应用化学发光法检测核酸杂交

固定在膜上核苷酸序列已有许多不同的非放射性检测方法。最普通的方法是在杂交探针上附加一种酶。将这种酶在杂交前与探针共价连接,或者在杂交后与探针结合。然后将膜与信号显示底物一起保温处理就可看见杂交的目的顺序位置。最常用的底物系统是色原性的,色原性系统在酶的作用下在膜上沉淀出不溶性染料。通过最佳的色原性系统可在膜上检测出约2×10~(-6)mol的酶(表Ⅰ)。从理论上讲,底物所能检出的酶的摩尔数越低,能检测目的DNA或RNA的量就越小。     

用于核酸分子杂交实验的电泳转移器

核酸分子杂交实验中需要把电泳分离的核酸区带转移到载体膜上。转移的方法有吸水纸法和电泳法。前者简便,但对大分子核酸效果较差,需时较长。后者效率与分子量无关,转移迅速,但实验设备稍复杂。目前,国际上电泳转移多用带铂电极的凝胶脱色     

用于核酸分子杂交实验的电泳转移器

核酸分子杂交实验中需要把电泳分离的核酸区带转移到载体膜上。转移的方法有吸水纸法和电泳法。前者简便,但对大分子核酸效果较差,需时较长。后者效率与分子量无关,转移迅速,但实验设备稍复杂。目前,国际上电泳转移多用带铂电极的凝胶脱色器(亦有专用设备出售),转移时间1～6小时。我们在研究对一重氮苯砜乙基纤维素纸(DBSE纸)杂交法中自制了简单的电泳转移器,以不锈钢作电极,转移需时15分钟～1小时,效果满意。     

奶粉用于核酸分子杂交

以低脂奶粉和SSC组成简单的核酸分子杂交体系进行核酸斑点杂交、Southern及Northern印迹杂交以及Benton菌斑原位杂交,并与传统的杂交体系进行了比较。说明该体系简单、可靠和价廉,很适于一般实验室采用。     

间接核酸杂交方法的建立

建立了一种新的核酸杂交手段一间接核酸杂交方法,其突出的优点是用一种共同的核酸标记物就可检查不同的基因组或不同的基因。我们重组乙型肝炎病毒或EB病毒的核酸片段于噬菌体M_(13)mp8载体,以此重组的单链DNA为第一夹心层,用~(32)P标记的双链噬菌体DNA作为共同探针,检查乙型肝炎病毒和EB病毒的核酸,获得满意的结果。应用该法进行细胞内的原位杂交,检查细胞内存在的EB病毒基因效果亦佳。     

脂多糖印迹法

<正>本文描述了一个技术:即将电泳分离的脂多糖(LPS)转移到硝酸纤维素纸,纸束缚的LPS和抗体—IPA覆盖物进行专一反应后,用放射自显影技术即可检定。该研究是以构成细菌LPS的格兰氏阴性细菌(O)抗原为材料阐明这个过程的。     

细胞印迹法

<正> 免疫印迹法即利用免疫学检测混合物中蛋白有效成分的一种技术:经凝胶电泳分离后的蛋白有选择地印迹到NC纸上。该技术已被广泛地应用于现代生物学研究中。相反,细胞印迹法即检测特异蛋白质束缚于专一细胞上的一种方法:经电泳分离后印迹到NC纸上。该法仅在必要时才应用。本文就两种细胞印迹技术及有关操作方法作了介绍,并就这些技术的可能意义进行了讨论。     

蛋白质印迹法

蛋白质印迹法(protein blotting)为当代蛋白质研究的重要分析、鉴定技术之一。本文从方法学的角度介绍这一技术,并论述其在分子生物学中的应用。     

蛋白质的印迹法

所谓印迹法就是生物样品(如核酸、蛋白质等)先经过凝胶(琼脂、聚丙烯酰胺等)电泳后,载有样品区带或点子的凝胶通过压片扩散或电泳迁移,把凝胶中分离的样品转移到硝酸纤维素滤纸上,并用一定的探针进行检测的方法。     

蛋白质印迹法的应用

本文介绍了蛋白质印迹法的新近应用。并希望这一方法能启发人们的思想,使其应用更迅速、更完善地扩展到生物学科的各个方面。     

简介核酸杂交技术在医学上的应用

近年,上海一家儿童医院应用引进的一种“人类凝血因子探针”,对一例血友病B高危孕妇进行产前诊断获得成功,使孕妇中止妊娠,从而防止了一名目前尚无理想治疗方法的血友病B患儿出生。应用基因探针的核酸杂交技术,虽然问世才十年光景,却已被誉为“二十世纪生物学一项重要成就”和“继罗、科赫(R.Koch)之后     

蛋白免疫印迹法检测小分子蛋白的实验条件优化研究

目的:蛋白免疫印迹法自发明以来被广泛应用于现代生物学研究中的蛋白质定性和半定量分析。为了提高蛋白免疫印迹法的检测效率,需针对不同蛋白的特性调节相关的实验条件参数。本文旨在探讨免疫印迹法不同参数对小分子蛋白检测效果的影响,从而优化并获得最佳实验条件。方法:比较不同转膜电压和时间、转移缓冲液甲醇含量、不同化学发光剂对小分子蛋白的检测效果。结果:选择20 V、10 min转膜电压和时间所获得的信号显著高于10 V、25 min转膜条件,选择含20%甲醇转移缓冲液所获得的信号显著高于无甲醇转移缓冲液,选择飞克级化学发光剂所获得的信号显著高于纳克级化学发光剂。结论:选用高电压、短时间组合,选择含20%甲醇转移缓冲液和飞克级化学发光剂信号均有助于小分子蛋白免疫印迹检测。     

核酸分离纯化实验指南

总RNA提取常见问题分析Q:RNA降解A:1.新鲜细胞:如果试剂没有问题,且外源性污染也可以排除,那么降解几乎都来自裂解液的用量不足。如果将裂解液直接加入培养吼中裂解细胞,一定要使裂解液能覆盖住细胞。2.新鲜组织:某些富含内源核酸酶的样品(如肝脏,胸腺等),即使使用电     

原位分子杂交法检测恙螨体内肾综合征出血热病毒核酸的研究

为探讨肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）在恙螨体内的分布和定位,采用原位分子杂交技术检测恙螨体内ＨＦＲＳＶＲＮＡ。结果发现：原位分子杂交技术的检出阳性率较ＩＦＡＴ高;ＨＦＲＳＶ阳性信号颗粒呈弥散分布,多见于恙螨幼虫和若虫的腹部组织细胞内,该部位是恙螨的卵巢细胞、中肠及支囊上皮细胞。前体组织细胞内少见;个别幼虫和若虫的前足和中足细胞内亦可见到ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号。在原位分子杂交中,若虫组织细胞内的ＨＦＲＳＶＲＮＡ阳性信号较幼虫密集而且量多,表明ＨＦＲＳＶ在恙螨体内可传递并有增殖现象