselves. All growth parameters recorded the highest in 60-days-old plants in the treatment of Glomus+Azotobacter and followed with Glomus+Bacillus and Azotobacter+Pseudomonas treatments, respectively. Furthermore, high-performance liquid chromatography (HPLC) chromatograms revealed that the highest stevioside content have been produced in same treatments. Triple treatments had less positive effects compared to dual inoculations. Probably competence between microorganisms in triple inoculations has reduced their efficiency. Thus, suitable combination of mycorrhizal fungi and PGPR as biotic elicitors can enhance growth and stevioside content in tissue culture-regenerated plantlets of stevia.     

The Fertilization and Early Development of Embryo and Endosperm in Stevia rebaudiana Bertani

The mature embryo sac is surrounded by endothelium tapetum. It is composed or an egg apparatus, one central cell with secondary nucleus, and 1–6 antipodal cells. About the 6th hour after pollination, female and male nuclei fuse with each other. The syngamy occurred almost simultaneously with the fusion of an other sperm nucleus and the secondary nucleus, but the velocity of the latter is faster than that of the syngamy. The fertilization of Stevia rebaudiana Bertani belongs to the premitotic type. About the 8th hour after pollination, primary endosperm nucleus is in mitosis, its dividing orientation may parallel or at right angle to the long axis of the embryo sac, and gives rise to two initial endosperm cells. The first five divisions of the endosperm cells are of synchronism. At the stage of heart-shaped embryo, the endosperm cells show the signs of digestion and absorbed. The endosperm development is of the cellular type. About the 10th hour after pollination, zygote divides for the first time. The division of the zygote is always transverse. The embryo development conforms to the Asterad type.