中华鳖眼睛发育的形态及组织学观察

在孵化基质沙粒径为0.3～0.6mm、孵化温度为(33.0±0.5)℃、孵化基质的湿度为7%～10%、相对湿度为70%～85%的条件下孵化中华鳖(Trionyx sinensis)卵,孵化周期35～36 d.破壳取不同发育时期的胚胎并制作切片,观察眼睛发育的形态学和组织学特征.孵化第4 d头部两侧出现眼泡的突起;第6d眼睛开始出现色素,第14 d色素由褐色变为黑色;第7 d瞳孔出现,透过瞳孔可见晶状体;虹膜于第14d出现,第18、19 d瞳孔周围呈放射状;巩膜突自第19 d出现,第21 d增至最多,第23 d消失;上、下眼睑分别在第19 d和22 d出现,第32 d眼睑可覆盖瞳孔,眼睛形态与成体眼睛相似.表皮外胚层于第3 d形成角膜原基和晶体泡,第32 d角膜发育完成;第34 d晶状体发育完成;神经外胚层于44～48 h由前脑的两侧分化形成视泡,第3 d由视泡分化形成视杯,并逐步分化形成视网膜;第23 d视网膜的八层结构基本形成;第34 d视网膜发育完成.     

中华鳖肾脏的组织化学特性研究

利用光镜组织化学反应对中华鳖肾单位的结构和组织化学特性进行了详细的观察和分析。结果表明,中华鳖肾脏为分叶形的实质器官,肾小叶由被膜和实质组成,实质无髓质和皮质之分,但可以区分为外侧区和内侧区。外侧区嗜酸性,主要分布有近端小管和集合管。内侧区呈弱嗜酸性,肾小体、颈段、中间段和远端小管主要分布在内侧区。肾小球PAS反应呈阳性,但其琥珀酸脱氢酶(SDH)弱阳性,碱性磷酸酶(ALPase)、Na+/K+-ATPase和阿利新兰(AB)反应为阴性。足细胞酸性磷酸酶(ACPase)反应呈阳性。近端小管刷状缘嗜伊红,PAS反应以及ALPase、ACPase和Na+/K+-ATPase酶反应呈阳性,而SDH弱阳性。中间段、远端小管、集合管弱嗜酸性,SDH阳性。中间段Na+/K+-ATPase弱阳性。远端小管细胞侧面呈PAS阳性,腔面显示AB阳性。集合管胞质含有许多ACPase阳性颗粒,腔面呈PAS强阳性,AB阳性。甲苯胺兰(TB)染色可见集合管腔面有阳性颗粒,肾小管上皮含有亮、暗两种细胞。上述组化反应和分布结果表明,鳖的肾小管细胞类型较多,近端小管在原尿的重吸收中起主要作用,远端小管和集合管具有分泌黏液作用。中华鳖肾单位的结构与组化特性不仅与哺乳类和鸟类有一定差异,也与其他爬行动物不完全相同。       

中华鳖性腺的发生与发育研究

为了揭示中华鳖性腺的发生与发育规律,在(32±0.5)℃温度下孵化鳖卵,72h时,从组织切片中可见原始生殖细胞移向中肠附近的内胚层;第5天生殖嵴形成;第13天性腺分化为皮质和髓质;第16天性腺开始分化为精巢或卵巢,至第22天时分化结束,形成精巢或卵巢.胚胎期、稚鳖和1龄鳖的性腺均呈短细管状,表面光滑,无色,胶状透明;2龄、3龄、4龄鳖的精巢呈长椭圆形.稚鳖的卵巢发育至卵原细胞期,组成精巢的曲细精管不明显,管内为精原细胞;1龄幼鳖的卵巢发育至初级卵泡期,精巢的曲细精管内精原细胞的数量增加;2龄和3龄鳖的卵巢处于生长卵泡期,3龄末的卵巢内可见到成熟卵泡,2龄鳖的曲细精管内出现初级精母细胞,3龄末的曲细精管开始出现精细胞和精子;4龄鳖的卵巢发育至成熟卵泡期,曲细精管内由管壁向管腔依次为精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子.结果表明,在(32±0.5)℃温度下,鳖胚发育至22d时,精巢或卵巢形成;在自然条件下,中华鳖至4龄时,性腺才完全发育成熟.     

萝卜胚胎早期发育的亚显微结构研究

本研究对萝卜（Raphanus sativus L.)的成熟胚囊,胚和胚乳的早期发育过程作了亚显微结构观察：（1）萝卜胚囊由7个细胞组成,成熟时反足细胞消失;（2）卵细胞表现明显的极性,其合点端不具完整的细胞壁,它是电子致密物质在卵细胞和中央细胞两者质膜之间沉积所形成的一种非连续结构。（3）助细胞的明显特点是具丝状器,细胞器丰富,内质网发达,（4）中央细胞具大液泡,它的两个极核位于靠近卵器的一侧,细胞壁也有类似助细胞丝状器的结构。（5）授粉后4－5天,萝卜合子开始第一次分裂,胚胎发育遵循柳叶菜型模式。（6）萝卜初生胚乳核比合子早约2天分裂,属核型胚乳,在胚囊的合点端和珠孔端,曾出现胚乳的结节状聚集,授粉后第16天左右,从珠孔区胚乳开始了细胞壁自由生长和形成胚乳细胞的过程。     

小鼠电融合四倍体胚胎早期发育的研究

多倍体发育现象在低等动物,尤其是在无脊椎动物中比较普遍,在哺乳动物中多倍体往往发育到胚胎早期就死亡,因而在自然界中不能存活。探讨哺乳类四倍体不能存活的原因是当今生物学研究的热点问题之一。目前,电融合技术是大量获得四倍体胚胎的主要手段。本以8－12周龄昆明小白鼠为实验对象,取其2－细胞胚胎于Whitten氏液中进行电融合,再移入CZB液中培养。电刺激的条件分别为：1．0kv/cm,40μs,和0．8kv/cm,80μs。对融合胚发育的状态、细胞数目及染色体组成等进行观察的结果表明,融合胚培养24小时后发育到4－细胞期,并发生致密化（Tab.1)。融合胚的囊胚形成时间与体内发育的同期胚胎及体外培养的同期二倍体胚胎基本一致（Tab,2;Fig.1)。融合囊胚的细胞数平均为13．0±4．95,显（P＜0．01）少于体外发育囊胚（37．0±5．92）和体内发育囊胚（41．6±2．4）的细胞数（Tab.3)。融合胚各个分裂相的染色体数目分布情况见Fig.2,其四倍体（4n＝80）率为42．86％,非整倍体率达57．14％。而对照组的体内发育囊胚的非整倍体率仅为11．54％;（Tab.4),与Kaufman的结果（12．4％）很接近,说明本实验中的染色体制备技术和分析方法是可行的。融合囊胚的细胞数目减少和高发的非整倍体率可能是四倍体胚胎发育能力差的原因。     

内皮型一氧化氮合酶在胚胎小鼠肾脏发育中的表达

目的观察妊娠不同时期胚胎小鼠肾脏发育不同阶段内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达,探讨eNOS在胚胎小鼠肾脏早期发育中的意义。方法分别取胚龄13d（E13）、14d（E14）、15d（E15）、16d（E16）、18d（E18）组及新生组（P0）小鼠各10只,共6组。分别用免疫组化及免疫印迹方法对小鼠肾脏内eNOS表达进行定性、定量分析。结果（1）免疫组化结果显示：E14、E15组eNOS在生肾区呈阳性表达;E16组生肾区表达减弱,肾近端小管呈强阳性表达,同时远端小管及肾脏小动脉内皮也有阳性表达;E18组、P0组近端小管呈强阳性表达,远端小管呈阳性表达,髓质中的集合管eNOS表达弱阳性,而致密斑呈阴性表达。（2）免疫印迹结果显示：E14组肾脏eNOS含量较少,随后逐渐增多,PD0组eNOS含量最多。结论（1）eNOS在小鼠肾脏第14d开始呈阳性表达,以后含量逐渐升高,出生时含量最高。（2）eNOS表达部位从生肾区开始,以后其表达逐渐减弱甚至消失,而肾近端小管、远端小管的表达晚于生肾区,且呈逐渐增强趋势,至出生时达到最强。这一结果表明eNOS在胚胎小鼠肾脏发育的早期阶段起重要调节作用。     

萝卜胚胎早期发育的亚显微结构研究

本研究对萝卜（Raphanus sativus L.)的成熟胚囊,胚和胚乳的早期发育过程作了亚显微结构观察：（1）萝卜胚囊由7个细胞组成,成熟时反足细胞消失;（2）卵细胞表现明显的极性,其合点端不具完整的细胞壁,它是电子致密物质在卵细胞和中央细胞两者质膜之间沉积所形成的一种非连续结构。（3）助细胞的明显特点是具丝状器,细胞器丰富,内质网发达,（4）中央细胞具大液泡,它的两个极核位于靠近卵器的一侧,细胞壁也有类似助细胞丝状器的结构。（5）授粉后4－5天,萝卜合子开始第一次分裂,胚胎发育遵循柳叶菜型模式。（6）萝卜初生胚乳核比合子早约2天分裂,属核型胚乳,在胚囊的合点端和珠孔端,曾出现胚乳的结节状聚集,授粉后第16天左右,从珠孔区胚乳开始了细胞壁自由生长和形成胚乳细胞的过程。     

子午沙鼠子鼠肾脏肾单位的发育

目的探讨子午沙鼠子鼠肾单位发育过程中的形态变化。方法采用光镜技术结合显微测量技术,对子午沙鼠子鼠肾小体和肾小管进行形态观察和测量。结果与1日龄相比,7日龄子午沙鼠子鼠肾髓质与皮质的厚度比增加显著(P0.01);7日龄后各日龄间无显著差异(P0.05),32日龄时达4.88;肾小体的发育经过了逗号小体、S小体、Ⅲ期和Ⅳ期肾小体4个阶段,7日龄肾小体的数目增多(P0.05),7~32日龄肾小体的数目基本稳定(P0.05);与1日龄相比,7日龄子午沙鼠肾小体和肾小球直径显著增加(P0.01),7、14、21日龄间无显著差异(P0.05),与21日龄相比,32日龄显著增加(P0.01);14日龄前,子午沙鼠子鼠各种肾小管直径逐步增加(P0.05),14~32日龄显著增加(P0.01)。结论 1日龄就有少量的Ⅲ期和Ⅳ期肾小体。7日龄肾小体数目达高峰。肾小体和肾小球直径7日龄达高峰,7~21日龄基本稳定,32日龄再次增加,可能与子午沙鼠子鼠肾小球滤过原尿功能增强以适应干旱的环境有关。14~32日龄肾小管直径增加显著,肾小体与肾小管功能进一步完善。皮质中长袢型髓旁肾单位和中间肾单位比短袢型浅表肾单位多;肾皮质肾小管断面中近曲小管数量较远曲小管的多;子午沙鼠子鼠肾髓质与皮质的厚度比较大,髓袢较长,具有较强的浓缩尿液的能力以适应其干旱的生存环境。     

谷子胚和胚乳的发育

合子的第一次分裂为斜的横分裂,胚发育至棒状原胚后,胚顶端一侧的细胞加速分裂形成一团分生组织细胞,由这团分生组织分化盾片、胚芽鞘、胚芽生长点和胚根。胚体的其它部分参与部分盾片和胚根鞘的构成。胚柄不参与胚的组成,胚无外胚叶,胚胎发育属禾本型。核型胚乳。从胚囊壁产生的自由生长壁把胚乳游离核隔开形成一层胚乳细胞。然后这层细胞平周分裂使胚乳细胞变成二层,以后的胚乳细胞增殖以细胞有丝分裂方式进行。胚乳的最外层     

杜仲胚发育过程的研究

西安地区栽培杜仲,4月中旬传粉,下旬受精。合子休眠35天左右。6月初形成原胚,6—8月胚分化发育,10月种子成熟。合子在休眠期,其体积增长1—1.5倍,极性渐显著。合子经两次横分裂,形成线形排列的四细胞原胚。其后基细胞衍生的细胞参与胚体的形成,胚的发育属藜型。胚柄单列细胞,靠珠孔端一个形大,具吸器作用。胚的后期发育与一般双子叶植物相同。     

鳖的形态学统计分析

利用生物统计学的方法对鳖的形态进行了分析 ,结果如下 :鳖的年龄 (Y)与体重 (X)的一元回归方程为 :Y =0 0 0 736 1X 0 4 534,年龄 (Y)与腹甲长 (X)的一元回归方程为 :Y =0 2 4 59X- 0 5480 ;雌雄鳖尾长差异显著 (P <0 0 5) ,雄鳖体重 (Y)对尾长 (X)的一元回归方程为 :Y =2 56 6 4X - 82 8 6 0 ;野生鳖体重 (Y)对背甲长 (X1)、体高 (X5)、头长 (X8)、眼径 (X9)、口裂 (X12 )等 13个形态学指标的最优多元回归方程为 :Y =880 51 6 79 16X1- 10 6 0 91X5 146 4 72X8- 82 96 6 4X9- 3142 0 9X12 ;控温条件下快速生长鳖体重 (Y)对腹甲宽 (X4 )、体高 (X5)、头发 (X8)、眼间距(X10 )、尾长 (X13)等 13个形态学指标的最优多元回归方程为 :Y =- 97 4 6 38 99X4 30 2 6X5-2 9 34X8 140 83X10 - 30 4 2X13.     

扬子鳄胚胎发育分期

本文基于150例不同胎龄的扬子鳄胚胎,将扬子鳄胚胎发育过程分成28个时期。早期胚胎主要以外部形态如体节、体曲程度、脑泡、感觉器官、附肢、鳃弓、颜面部突起、心脏、皮肤等作为分期标准;晚期胚胎主要以器官发育的组织学指标为分期依据。发现在前20个时期中,每个时期的胎龄与密河鳄的很一致,后8个时期的胎龄与密河鳄有差异。分析认为,鳄类晚期胚胎的分期依据应增加器官发育的组织学指标,以便使不同鳄类的胚胎发育有一致的分期标准,为鳄类发育生物学后续研究提供基础资料。     

鸡肾发生的组织学观察

采用组织学方法和电镜技术,对9个不同发育时期的鸡(Callus domestiaus)胚胎进行了观察.通过对鸡胚胎肾组织发生过程的观察,探讨鸡胚中肾的发生与退化,后肾的发生、分化规律和特点.结果表明,孵育到第16期在中肾前端附近出现一些中肾小泡.孵育到第18期形成中肾小管.孵育到第26期,中肾小管的盲端内陷,原始的肾小囊和肾血管球形成,中肾小管显著伸长并迂回曲折.孵育到第33～37期,体前后部中肾组织均已形成完整的肾单位.第37～46期体前部至后部的中肾组织依次退化.孵育到第26期从泄殖腔附近发出的输尿管芽向生后肾组织侵入生长,生后.肾组织产生许多生后肾小泡.第33期出现肾小囊和肾小管,肾小管伸长并发生折叠,出现集合小管、近端小管和远端小管的形态分化.第37～46期肾小体逐渐发育成熟,肾小管继续分化出现细段.鸡的中肾具有排泄功能.鸡后肾的发生与分化存在明显的时间差异.肾单位的分化中,同一胚龄肾组织内可存在不同发育阶段的肾小体,集合小管分化较早,诱导近端小管和远端小管分化,细段分化较迟.     

中华鳖多态性微卫星标记跨物种扩增研究

微卫星是一种优秀的分子标记,并广泛应用于生物和医学的各个领域。但微卫星标记的开发成本较高,因而,利用近缘种已开发的微卫星标记已成趋势。利用本实验室已开发的21个中华鳖微卫星对鼋、斑鳖、山瑞鳖、刺鳖、佛罗里达鳖、两爪鳖、黄喉拟水龟和乌龟等8个物种进行跨物种检验。结果表明,4个微卫星位点(CST21、CST42、CST50和CST52)的引物能在所有8只个体中稳定扩增;而CST16在所有个体中都不能扩增出目的片段。跨物种扩增山瑞鳖结果最好,21个位点中有20个位点能稳定扩增;而乌龟扩增效果最差,只有6个位点能被扩增出目的产物。总之,中华鳖的21个微卫星位点多数可以在鳖科内各属间进行跨物种扩增,部分可以在跨科物种间扩增。     

Hatching mechanism of the Chinese soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis

The mechanism by which the embryo hatches out of the egg envelope, the vitelline membrane and egg white, was studied in the Chinese soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis. The cDNA of the turtle hatching enzyme (HE) was 1555 bp-long and a mature enzyme of 321 amino acids. The mature HE was composed of an astacin protease domain of 200 amino acids and a CUB domain of 121 amino acids, and the estimated molecular size was 35,311. The protease domain contained two active site consensus sequences, HExxHxxGFxHExxRxDR and MHY. An immunoblotting test of an extract of allanto-chorions revealed a 40-kDa band by cross-reaction with the anti-Xenopus HE antiserum. The first change in the envelopes was the appearance of a hole, 1 mm in diameter, at the location around the animal pole of day 8 incubation eggs. A cluster of tall cells, forming a circle in the avascular chorion of day 8 embryos and facing the edge of the hole, had various sizes of inclusion bodies and secretory granules that were labeled by immuno-electron microscopic staining with the antiserum. The egg envelopes were degraded gradually from the animal pole side towards the vegetal pole side in accordance with translocation of the avascular site of the chorion in the same direction. Labeled cells degenerated, presumably when the chorion was underlain by allantois in succeeding developmental stages. The vitelline membrane and egg white were totally digested, presumably by secreted HE, during the hatching period and were consumed for embryonic growth.     

中华绒螯蟹胚胎发育过程中主要生化成分的变化

中华绒螯蟹胚胎发育过程中三种主要生化成分中以蛋白质含量最高（44．56％－67．76％）,脂类次之（21．32％－34．07％）,碳水化合物含量最低（0．47％－3．03％）。从胚胎发育开始至结束,蛋白质降低了23．20％,脂类和碳水化合物均没有明显变化。结果表明,蛋白质是中华绒螯蟹胚胎发育过程中的主要能源物质。     

中华鳖卵的形态结构

报道了鳖（Pelodiscus sinensis)卵的形态与结构。鳖卵圆形,直径1.40-2.70cm,重1.1227-7.0825g。卵壳约占卵重的20％;蛋白少,约占卵重的21％;卵黄多,约占卵重的59％;无蛋白系带,无气室,少数畸形。     

谷氨酰胺对嗜水气单胞菌致病中华鳖的保护作用

为探讨谷氨酰胺(Gln)对嗜水气单胞菌致病中华鳖的保护作用,本试验选取健康中华鳖270只,随机分为5组(A~E组),每组3个重复,每个重复18只。A~D组腹腔注射嗜水气单胞菌(1.3×109cfu/mL,0.5 mL),E组注射等量生理盐水。6 d后,A、E组注射生理盐水,B、C、D组分别注射100 mg/kg·BW、200 mg/kg·BW、400 mg/kg·BW Gln注射液,隔天注射,共注射3次。观测各组中华鳖的存活率,血浆总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、溶菌酶(LZM),脾脏、肝脏和肠道的组织学以及肠道菌群变化。结果表明,A组血浆LZM极显著低于C、D、E组(P0.01),C、D组LZM含量极显著高于A组(P0.01);A组T-AOC极显著低于E组(P0.01),D组T-AOC极显著高于A、B、C组(P0.01);A组GSH-PX极显著低于其余各组(P0.01);A组MDA极显著高于E组(P0.01),B、C、D组MDA显著低于A组(P0.05);A组中华鳖脾脏的红髓脾窦淤血扩张,红髓和白髓的淋巴细胞和血细胞坏死。肝脏充血严重,大量肝细胞破裂,肝细胞间有大量红细胞浸润。中肠黏膜萎缩,较多皱襞断裂。随着Gln注射剂量的增加,B、C、D组脾脏红细胞充斥逐渐减少,红白髓的分界逐渐明显。肝脏出血点减少,肝细胞的大小与排布也渐趋正常。中肠皱襞破损脱落程度逐渐减轻;A组肠道嗜水气单胞菌和大肠杆菌明显高于E组(P0.05),而乳酸杆菌和芽孢杆菌明显低于E组(P0.05);D组嗜水气单胞菌和大肠杆菌明显低于A组(P0.05),而乳酸杆菌和芽孢杆菌明显高于A组(P0.05)。注射Gln可缓解嗜水气单胞菌对中华鳖的致病作用,有效恢复机体抗氧化及非特异免疫力,降低死亡率。     

Folding studies on muscle type of creatine kinase from Pelodiscus sinensis

A folding study of creatine kinase from Pelodiscus sinensis has not yet been reported. To gain more insight into structural and folding mechanisms of P. sinensis CK (PSCK), denaturants such as SDS, guanidine HCl, and urea were applied in this study. We purified PSCK from the muscle of P. sinensis and conducted inhibition kinetics with structural unfolding studies under various conditions. The results revealed that PSCK was completely inactivated at 1.8 mM SDS, 1.05 M guanidine HCl, and 7.5 M urea. The kinetics via time-interval measurements showed that the inactivation by SDS, guanidine HCl, and urea were all first-order reactions with kinetic processes shifting from monophase to biphase at increasing concentrations. With respect to tertiary structural changes, PSCK was unfolded in different ways; SDS increased the hydrophobicity but retained the most tertiary structural conformation, while guanidine HCl and urea induced conspicuous changes in tertiary structures and initiated kinetic unfolding mechanisms. Our study provides information regarding PSCK and enhances our knowledge of the reptile-derived enzyme folding.     

中华鳖阴茎头的组织学观察

2021年8月,在安徽省合肥市庐江县牛王寨采集到东亚腹链蛇属(Hebius)蛇类标本1号。经形态比较发现,该蛇明显不同于大别山地区已有的东亚腹链蛇属物种——棕黑腹链蛇(H. sauteri)和绣链腹链蛇(H. craspedogaster)。分子系统学分析显示,该标本与东亚腹链蛇(H. vibakari)遗传关系最近,且形态上符合东亚腹链蛇特征,提示该标本应为东亚腹链蛇。东亚腹链蛇是安徽省和大别山地区爬行动物分布新记录种,这也是该物种在中国东北地区之外首次被报道。该分布新记录扩大了对东亚腹链蛇的分布范围的认知,对东亚腹链蛇的种群分化和生物地理学研究具有重要意义。