洁净室环境监测用培养基贮存效期的验证及方法学确认

目的验证洁净室环境监测用培养基的贮存效期,同时对环境监测浮游菌、沉降菌及表面微生物检测方法进行确认。方法对连续3批次贮存0、90、120 d洁净室环境监测用胰酪大豆胨琼脂(Tryptose soya agar,TSA)培养皿和TSA(L-80)接触皿进行相应菌液适用性检查(包括促生长能力和无菌检查)验证试验;并对贮存120 d TSA培养皿和TSA(L-80)接触皿分别进行环境浮游菌和沉降菌、表面微生物最长采样时间检测,然后再进行促生长能力测试。结果 TSA培养皿和TSA(L-80)接触皿贮存120 d (2～8℃90 d,25℃30 d)的适用性检查结果均符合《中国药典》2015版(三部)对培养基质量控制的要求。贮存120 d TSA培养皿进行洁净室环境浮游菌(主动采样10 min)、沉降菌(暴露采样4 h),以及TSA(L-80)接触皿进行表面微生物(接触采样10 s)检测后均具有良好的促生长能力。结论通过验证试验,确定了环境监测用TSA培养皿和TSA(L-80)接触皿的贮存效期120 d(2～8℃90 d,25℃30 d),并确认了贮存后TSA培养皿进行洁净室环境浮游菌、沉降菌检测的有效性,以及TSA(L-80)接触皿进行表面微生物检测的有效性。     

高效液相色谱法测定细菌发酵液中的糖、甘油和乙醇的研究

目的：建立一种用高效液相色谱快速测定细菌发酵液中糖、甘油和乙醇的方法。方法：酌情取细菌发酵液样品适量(1—9mL)于10mL容量瓶中,加入10mg/mL的甘露醇内标物1．0mL,用水定容到刻度,取2mL用4．5μm滤膜过滤,进样2μL分析,糖、甘油和乙醇以Waters Suger—Park—1钙型阳离子交换柱为固定相,0．05g／L EDTA钙钠水溶液为流动相分离,示差折光仪为检测器检测测定。结果：一次进样可同时测定细菌发酵液样品中的糖、甘油和乙醇;方法RDS在0．52％-0．85％之间,标准回收率在99—102％之间,结果满意。结论：该方法简便、快速、结果可靠,为发酵法生产甘油过程中的质量监控提供了方法。     

琼脂搭片法观察链霉菌菌丝体形态

我们在进行链霉菌的分类鉴定工作中,用琼脂搭片法观察菌丝体形态,效果较好。现简单介绍如下。选择皿底平坦的直径为9厘米的培养皿,灭菌后注入琼脂培养基5—6毫升,使其凝固成厚度约为0.7毫米的薄层,用无菌小刀切成约0.5×1.0厘米的琼脂薄片(如室温较高,应将培养皿置冰箱冷却后再切)。另准备好约装20毫     

二恶英诱发斑马鱼初期胚的循环系统障碍

目的　观察二恶英 (2 ,3,7,8 tetrachlorodibenzo p dioxin ,以下略为TCDD)对斑马鱼 (Zebrafish)初期胚胎的毒性作用。方法　斑马鱼胚从受精后 2 4h直至观察放在 2 4孔培养皿内水浴染毒。采用形态学、组织学观察法及细胞色素P4 5 0 1A(CYP1A)抗体染色法。结果　 0 1μg LTCDD未观察到明显的变化 ,但是 0 3～ 10 μg L浓度的TCDD染毒时 ,首先观察到后主静脉的血流减缓与停滞为共同特征的毒性症状。在染毒群同时还观察到心囊、卵黄囊、头部、躯体等不同程度的水肿以及头部的畸形。在 180h ,摄食对照群 ,0 1μg L、0 3μg L、0 5 μg L、1μg L和 10 μg L各自的死亡率分别是 0、0、5 %、6 0 2 %、6 1 8%、10 0 %。CYP1A抗体染色发现对照群无阳性反应 ,而染毒群在血管上皮看到极强的阳性反应。结论　本试验表明TCDD对斑马鱼胚胎的循环系统有极强的损坏作用 ,而且这种损坏与CYP1A相关联     

验证细菌分布广泛性的实验

在《植物学》细菌一节中讲到,细菌的分布极广。但是,由于细菌的个体很小(一般只有1微米左右),学生不易看到,为了使学生能明确理解到细菌分布的广泛性,并养成爱清洁的习惯,设计了这个实验。现将实验过程及结果介绍如下: 实验用品培养皿、滤纸条、天平、量简、烧杯、电炉、pH试纸、蛋白胨、牛肉膏、琼脂、0.1N NaOH、0.1N HCl实验方法 1.做培养基称取蛋白陈2克、牛肉膏1克、琼脂4克,放入盛有200毫升水的烧杯中煮溶,用0.1N NaOH或0.1N HCl将pH值调至7.2,分装于五套培养皿中,高     

EGCG经AKT1-Mdm-2-p53途径抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖

目的：初步探讨EGCG对卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制作用及其机制。方法：通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验观察EGCG对HO-8910细胞增殖的抑制作用;Westem—blotting检测AKT1、Mdm-2与p53蛋白的表达。结果：（1）细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验结果显示,EGCG可有效抑制HO-8910细胞的增殖（n=3,P〈0．05）。（2）Western—blotting检测结果显示,EGCG处理后AKT1与Mdm-2蛋白表达均降低,而p53蛋白表达升高（P〈0．05）。结论：EGCG通过抑制HO-8910细胞中AKT1与Mdm-2蛋白表达,促使p53蛋白表达而发挥其对细胞增殖的抑制作用。     

响应面法优化火棘总酚含量测定方法

通过响应面优化建立了福林酚比色法检测火棘总酚含量的定量方法。考察了福林酚试剂的浓度(mol/L)及用量、Na2CO3溶液的浓度(g/L)及用量、水浴时间及温度、待测液体系的p H值及乙醇浓度等因素对火棘总酚含量测定的影响。在单因素试验的基础上,进一步通过Box-Behnken设计优化火棘总酚的检测条件。结果表明,火棘总酚的最适检测条件为:1 m L适宜浓度的火棘总酚提取物,加入0.4 mol/L福林酚试剂5 m L,漩涡混匀后,加入170 g/L Na2CO3溶液1 m L,混匀后于34℃水浴反应40 min,冰水中快速冷却,室温条件下于765 nm波长测吸光度。该方法具有极好的重复性及重现性,1 h内检测稳定性高,回收率高达99.95%,测定时可忽略待测液体系p H及乙醇浓度的影响。该方法可推广应用于其它植物总酚含量的检测。     

大肠杆菌抗血清的简易制备

在生物学教学中 ,免疫概念的建立是一个一直困扰教师教学工作的问题。如何通过一个直观、简易的实验 ,使学生获得有关抗原、抗体、抗原抗体间的免疫反应这些比较抽象的免疫学的基本知识 ,值得大家来探讨。我们在实际教学工作中 ,通过制备大肠杆菌的抗血清 ,并以所制备的抗血清进行抗原抗体之间的免疫学的反应 ,获得了较好的教学效果。1　材料与方法1.1　抗原菌种及培养　本实验采用大肠杆菌 (E.coli)为抗原 ,以牛肉膏蛋白胨培养基 (牛肉膏 3g,蛋白胨 10 g,氯化钠 5 g,琼脂 15～ 2 0 g,水 10 0 0 m L,p H7.4～ 7.6 )培养大肠杆菌。将大肠杆…     

建立维生素K_1微生物限度测定方法

目的:根据计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验结果,建立维生素K1微生物限度测定方法。方法:以聚山梨酯80作为乳化剂,使维生素K1在p H 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中充分乳化。取1:20供试液1 m L,按平皿法分别用营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基培养,以计数细菌、霉菌和酵母菌。结果:验证所用培养基的菌落平均数均大于对照培养基上的70%,且菌落形态大小一致。稀释液对照组和试验组培养基上菌落平均数的回收率均大于70%,且菌落形态大小一致。三批维生素K1及其加速和长期稳定性样品中均未见菌落。结论:所选培养基适宜大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌生长。且含聚山梨酯80的p H 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液和维生素K1对所含大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌无抑菌性。     

微激光照射肥大细胞对胞内钙离子浓度的影响

目的:研究850 nm波长微激光对肥大细胞照射后胞内钙离子浓度的影响。方法:实验前12 h,将肥大细胞接种于激光共聚焦专用培养皿中,然后用D-Hank’s液洗涤3次,加入2 m L D-Hank’s液,按照照射时间不同共分六组(Control,1 min,2 min,2.5 min,3 min,4 min),其中,空白对照组不进行激光照射处理;激光照射后,弃去D-Hank’s液,加入含有Fluo-3/AM的D-Hank’s液1 m L,放入培养箱中孵育30 min后,用D-Hank’s液洗涤3次去除胞外多余的Fluo-3/AM,再加入含有10%FBS的D-Hank’s液2 m L,置激光扫描共聚焦显微镜检测。结果:空白对照组中细胞内未见荧光,说明此时胞内无钙离子,但从1 min开始在细胞中发现荧光,而且发现随着照射时间的加长,其荧光强度越来越强,这可能与微激光照射时间越长从而刺激胞内出现更多的钙离子有关。从上面的实验说明850 nm微激光能作为仿灸仪器的光源。     

双歧杆菌奶粉对幼儿肠道内环境影响

将分离到的短型双歧杆菌 CT5 0 6 6制成菌粉 ,同脱脂奶粉及 L actosucrose混合后即为试验用“双歧奶粉”,其中含短型双歧杆菌 CT5 0 6 6 :10 8CFU / g、L acto- sucrose:6 0 mg/ g。给 8名婴幼儿 (1.0～ 6 .0岁 ,离乳 )每天服用 2 5 .0 g。分别于服用前及服用 1周后、2周后及服用结束 1周后 ,检测服用儿肠内细菌群及腐败产物的变化。双歧杆菌数由服用前的 9.99± 0 .16 (log(CFU ) / g)升高到 2周后的 10 .6 1± 0 .16 ,有十分显著性差异。双歧杆菌数占肠内细菌总数的百分率由服用前的 (2 2 .1± 10 .2 ) %升高到 2周后的 (5 2 .6±12 .2 ) % ,有显著性差异。腐败菌数亦显著下降 ,与服用前相比有显著性差异。粪便中的短链脂肪酸尤其是乙酸及乳酸量显著升高 ,分别由服用前的 (2 35 .5 1± 41.3)μmol/ g、(77.15± 44 .4)μmol/ g升高到服用 2周后的 (311.5 5± 30 .8)μmol/ g、(115 .12± 2 4.2 )μmol/ g,有显著性差异。粪便中的腐败产物显著降低 ,有非常显著性差异。服用 2周后粪便中的吲哚、粪臭素等的含量与服用前相比显著降低 ,有非常显著性差异。服用期间粪便的 p H值显著降 ,有显著性差异。上述结果表明 ,服用“双歧奶粉”后 ,8名服用儿的肠内细菌群及肠道内环境得到改善。     

空气净化器去除空气中尘螨过敏原的效果研究

本文旨在研究空气净化器对空气中尘螨过敏原Der f 1的去除效果。于实验舱内[RH:(50±10)%; Tem:(24±1)℃]将过敏原蛋白Der f 1雾化至空气中,利用采样器采集样品,并用双抗夹心ELISA方法检测过敏原Der f 1的浓度,首先计算出尘螨过敏原在自然条件下的衰减率;分别开启空气净化器5 min,10 min,15 min,采样后计算空气净化器对过敏原Der f 1的去除效果。实验得出,尘螨过敏原雾化后1 h的自然衰减为(14±0. 5)%,雾化后2 h的自然衰减率为(34±1)%,雾化后4 h的自然衰减率为(57. 5±0. 5)%。市售空气净化器(CADR=358. 5 m3/h)开启最大风量的Der f1的去除效果:5 min去除率为(66. 68±8. 15)%,10 min去除率为(84. 39±9. 67)%,空气净化器连续工作15 min后过敏原Der f1未检出(LOD=0. 488 ng/m L)。因此,本实验得出结论,在自然无干扰条件下,雾化后的尘螨过敏原在空气中较为稳定,空气净化器能有效去除空气中的尘螨过敏原。     

玻璃纸琼脂平板透析法的改进

玻璃纸琼脂平板透析法在霉菌、放线菌的形态观察中经常用到，但以往的操作步骤繁琐，污染机率高。经改进后，操作简单，成功率高。改进后的制作过程如下：首先制备液体培养基（不加琼脂、其它成分不变），然后取培养皿加入２～３层与培养皿底部大小相同的圆形滤纸。根据培...     

聚乙二醇小檗碱液对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌生长的抑制作用

目的 明确聚乙二醇小檗碱液在琼脂培养基表面的抑菌特点,及其对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的标准菌株、抗生素敏感菌株与多重耐药菌株生长的抑制作用,研究评价药物在皮肤黏膜表面的抑菌作用的合理实验方法.方法 以大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌(标准菌株、抗生素敏感菌株和多重耐药菌株)为研究对象,用常量肉汤稀释法测定聚乙二醇小檗碱液的最低抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC);用平皿琼脂培养法和试管肉汤培养法测定不同浓度聚乙二醇小檗碱液的抑菌作用.结果 在不同浓度的聚乙二醇小檗碱液的作用下,在琼脂培养基表面上或肉汤培养基中细菌的生长受到明显抑制,抑制作用与小檗碱浓度正相关,且对抗生素敏感菌株和多重耐药菌株的抑制作用差异无统计学意义;聚乙二醇小檗碱液在平皿琼脂表面和试管肉汤中对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌抑制100％菌株的浓度分别为1 500和375 mg/L、1 500和375 mg/L.聚乙二醇小檗碱液在琼脂培养基表面的抑菌作用明显低于在肉汤培养基中的抑制作用,在琼脂培养基表面的抑菌浓度是肉汤培养基中的抑菌浓度的4倍.并且金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌之间差异无统计学意义.聚乙二醇小檗碱液必须达到肉汤培养基中4倍以上浓度时,才能获得抑制100％细菌在琼脂培养基表面生长的效果.结论 高浓度的聚乙二醇小檗碱液可以抑制皮肤黏膜表面的细菌,包括抗生素耐药菌株的生长;皮肤黏膜表面应用聚乙二醇小檗碱液的适宜浓度为1 500 mg/L.琼脂培养基法适用于评价药物在皮肤黏膜表面的抑菌作用.     

常见霉菌的简易培养

1　材料用具　长有根霉、青霉或黄曲霉的馒头、葡萄、玻璃培养皿、解剖针和吸管等。2　培养方法　 1)洗净培养皿、解剖针和吸管。 2 )取 1块刚吃剩的馒头 ,掰成片状 (厚约培养皿高的 1/ 2 ,大小约为培养皿面积的 1/ 2 ) ,置于培养皿内 ,作为培养基。3)将几粒葡萄去皮和种子后 ,置于适量清水中揉碎成汁。 4 )用吸管吸取葡萄汁溶液 ,滴到培养皿中的馒头上 ,直到饱和为止。葡萄汁溶液能促进霉菌的生长。 5 )用解剖针从发霉的食品上挑取青霉的孢子 ,涂于培养皿的馒头表面。重复 4～ 5次后 ,盖上培养皿盖。 6 )重复5 ) ,接种根霉和黄曲霉 ,最后将…     

EGCG经AKT1-Mdm-2-p53途径抑制卵巢癌HO-891O细胞的增殖

初步探讨EGCG对卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制作用及其机制.方法:通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验观察EGCG对HO-8910细胞增殖的抑制作用;Western-blotting检测AKT1、Mdm-2与p53蛋白的表达.结果:(1)细胞生长曲线、平皿克隆和软琼脂集落形成实验结果显示,EGCG可有效抑制HO-8910细胞的增殖(n=3,P＜0.05).(2)Westemblotting检测结果显示,EGCG处理后AKT1与Mdm-2蛋白表达均降低,而p53蛋白表达升高(P＜0.05).结论:EGCG通过抑制HO-8910细胞中AKT1与Mdm-2蛋白表达,促使p53蛋白表达而发挥其对细胞增殖的抑制作用.     

绣球花的组织培养(简报)

1、植物名称绣球花（Hydrageamaerophylla）,又名八仙花,虎耳草科多年生草本植物。2、组培材料带侧芽茎段。3、培养条件（1）侧芽诱导及增殖培养基：MS＋6－BA2．0～3．0mg／L＋NAA01～0．5mg／L,蔗糖30g／L,琼脂7g／L,pH6．0;（2）诱导生根培养基：1／2MS＋NAA0.5mg／L,蔗糖15g／L,琼脂用量和pH值同（1）。培养基用121℃高温高压灭菌30min,培养温度为24～27℃,光照强度为1500Lux,照光10h。4、生长与分化（1）侧芽诱导及增殖取生长健壮的绣球花茎段清洗后,经常规方法灭菌,用无菌水冲洗3～4次。切取2～2．5cm的带侧芽…     

海水亚硝酸氧化细菌初始富集过程中硝酸盐的定性检测

本文对海水亚硝酸氧化细菌初始富集过程中硝酸盐的定性检测方法及其适用范围进行了研究。结果表明, 在NaNO2起始浓度为100mg/L的亚硝酸氧化细菌初始富集培养系统中,1mL培养液中残余的NaNO2,可先用 1．0mol/L盐酸溶液20μL和50g/L氨基磺酸铵溶液10-20μL将其去除,然后再用二苯胺试剂对培养液中经亚硝酸 氯化细菌转化来的NaNO3进行定性检测,可检测出的NaNO3浓度下限在20mg/L左右。在NaNO2起始浓度不同的 富集培养系统中,去除NaNO2所需盐酸溶液、氨基磺酸铵溶液的量可根据其起始浓度按比例相应增减,但NaNO2的 起始浓度不宜超过200mg/L。该方法亦适用于淡水亚硝酸氧化细菌初始富集培养过程中硝酸盐的定性检测。       

室内培养蚤状溞的简易方法

1　装置与材料70～ 10 0 L的水族箱 2个 ,4 0 W的日光型水族灯或日光灯 1个 ,金鱼充气泵 1个 ,水族箱恒温加热器 1个。每平方厘米 10 0～ 14 0目的小水网 1个 (自制或到水族商店购买 )。磷酸氢二钾 1瓶 ,馒头或动物肝脏 ,绿藻液数升。2　培养方法水族箱 (5 0～ 10 0 L)置于靠北室内 ,防止阳光直射 ,以免水温昼夜变化过大。注满自来水 ,箱上方安装水族灯或日光灯 ,接上充气泵 ,通电。每个水簇箱投入磷酸氢二钾 10～ 2 0 g,(视自来水的 p H值而定 ,如果自来水的p H值低于 7,用磷酸氢二钾调节水的 p H值 ,如果自来水 p H值是 7,用磷酸氢二钾…     

一种霉菌放线菌悬滴标本的制作方法

青霉(Penicillium)、曲霉(Aspergillum)和放线菌(Actinomycetes)是中学植物实验课必需的实验材料。本人经过摸索,为中学制作出霉菌、放线菌活体悬滴标本和永久装片,很受中学老师们的欢迎,在中学简陋条件下很易制作,效果极佳,现介绍如下。 1.悬滴活标本的制作方法 (1)倒平板 100毫升水中加2克琼脂,煮开使琼脂溶化,待凉至40℃左右(不烫手为度),将该液态琼脂培养基倒入直径90毫米的培养皿中,每皿倒培养基15—20毫升左右,约2—3毫米厚。待琼脂凝固(5—10分钟左右)