中枢注射下丘脑生长激素释放因子可刺激大鼠进食

从人类胰腺肿瘤(hp GRF)和大鼠下丘脑(rh GRF)中已分别提纯出下丘脑生长激素释放因子(GRFs)。GRF 与胰高血糖素,血管活性肠肽及PHI 结构相似,它除了有很强的促进生长激素释放的作用外,尚朱发现有其他生理功能。GRF 位于下丘脑腹内侧核边缘,这是与进食行为有密切关系的中枢部位。最近,加拿大多伦多大学F.J.Vaccarino 等发现,脑室注射GRF,在0.21-20.0pmol 剂量范围内,可明显增加饥     

采用固相法合成高纯度生产激素释放因子

工业技术院纤维高分子材料研究所合成了由44种氨基酸构成的人生长激素释放因子(GRF)。从脑下垂体中放出的人生长激素是受丘脑下部产生的GRF控制的。自从1982年发现GRF是由44种氨基酸组成的肽以后,在全世界范围内进行了对它的合成研究。现在该研究所的大箸信一等使用了连结氨基酸成为肽的自动合成装置,在溶媒中使用二氯甲烷、氯仿、甲醇等,通过固相合成法,成功地合成了在世界上居领先的高纯度GRF。     

生长激素释放因子

人胰生长激素释放因子(hpGRF)为44肽酰胺,能特异地促进垂体细胞释放生长激素,在结构上属于胰高血糖紊族,尤其与PHI 最近似。人注射hpGRF后,血中生长激素浓度可升高10倍,无明显副作用;对血浆中其它垂体激素及肠活性肽水平也无影响。GRF 在临床上可用于垂体分泌GH 的功能试验,治疗GRF缺乏症,促进创伤及骨折愈合。     

家畜的基因治疗

依阿华州立大学的研究者Gary Lindbery正在用基因治疗技术精确地将基因导入家畜组织。Lindberg在俄亥俄Case Western Reserve大学医学院研究用基因治疗技术治疗入肝功紊乱。用识别血液中某些蛋白的受体包被肝细胞,使受体能进入细胞。Lind berg开发出能被肝受体识别的合成蛋白。用这些蛋白“运输”牛促生长素基因,然后使其表达。还以这种方式将凝血因子基因导入实验室大鼠细胞。在     

α_2受体激动剂可刺激生长激素释放因子分泌

生长激素释放因子(GRF)是下丘脑内刺激腺垂体生长激素(GH)释放的激素,1983年已在大鼠下丘脑提纯,确定了其化学结构,并人工合成以及进行了放免测定。在整体动物曾发现,可乐宁(α_2受体激动剂)可引起 GH 释放增加,这一作用不受生长抑素免疫中和的影响;心得安(β受体阻断剂)亦可刺激 GH释放。在 GRF 已被阐明的情况下,日本京都大学 Y.Kabayama 等试图在离体水平观察肾上腺素能物质对     

日本肯定GRF衍生物有增加牛泌乳量的效果

日本农林水产省畜产试验场生理第一研究室甫立考一等对奶牛投予了人生长激素释放因子(GRF)的衍生物,首次确认了有释放生长激素和增加乳量的效果。该研究组对由 GRF及其衍生物使牛释放生长激素的问题早已开始了基础研究。这次是肯定它们对泌乳量这个生产上有益性状的效应。这项研究原先是用普通研究预算的经费进行的。1988年开始,经费从新设的“通过生物情报的解明和控制开发农林水产新技术综合研究”获得。农林水产省对于     

人胎肝细胞再生因子治疗急性肝衰竭大鼠的实验研究

肝功能衰竭是严重威胁人类身体健康的疾病之一,目前在治疗上尚无突破性进展。国内研究人员应用人胎肝及哺乳动物如猪、牛等胚肝提取物治疗重症肝炎取得了一定疗效,其机理是认为这些胚肝细胞中存在一种能够促进肝细胞增殖的活性因子,称其为肝细胞再生因子(ｈｅｐａｔｉｅｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｓｕｂｓｔａｎｃｅ,ＨＳＳ)。有关其分离提纯,生物活性和理化性质的报道许多,但由于此物质含量低,纯化难度大,因此用作治疗的ＨＳＳ多为粗制品。本研究是在利用高效液相和毛细管电泳等技术获得人胎肝ＨＳＳ纯品的基础上,观察ＨＳＳ对肝细胞的增殖作用…     

肝细胞生长因子的生物学功能与应用

肝细胞生长因子 (ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＨＧＦ)又称扩散因子 (Ｓｃａｔｔｅｒｆａｃａｔｏｒ,ＳＦ) ,最初是从血浆和血小板中纯化获得并认为是一种刺激肝细胞生长增生的有丝分裂原 ,对肝切除或化学损伤后的肝再生起重要作用[1] 。 1984年 ,Ｎａｋａｍｕｒａ等从部分肝切除的大鼠血清中分离到一种能刺激原代培养的肝细胞生长和合成的肝源性因子 ,并首次将它命名为肝细胞生长因子[2 ] 。自从ＨＧＦ的发现至今 ,国内外对其作了许多研究 ,对它的来源、结构、功能乃至基因序列都已有了较为全面、透彻的了解。目前已知Ｈ…     

生长激素信号通路调节大鼠再生肝的肝细胞增殖北大核心CSCD

生长激素(growth hormone,GH)信号通路对机体生长发育具有重要的调控作用。GH通过与特异性膜表面受体结合,启动下游一系列信号通路反应,进而调控细胞增殖、分化和迁移,防止细胞凋亡等。GH对细胞增殖的调控机制一直以来都是研究的热点,但部分肝切除(partial hepatectomy,PH)后,生长激素相关的信号通路是否会活化,调控相关基因的表达,从而促进肝实质细胞增殖,尚未见报道。本文以percoll密度梯度离心结合磁珠分离的大鼠再生肝的肝细胞为材料,采用Rat Genome 230 2.0芯片与生物信息学相结合的方法,研究GH信号通路对肝再生的调控作用。结果表明,大鼠再生肝的肝细胞中22种基因与GH信号通路相关,其中,Gh1、Jak3、Stat3等14种基因表达上调,Irs3、Ghr、Mras等8种基因表达下调。谱函数(Et)分析基因表达变化预示的细胞增殖活动和信号转导活性表明,GH信号通路的信号传导活性在大鼠肝再生的2~72 h强于对照,所调节的肝细胞增殖活动在6~72 h也强于对照。综上所述,GH信号通路促进大鼠再生肝的肝细胞增殖。     

生长激素信号通路调节大鼠再生肝的肝细胞增殖

生长激素(growth hormone, GH)信号通路对机体生长发育具有重要的调控作用。GH通过与特异性膜表面受体结合,启动下游一系列信号通路反应,进而调控细胞增殖、分化和迁移,防止细胞凋亡等。GH对细胞增殖的调控机制一直以来都是研究的热点,但部分肝切除（partial hepatectomy,PH）后,生长激素相关的信号通路是否会活化,调控相关基因的表达,从而促进肝实质细胞增殖,尚未见报道。本文以percoll密度梯度离心结合磁珠分离的大鼠再生肝的肝细胞为材料,采用Rat Genome 230 20芯片与生物信息学相结合的方法,研究GH信号通路对肝再生的调控作用。结果表明,大鼠再生肝的肝细胞中22种基因与GH信号通路相关,其中,Gh1、Jak3、Stat3等14种基因表达上调,Irs3、Ghr、Mras等8种基因表达下调。谱函数（Et）分析基因表达变化预示的细胞增殖活动和信号转导活性表明,GH信号通路的信号传导活性在大鼠肝再生的2~72 h强于对照,所调节的肝细胞增殖活动在6~72 h也强于对照。综上所述,GH信号通路促进大鼠再生肝的肝细胞增殖。     

肝细胞的异质性：葡萄糖和酮体在大鼠肝脏的代谢

用大鼠肝脏门静脉或肝静脉周围的肝细胞来研究葡萄糖和酮体生成的区域分布。肝细胞通过毛地黄皂苷－胶原酶灌流技术分离。门静脉周围肝细胞的γ谷氨酰转肽酶的活性比肝静脉周围肝细胞高２．４倍;而谷氨酰胺合成酶的活性则相反,肝静脉周围肝细胞高出５６倍。门静脉周围肝细胞的内源性葡萄糖合成比肝静脉周围肝细胞高１．５７倍。给予刺激葡萄糖异生的底物,门静脉周围肝细胞的葡萄糖合成则增加１．７－２．１倍。肝静脉周围肝细胞的内源性酮体生成比门静脉周围肝细胞高１．３倍。给予能明显刺激酮体生成的辛酸盐,肝静脉周围肝细胞的酮体生成仅略为增加。我们的结果证实,在基础和刺激的条件下,葡萄糖的异生在门静脉周围肝细胞中优先,而酮体生成仅在肝静脉周围肝细胞占微弱的优势。     

激素和活性多肽

构建了一种表达/分泌载体,它产生了一107一周质磷酸盆结合蛋白与人生长激素释放因子仆GRF)的杂'种蛋自。用携带PhoS一mhGRF杂交基囚的质粒pAA踌专化大肠杆菌ANCC75株,将细胞转人磷酸盐含量有限的培养基中以诱导     

MDM2在原发性肝细胞癌中的表达

目的检测MDM2蛋白及其mRNA在原发性肝细胞癌中的表达,探讨MDM2在原发性肝细胞癌发生发展中作用及意义.方法采用免疫组织化学、原位分子杂交和细胞图像分析技术,检测肝细胞癌组织及其对应癌旁肝组织(各20例),正常肝组织(5例)中MDM2蛋白及其mRNA 表达情况.结果在肝细胞癌组织、癌旁肝组织和正常肝组织中,MDM2蛋白免疫组织化学阳性反应颗粒的平均光密度分别为:0.404±0.105, 0.302±0.067, 0.087±0.034.肝细胞癌组织与癌旁肝组织、正常肝组织相比,差异均有显著性意义(P<0.05).MDM2 mRNA在肝细胞癌组织中呈阳性表达,而癌旁肝组织及正常肝组织均呈阴性.结论 MDM2过度表达在原发性肝细胞癌的发生发展过程中可能发挥了重要作用.     

三种大鼠肝损伤模型中细胞角蛋白异常表达及其机制──免疫组化及免疫电镜研究

本研究应用ＡＢＣ免疫组化技术显示,奶油黄、液氮致局部冻伤及ＣＣｌ＿４所致的三种肝损伤中也有细胞角蛋白（ＣＫ）异常表达肝细胞。（１）在局部肝冻伤及奶油黄性肝损伤中表明不伴脂肪变性的肝细胞坏死不能直接引起肝细胞ＣＫ表达的改变;（２）在奶油黄性肝损伤中显示了卵圆细胞对肝细胞ＣＫ异常表达的诱导作用,表明层粘连蛋白（ＬＮ）可能是这种作用的媒介;（３）在ＣＣｌ＿４致慢性肝损伤中表明肝细胞ＣＫ异常表达和ＬＮ异常沉积无论在位相上还是在时相上都一致,提出肝小叶结构破坏可能也是通过ＬＮ异常沉积而影响肝细胞的ＣＫ表达;（４）应用电镜及免疫电镜技术表明ＣＣｌ＿４性肝损伤中肝细胞中间丝细胞骨架结构的改变伴随着ＣＫ１９阳性抗原决定簇的出现;（５）设计了一种局部肝冻伤模型,利用这种模型表明,ＣＫ１９阳性肝细胞在肝小叶结构完整性遭到破坏且伴纤维组织增生时出现,随小叶结构的恢复而消失。这是对关于肝细胞ＣＫ异常表达是肝小叶结构修复过程中局部肝细胞的修复性反应这一假说的有力支持。讨论了这种改变的意义。     

肝细胞的异质性：葡萄糖和酮体在大鼠肝脏的代谢

用大鼠肝脏门静脉或肝静脉周围的肝细胞来研究葡萄糖和酮体生成的区域分布。肝细胞通过毛地黄皂苷－胶原酶灌流技术分离。门静脉周围肝细胞的ｒ谷氨酰转肽酶的活性比肝静脉周围肝细胞高２．４倍;而谷氨酰胺合成酶的活性则相反,肝静脉周围肝细胞高出５６倍。门静脉周围肝细胞的内源性葡萄糖合成比肝静脉周围肝细胞高１．５７倍。给予刺激葡萄糖异性的底物,门静脉周围肝细胞的葡萄糖合成则增加１．７－２．１倍。肝静脉周围肝细胞的     

《细胞-干细胞》:科学家发现获取肝细胞新方法

<正>中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所惠利健研究组在最新的一项研究中发现,通过表达三个肝脏转录因子,可成功将人体皮肤细胞转变为肝细胞。这项获得人类肝细胞的方法,向最终实现肝细胞治疗、生物人工肝等领域前进了一大步。2月28日,《细胞-干细胞》在线发表了该成果。中国被称为"肝炎大国"。但肝脏供体的缺乏严重阻碍了肝脏移植治疗的应用。近年来新发展起来的肝细胞移植、生物人工肝等新型治疗手段也依然面临着肝细胞缺乏的问题。     

Glypican-3在肝脏良恶性病变中的表达及临床意义

目的:研究Glypican-3在肝脏良、恶性病变中的表达,探讨其临床诊断意义.方法:采用免疫组织化学S-P法检测Glypiean-3在肝细胞性肝癌、肝局灶结节性增生、肝细胞腺瘤及正常肝组织中的表达.结果:Glypican-3在肝细胞性肝癌中的阳性率为81.25%,而在肝脏良性病变肝局灶结节性增生、肝细胞腺瘤及正常肝组织中均为阴性.结论:Glypican-3有助于肝脏良、恶性病变的鉴别诊断.     

编码人生长激素的DNA序列在大肠杆菌中的直接表达

编码人生长激素的DNA通过用化学合成的DNA与酶促制备的CDNA连接而建立。这一“杂化物”基因在乳糖操纵子控制下在大肠杆菌中表达,产生的肽在大小和免疫学性质上具有成熟的人的生长激素的特性。 人生长激素(HGH)是垂体前叶合成的具有191个氨基酸的蛋白质。垂体机能减退 的侏儒因HGH缺陷而身材矮小,在儿童期使用人生长激素可以治疗这一缺陷症。另外,HGH在治疗各种创伤疾病如骨折、皮肤烧伤、溃疡等被证实是有效的。由于生长激素具种属专一性,人的尸体成为HGH的唯一来源。 生长激素mRNA的初级翻译产物是一个蛋白前体,含有与生长激素N末端相接的一段信号肽。这种信号或“前”序列是分泌蛋白的特征。对于大鼠生长激素(RGH),已经鉴定了由RGH mRNA制备的CDNA序列中前序列的26个氨基酸残基。由人生长激素cDNA序列获得的信息,我们设计并建立了一个细菌质粒,它可以在微生物细胞中指导合成大量的成熟HGH。     

拟南芥FD与14-3-3/GRF7蛋白的相互作用研究

为了明确拟南芥FD与14-3-3/GRFs家族成员14-3-3/GRF7之间的互作关系,利用酵母双杂交和双分子荧光互补两种技术分别做了研究。在酵母中,与阴性对照相比,共转化FD-BD与14-3-3/GRF7-AD的酵母菌落在-Leu/-Trp/-His/-Ade四缺培养基上生长良好,表明在酵母中FD与4-3-3/GRF7之间存在直接的相互作用。在烟草中,与阴性对照相比,转化FD-c YFP与14-3-3/GRF7-n YFP,以及FD-n YFP与14-3-3/GRF7-c YFP载体的农杆菌共注射烟草细胞之后均在细胞核内观察到很强的荧光信号,表明在烟草细胞中FD与14-3-3/GRF7之间存在直接的相互作用。两种技术的结果共同证实FD与14-3-3/GRFs家族成员14-3-3/GRF7之间存在直接相互作用。     

胚胎干细胞向肝实质细胞体外定向诱导分化过程中的肝卵圆细胞

如果肝脏严重受损致使肝细胞大部分坏死,或由于某些原因 ( 肝毒性物质、致癌物质的作用 ) 抑制残存肝细胞增殖时,肝内前体／干细胞———肝卵圆细胞便被激活并分化生成肝细胞和胆管细胞等以参与肝修复 . 基于此理论,人们建立了啮齿类动物肝卵圆细胞诱导实验模型 . 但显然上述模型不适用于人类,所以有必要开发一种适用于人类的、高效的肝卵圆细胞的新诱导模型 . 选用小鼠胚胎干细胞,转成拟胚体分化 3 天后分组,诱导组添加肝细胞生长因子 (HGF) 、表皮生长因子 (EGF) 作定向诱导分化 . 其间用免疫细胞化学 (ICC) 检测肝卵圆细胞标志物 A6 等的表达,用流式细胞仪筛选肝卵圆细胞并行 RT-PCR 、透射电镜检测 . 所筛选的肝卵圆细胞进一步体外培养并进行 ICC 和 RT-PCR ,检测其分化生成成熟的肝细胞和胆管细胞的能力 . 研究证实胚胎干细胞体外定向诱导生成肝实质细胞的过程中,存在着有双向分化能力的肝卵圆细胞这个中间分化阶段 . 诱导组肝卵圆细胞分化率均显著地高于对照组,最高时可达 6.11% 左右 . HGF 和 EGF 能显著性诱导胚胎干细胞源性卵圆细胞的生成 . 流式细胞仪筛选 Sca-1+/CD34+ 细胞占总细胞数的 4.59% ,其中 A6 阳性肝卵圆细胞占 90.81% 左右 . 使用流式细胞仪可获得高富集的 A6+/Sca-1+/CD34+ 肝卵圆细胞 . 提供了一种可适用于人类的肝卵圆细胞的新诱导模型 .