柱状嗜纤维菌的外膜蛋白和脂多糖及其对鳜的免疫原性

柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris Reichenbach)又名柱状屈挠杆菌(Flexibacter columnaris Leadbetter),这种细菌感染几乎所有的淡水鱼类。柱状嗜纤维菌可造成严重的鳃和皮肤病变,直至引起鱼的死亡［1］。国内已经分离到多株柱状嗜纤维菌。外膜蛋白和脂多糖是构成革兰氏阴性菌表面抗原最主要的成分,它们作为重要的保护性抗原而引起重视。鳜(Siniperca chuatsi)是我国名特优养殖的重要品种之一,近年来各种病害的发生严重地影响其产量。而柱状嗜纤维菌是危害鳜的病原之一。本文旨在研究这种细菌的外膜蛋白和脂多糖的不同组分对鳜的免疫原性,找出免疫原性最强的组分,为今后的疫苗的研制提供参考。     

噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究

调查了北京地区２５份水样,其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌,检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４）,其他３株菌仅部分被裂解,依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４）,荧光假单胞菌（９／２４）,鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌,为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。     

鱼类病原菌外膜蛋白及其免疫原性研究进展

细菌性疾病是水产养殖病害中最常见且危害甚为严重的一类疾病1。长期以来,一直用于鱼类细菌性疾病防治的西药类药物,由于会导致病原菌产生耐药性,在鱼体内产生药物残留危害人类健康等副作用而被限制使用2。因此,为了选择更加安全有效的防治方法,疫苗免疫逐步得到了人们的重视。       

噬菌蛭弧菌对鱼类常见致病菌裂解作用的研究*

调查了北京地区２５份水样,其中２４份检出噬菌蛭弧菌。本次试验选用４株鱼类主要致病菌为宿主菌,检出的蛭弧菌对上述４种细菌的裂解范围有所不同。其中嗜水气单胞菌可被全部检出的蛭弧菌裂解（２４／２４）,其他３株菌仅部分被裂解,依次为肠型点状气单胞菌（１７／２４）,荧光假单胞菌（９／２４）,鳗弧菌（７／２４）。本次试验直接从水样中检出６株对４种宿主菌均有裂解作用的蛭弧菌,为进一步利用蛭弧菌防治鱼类常见细菌性疾病提供了可用资料。     

异育银鲫及其人工杂合种外源遗传物质的检测分析

采用 DNA 杂交的方法,对异育银鲫及其人工杂合种进行了外源 DNA 的检测分析,发现两个雌核发育系的异育银鲫及其人工杂合种的 DNA 与红鲤 DNA 片段间的分子杂交均有阳性斑点出现,这表明,在异育银鲫及其人工杂合种产生过程中,父本(红鲤)的 DNA 片段的确可以随机地掺入到母本细胞的 DNA 中,从而产生了异精效应,使其子代生长加快,并出现父本性状。     

异育银鲫幼鱼对饲料苯丙氨酸需求的研究

通过55d的生长实验确定异育银鲫幼鱼对饲料苯丙氨酸的适宜需求。实验结果表明,饲料苯丙氨酸含量为1.09%时,异育银鲫幼鱼的增重率、特定生长率和饲料效率均到达最大值,分别为194.50%、1.96%/d、37.74%,而摄食率为最小值4.76%/d。饲料添加适宜水平的苯丙氨酸也显著提高其蛋白质效率、蛋白质沉积率和能量沉积率,均以1.09%处理组显著高于其他各处理组(P0.05)。根据异育银鲫幼鱼特定生长率与饲料苯丙氨酸水平的剂量效应关系,通过非线性回归可以得出饲料酪氨酸为1.04%时异育银鲫幼鱼的苯丙氨酸最适需求量占饲料1.09%,占饲料蛋白的3.02%。       

大鼠脂多糖结合蛋白的分离纯化及对脂多糖的调节作用

经硫酸铵沉淀、Bio Rex70树脂的阳离子交换层析和MonoQ预装柱的阴离子交换层析 ,从大鼠急性期血清中分离纯化了脂多糖结合蛋白 .SDS PAGE为单一条带 ,分子量 60kD ,所纯化的大鼠脂多糖结合蛋白可明显增强脂多糖与单核巨噬细胞的结合 .脂多糖结合蛋白对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞中肿瘤坏死因子α(TNF α)mRNA表达的调节作用具有明显的剂量依赖性 .     

三丁酸甘油酯对异育银鲫生长性能及免疫功能的影响

为研究三丁酸甘油酯(tributyrin, TB)对异育银鲫生长和免疫的影响,以基础饲料作为对照,分别在基础饲料中添加0.5 g/kg、1 g/kg、1.5 g/kg、2 g/kg TB配制成4种实验饲料。实验选择健康、体重相近(43.58±1.6) g的异育银鲫450尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复30尾。预试期2周,正试期8周,实验结束后检测其生长性能和免疫指标。结果表明:各实验组异育银鲫的增重率、特定生长率与对照组相比都得到提高,其中添加1 g/kg TB效果最佳,显著降低了饵料系数(p0.05)。各实验组的头肾和脾脏指数在添加量为0.5～1.0 g/kg范围内显著高于对照组(p0.05)。各实验组的肝胰脏中一氧化氮含量均低于对照组、过氧化氢酶含量均高于对照组,且除2 g/kg TB外其他实验组均差异显著(p0.05);肝胰脏中超氧化物歧化酶活性在添加量为1 g/kg和1.5 g/kg显著高于对照组(p0.05),超过2 g/kg时则会抑制其活性,但差异不显著(p0.05);各实验组的肝胰脏中丙二醛和溶菌酶的含量均低于对照组,且在添加量为1 g/kg TB时差异显著(p0.05)。综合来看,添加适量的TB能提高异育银鲫的生长性能,增强其免疫能力,当添加量为1.02 g/kg时效果最佳。     

复合四倍体异育银鲫两种不同生殖方式的细胞学观察

在复合四倍体异育银鲫（）×银鲫（）的受精过程中,精子入卵后经过解凝、核化,最终形成雄性原核,并可与卵子的雌性原核融合,证明了复合四倍体异育银鲫卵子具有与两性融合生殖极为相似的拟两性融合生殖的能力;而在复合四倍体异育银鲫（）×兴国红鲤（）的组合中,精子入卵后以固缩状态存在,又表现出典型的雌核发育型生殖行为。因此我们认为复合四倍体异育银鲫具有两种不同的生殖发育机制。此外,我们还观察到在第一次有丝分裂中期有核物质被排斥到纺锤体之外的现象。本文就复合四倍体异育银鲫生殖发育的机制进行了初步的探讨。     

雌核发育银鲫的受精生物学研究——天然雌核发育银鲫繁殖方式的讨论

本文研究了同源雌核发育银鲫精子在4种类型的雌核发育银鲫卵中的发育特征。初步揭示了天然雌核发育银鲫根据精子的来源不同而分别具有二种不同的繁殖方式,对其在维持雌核发育银鲫种群生存,促使克隆分化等方面的独特的生物学意义进行了讨论。     

江苏盐城地区异育银鲫大红鳃疾病病原学研究及病理学观察

为鉴定近期江苏盐城地区养殖异育银鲫大红鳃疾病病原,研究从患病濒死鱼中分离到两株致病菌并对其理化特性、分子生物学、感染病理学进行了研究,同时开展了鉴别诊断和回归试验以及药敏检测。结果显示,两分离株理化特性与温和气单胞菌（A.sobria）特征相符,与GenBank中A.sobria的gyrB基因同源性达99%以上,在系统发育树上均与A.sobria聚为一族。同时与鲤科疱疹病毒2型（CyHV-2）鉴别诊断结果表明,患病鱼组织中CyHV-2检测为阴性。组织学上,鳃和肾组织具有典型病理变化。人工感染两株A.sobria后,鱼体出现与自然发病相似的大红鳃症状,并能从发病鱼组织中再分离到相同病原菌;而人工感染CyHV-2组织匀浆后的鲫虽然出现死亡,但无大红鳃症状出现。综上,确认此次大红鳃疾病的病原为A.sobria。药敏实验表明,分离菌株对诺氟沙星、氧氟沙星、氯霉素三种药物敏感。研究为临床上更好的预防异育银鲫大红鳃疾病奠定了基础。     

嗜水气单胞菌和河弧菌二联疫苗对鲫的免疫效果

在采用正交试验设计优化了Aeromonas hydrophila和Vibrio fluvialis二联全菌疫苗制备工艺的基础上,研究了采用该工艺制备的疫苗对鲫的免疫保护效果。结果表明注射免疫鲫4周后,抗A.hydrophila和V.fluvialis血清凝集效价分别为：1:4--1:32和1:2--1:16,平均都为1:10,但对攻毒均具有有效的保护作用。浸泡免疫、高渗浸泡免疫或加多糖浸泡免疫在免疫4周后,对A.hydrophila攻毒均无保护作用;然而,加多糖浸泡免疫对V.fluvialis攻毒可产生有效的保护。免疫扩散试验表明,在煮沸并经超声波处理后的A.hydrophila的A.hydrophila或V.fluvialis菌液中均存在两种优势抗原。     

异育银鲫幼鱼对饲料中维生素B6需求量的研究

通过8周的生长实验,研究饲料中维生素B6的含量对异育银鲫(Carassius auratas gibelio)(初始体重3.3 g)生长、饲料利用及生化指标的影响。配制7组等氮等能的饲料,饲料中维生素B6的含量分别为0、1.11、3.29、5.41、12.7、13.3和27.3 mg/kg。实验结果表明,饲料中缺乏维生素B6会显著降低异育银鲫的特定生长率、饲料转化效率、蛋白质效率、存活率、肝体指数,但对摄食率没有显著影响。饲料中维生素B6的含量为12.70 mg/kg时,肝脏谷草转氨酶活性(GOT)活性最强,并且显著高于对照组(P<0.05)。在饲料中维生素B6含量为5.41 mg/kg时,肝脏谷丙转氨酶活性(GPT)活性显著提高。当饲料中维生素B6含量为12.7 mg/kg时,肝脏中维生素B6的沉积最高。通过折线法,根据特定生长率和饲料中维生素B6含量的关系,得出异育银鲫最大生长时饲料维生素B6的适宜含量为0.95 mg/kg;而以肝脏GOT和GPT活性为指标时,其饲料维生素B6的适宜含量分别为11.36和7.62 mg/kg。     

饲料脂肪水平对长养殖周期异育银鲫“中科3号”生长和脂代谢的影响

实验以初重为(11.33±0.03) g的异育银鲫(Carassius auratus gibelio)为研究对象,分别投喂脂肪水平为4%(L4)、8%(L8)、12% (L12)、16% (L16)和20% (L20)的5种等氮饲料进行为期340d的长养殖周期实验,以探究饲料脂肪水平对长养殖周期异育银鲫生长性能、消化酶活性和脂代谢的影响。期间共取样5次,生长阶段分为63d(D63,幼鱼期)、110d(D110,养成前期)、223d(D223,越冬期)、275d(D275,越冬后)和340d(D340,养成中后期)。实验结果显示,以增重率为评价指标,幼鱼期D63的异育银鲫适宜脂肪水平为8%,养成前期D110的异育银鲫适宜脂肪水平为12%,而其他生长阶段饲料脂水平对增重率无显著影响。饲料脂肪水平对幼鱼期异育银鲫肠道消化酶活性有显著影响,脂肪酶活性随脂肪水平的升高呈现先降低后升高的趋势,幼鱼期(D63)异育银鲫肠道胰蛋白酶和淀粉酶活性高于越冬期和养成中后期的异育银鲫,表明幼鱼期的异育银鲫对脂肪的利用较低。幼鱼期(D63)异育银鲫脂肪合成相关基因pparγ和fas的表达量饲料脂肪水平升高呈先升高后下降的趋势,且在L8组表达量最高,而脂解基因lpl和cpt1a的表达量在低脂组L4显著低于其他各组。pparγ和cpt1a在越冬后期(D275)的表达量随饲料脂肪水平的升高呈现先上升后下降,而fas表达量在L4组显著高于其他组,表明不同生长阶段异育银鲫对饲料脂肪摄入的响应策略不一致,摄入过高或过低均会导致代谢紊乱。适宜的脂水平(8%—12%)可促进幼鱼期和养成前期异育银鲫的生长,增强脂肪利用率和脂代谢能力,而较大规格的异育银鲫对脂肪的变化不敏感。     

饲料中灵芝提取物对异育银鲫生长、饲料利用、免疫应答及抗病的影响

通过生长实验探求饲料中添加灵芝提取物饲料对异育银鲫（6.720.11） g生长、饲料利用及免疫应答的影响,以及停止灵芝提取物饲料后,使用效果的持续性。在实验进行的第21天（D21）、第46天（D46）、第65天（D65）进行取样,结果表明所有的灵芝提取物组的特定生长率在饲喂65d后与对照组无显著差异（P0.05）。摄食率随着灵芝提取物在饲料中含量的增加而增加（P0.05）,饲料效率则有着相反的趋势（P0.05）。在D46和D65时,随着灵芝提取物的含量增高,吞噬活力略有增高,但无显著差异（P0.05）。在D21、D46和D65时,呼吸暴发活力随着灵芝提取物的含量增高而增高（P0.05）,在D21时,（0.6%-21d、0%-44d）处理组和（3%-21d、0%-44d）处理组其呼吸暴发活力高于对照组（P0.05）。在D65时,（0.6%-21d、0%-44d）处理组和（3%-21d、0%-44d）处理组其呼吸暴发活力仍高于对照组（P0.05）,但差异不显著。D21、D46和D65时,替代途径补体溶血活力随着灵芝提取物的增高而降低（P0.05）。所有处理组溶菌酶活力在D21时没有产生显著差异。在D46时,对照组溶菌酶活力比最高添加组低但高于低添加组（P0.05）,（3%-1d、0%-44d）处理组也仍高于对照组（P0.05）。在D65时,所有添加组的溶菌酶活力均低于对照组（P0.05）。在D65时,髓过氧化物酶活力随着灵芝提取物的添加剂量升高而升高（P0.05）,（0.6%-21d、0%-44d）处理组仍高于对照组（P0.05）。灵芝提取物的能提高白细胞呼吸暴发活力,且在在高剂量摄入21d后（D46时）,仍可以保持较高的活力,说明灵芝提取物对免疫应答有一定时间延续效应。随着灵芝提取物添加量的升高,异育银鲫在经爱德华氏菌攻毒后的存活率显著提高。最高存活率组为3%添加组,显著高于对照组（P0.05）。实验周期为65d时,饲料中灵芝提取物推荐添加剂量为3%。       

饲料中添加高剂量有机硒和无机硒对异育银鲫生长性能、组织硒蓄积和血液生化指标的影响

为探究饲料中高剂量的有机硒和无机硒对异育银鲫(Carassius auratus gibelio var. CAS V)的生长性能、硒蓄积和血浆生化指标等方面的影响,以硒代蛋氨酸(有机硒)和亚硒酸钠(无机硒)作为不同类型的硒源,初始体重为(62.95±0.23) g异育银鲫为研究对象,进行了为期90d的养殖实验。实验结果表明,饲料中添加0、10和20 mg/kg的有机硒和无机硒对异育银鲫的存活和饲料干物质的表观消化率无显著影响;有机硒处理组硒的表观消化率随饲料有机硒的添加量增加而显著升高(P<0.05);饲料中添加无机硒对硒消化率无显影响(P>0.05)。在饲料中添加有机硒可以提高异育银鲫的生长(P<0.05),在20 mg/kg处理组中达到最高(P<0.05);而饲料中添加10 mg/kg无机硒处理组未显著改变异育银鲫的特定生长率(P>0.05),但高浓度的无机硒则显著降低了其特定生长率(P<0.05)。饲料中添加有机硒显著降低了异育银鲫的肝体比,添加10 mg/kg无机硒显著降低异育银鲫的肝体比(P<0.05);饲料中添加有机硒和无机硒对异...