多管藻中R－藻蓝蛋自的分离、结晶和初步晶体学研究

从青岛采集的多管藻（Ｐｏｌｙｓｉｐｈｏｎｉａｕｒｃｅｏｌａｔａ）中分离得到的Ｒ－藻蓝蛋白,在ｐＨ＝７．０的０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐－硫酸铵缓冲液中,使用悬滴气相扩散法获得适合Ｘ光衍射分析用单晶。经Ｂｕｅｒｇｅｒ徘循照相和ＸＲＤ—１００面探测仪分析,Ｒ－藻蓝蛋白晶体属于四方晶系,空间群为Ｐ４１（３）２１２,晶胞参数：ａ＝ｂ＝１３７．５ｃ＝２１８．５α＝β＝γ＝９０°。用等比重梯度柱法测定了晶体和母液的比重分别为１．１９和１．０９。根据分子量与晶胞体积估算,一个不对称单位含有一个分子,推测它的分子聚集态形式为（αβ）３。     

富硒螺旋藻中含硒藻蓝蛋白的纯化、结晶及初步晶体学研究

从富硒螺旋藻中提取含硒藻蓝蛋白,经凝胶色谱和离子交换色谱纯化,应用悬滴气相扩散法,采用(NH4)2SO4和PEG4000作沉淀剂,获得了该蛋白质晶体的两种晶型.晶型Ⅰ属于单斜晶系,晶胞参数a=10.80 nm,b=11.70 nm,c=18.40 nm,β=90.2°,晶体空间群属于P21.单位晶胞中每个晶体学不对称单位含12个(αβ)单体,晶体衍射的最高分辨率达0.28 nm.晶型Ⅱ为六方晶系,晶胞参数为a=b=15.5 nm,c=4.03 nm,晶体空间群属于P63.晶体衍射的最高分辨率达0.28 nm.单位晶胞中每个晶体学不对称单位含1个(αβ)单体.对分子在晶体中的可能堆积方式进行了讨论.     

多管藻中R-藻蓝蛋白能量传递途径及动力学

以蛋白亚基复性技术和皮秒级时间分辨荧光光谱,研究海洋红藻多管藻中R－藻蓝蛋白（R－PC）单体和三聚体内能量传递过程。利用亚基复性技术对分离后的β亚基复性,以R－藻蓝蛋白单体和β亚基之间的差谱获得α亚基的吸收光谱。皮秒级时间分辨三维谱图（时间、波长和强度）直观地显示出藻红胆素发色团向藻蓝胆素发色团的能量传递;根据时间分辨测量结果的组份解析,对R藻蓝蛋白单体和三聚体内能量传递途径和相关传递参数进行了指认和讨论;对观察到的单体与三聚体能量传递组份特性的差别提出了解释。与C－藻蓝蛋白光谱对比,R－藻蓝蛋白独特的色团组成使其更有效地捕获与传递光能。     

R-藻蓝蛋白的分离及其结构表征

本文对传统藻胆蛋白的分离方法进行改进,利用柱层析法直接从新鲜多管藻提取分离出纯的Ｒ－藻蓝蛋白。分别用凝胶柱层析法和电泳法测定了其分子量。结果表明：通常实验条件下：Ｒ－藻蓝蛋白的最稳定聚集态是三聚体,其分子量为１２２．８ＫＤ,它由分子量分别为１８．１ＫＤ（α）和２０．５ＫＤ（β）两个亚基组成,其分子组成为（αβ）３。利用吸收和荧光光谱研究了Ｒ－藻蓝蛋白的光谱性质。Ｒ－ＰＣ的三聚体在可见光范围有两个明显的吸收峰,分别为５４６ｎｍ和６１４ｎｍ,与同系的Ｃ－ＰＣ和ＰＥＣ明显不同,表明各类色团光谱特性在三聚体状态基本不变,说明三聚体内色团间无强相互作用。Ｒ－ＰＣ荧光发射峰位于６４０ｎｍ,与同系的Ｃ－ＰＣ和ＰＥＣ基本一致,说明三聚体保证了高效的能量传递。单体的荧光发射呈现双峰（５６６ｎｍ,６４３ｎｍ）,说明单体内能量传递效率不高。从光谱性质可知,在ＰＣ家族中,Ｒ－ＰＣ具有最高的光能捕获效率     

蔷薇藻藻蓝蛋白的稳定性研究

蔷薇藻Rhodella reticulata是属于红藻门的一种海洋单细胞微藻,其生长过程中产生藻胆蛋白、胞外多糖等生物活性物质。蔷薇藻经过破碎,通过硫酸铵沉淀和DEAE Sepharose FF柱层析后,可以分离出较纯的藻蓝蛋白。本文从pH、温度、光照、食品添加剂、金属离子等方面对蔷薇藻藻蓝蛋白稳定性作了较全面的研究：藻蓝蛋白在pH为7时最稳定;低温有利于保持藻蓝蛋白的活性;相对于光照,在避光条件下,藻蓝蛋白有较高的稳定性;适当浓度的蔗糖和葡萄糖都有利于藻蓝蛋白的保存;金属离子影响藻蓝蛋白的稳定性。     

别藻蓝蛋白的聚集态研究

为了研究鱼腥藻PCC7120（Anabaena sp．PCC7120）中别藻蓝蛋白（APC）α和β亚基（α-APC和β-APC）中藻蓝胆素（PCB）与脱辅基蛋白的生物合成,并在蓝藻体外对这两种色素蛋白PCB—ApcA和PCB-ApcB合成时聚集过程进行分析,通过多种组合的质粒在大肠杆菌体内共同表达进行重组。色素蛋白的吸收和荧光光谱以及Zn电泳表明,在大肠杆菌体内同时得到色素蛋白PCB—ApcA和PCB—ApcB,并且体内重组色素蛋白的细胞荧光光谱显示,色素蛋白以三聚体的形式存在,而破碎细胞后所得上清液所显示的光谱特征为单聚体的特征。     

螺旋藻别藻蓝蛋白的纯化、理化特性与结晶

硫酸铵分级沉淀结合多种层析技术,从螺旋藻（SP—Dz）中纯化到电泳纯别藻蓝蛋白（Allophycocyanin,APC）,纯度（A650／A280）达4．83。APC在30min内的荧光扫描曲线为直线;30min连续光照其相对荧光强度仍为原来的98％以上,其抗荧光淬灭能力强于同样条件下的藻蓝蛋白（PC）及荧光素TRITC。用悬滴气相扩散法培养获得了APC晶体。     

从一种富含藻胆蛋白的螺旋藻中大量提取和纯化藻蓝蛋白的研究

采用新鲜藻丝为原料和分段梯度盐析分离纯化钝顶螺旋藻Sp(NS)-90020的藻蓝蛋白（PC）,经羟基磷灰石一次层析,能使提取的PC的纯度大于普遍认可的标准,由于该工艺流程较为简单,适合藻蓝蛋白的大量生产,藻胆蛋白经Sephadex凝胶过滤后的可达电泳纯度标准,经SDS-PAE测得PC,APC的分子量分别约为38.33kD。     

高活力胰岛素研究：B3—Lys猪胰岛素的结晶及初步晶体学分析

用化学半合成方法制备的Ｂ３—Ｌｙｓ猪胰岛素（Ｂ３ＫＰＩ）具有与天然猪胰岛素相同的体内生物活力,但其体外生物活力及受体结合活力比天然猪胰岛素高。本文报道Ｂ３ＫＰＩ的晶体生长,初步晶体学分析及衍射数据与处理。Ｂ３ＫＰＩ晶体的衍射分辨率可以达到２．１Ａ（１Ａ＝０．１ｎｍ）,空间群为Ｒ３,晶胞参数为：ａＨ＝ｂＨ＝８２．２３ＡＣＨ＝３４．１７Ａ．收集了一套２．１Ａ分辨率的衍射数据,数据完全度为８１％,Ｒｍｅｒｇｅ为２．９％。     

R－藻红蛋白──金（AUC4）和汞（PCMS）重原子衍生物的制备和分析

在获得适合Ｘ射线衍射分析用的Ｒ－藻红蛋白单晶体的基础上,用重原子浸泡法,将晶体浸入含重金属金和汞的０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钠－硫酸铵的母液内,经对晶体衍射点强度的分析。找出有明显变化的重原子衍生物。最终得到了与Ｒ－藻红蛋白晶体同晶型的含金和汞的两种重原子衍生物。用面探测仪分别惧了这两种重原子衍生物的衍射数据。通过差值Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ图分析,分别确定了重金属金和汞的位置,经对重原子位置参数精化化,给     

R－藻红蛋白──金（AUC4）和汞（PCMS）重原子衍生物的制备和分析

在获得适合Ｘ射线衍射分析用的Ｒ－藻红蛋白单晶体的基础上,用重原子浸泡法,将晶体浸入含重金属金和汞的０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸钠－硫酸铵的母液内,经对晶体衍射点强度的分析．找出有明显变化的重原子衍生物。最终得到了与Ｒ－藻红蛋白晶体同晶型的含金和汞的两种重原子衍生物。用面探测仪分别收集了这两种重原子衍生物的衍射数据。通过差值Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ图分析,分别确定了重金属金和汞的位置,经对重原子位置参数精化后,给出的品质因子结果表明,含金和汞的重原子衍生物均可被用于多对同晶置换法求解Ｒ－藻红蛋白晶体母体相角的计算。     

斑头雁脱氧血红蛋白的晶体生长及X射线晶体学的初步研究

报导了以Ｎａ２Ｓ２Ｏ４为还原剂制备脱氧血红蛋白,并以聚乙二醇溶液为沉淀剂,在ｐＨ７．２,蛋白浓度２０ｍｇ／ｍｌ条件下培养出适合于Ｘ射线分析用的斑头雁脱氧血红蛋白晶体,经Ｘ射线平面探测仪收集衍射强度数据和处理。确定晶体属三斜晶系,空间群Ｐ１,晶胞参数α＝７．０９ｎｍ,ｂ＝９．５４ｎｍ,ｃ＝５．８７ｎｍ,α＝７２．８°,β＝６５．９°,γ＝８２．０°,ｖ－３４６．１ｎｍ３,每个不对称单位包含２个四聚体分子,共收集２．８分辨率的独立衍射点３０６５４个,Ｒｍ因子为５．１４％。     

枯草杆菌蛋白酶E的结晶及初步衍射研究

对来源于枯草芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶E进行了初步晶体学研究。应用悬滴汽相扩散法生长出了该酶的单晶体,其空间群为P2_12_12_1,晶胞边长a=74.35A,b=80.98A,c=88.59A。已用面探测器衍射仪收集了一套中等分辨率的X射线衍射数据。     

ISOLATION,CRYSTALLIZATION, AND PROPERTIES OF PEPSIN INHIBITOR

A method has been described for the isolation and crystallization of swine pepsin inhibitor from swine pepsinogen. Solubility experiments and fractional recrystallization show no drift in specific activity. The reversible combination of pepsin with the inhibitor was found to obey the mass law. The inhibitor is quite specific, failing to act on other proteolytic and milk clotting enzymes. The inhibitor is destroyed by pepsin at pH 3.5. Chemical and physical studies indicate that the inhibitor is a polypeptide of approximately 5,000 molecular weight with an isoelectric point at pH 3.7. It contains arginine, tyrosine, but no tryptophane and has basic groups in its structure.     

ISOLATION,CRYSTALLIZATION, AND PROPERTIES OF SWINE PEPSINOGEN

1. A method is described for the preparation of pepsinogen from swine gastric mucosae which consists of extraction and fractional precipitation with ammonium sulfate solutions followed by two precipitations with a copper hydroxide reagent under particular conditions. Crystallization as very thin needles takes place at 10°C., pH 5.0 and from 0.4 saturated ammonium sulfate solution containing 3–5 mg. protein nitrogen per milliliter. 2. Solubility measurements, fractional recrystallization, and fractionation experiments based on separation after partial heat or alkali denaturation and after partial reversal of heat or alkali denaturation failed to reveal the presence of any protein impurity. 3. The properties of the enzymatically inactive pepsinogen were studied and compared with the properties of crystalline pepsin. The properties of pepsinogen which are similar to those of pepsin are: molecular weight, absorption spectrum, tyrosine-tryptophane content, and elementary analysis. The properties in which they differ are: enzymatic activity, crystalline form, amino nitrogen, titration curve, pH stability range, specific optical rotation, isoelectric point, and the reversibility of heat or alkali denaturation. 4. Conversion of pepsinogen into pepsin at pH 4.6 was found to be autocatalytic; i.e., the pepsin formed catalyzes the reaction. Conversion of pepsinogen into pepsin is accompanied by the splitting off of a portion of the molecule containing 15–20 per cent of the pepsinogen nitrogen.     

克氏原螯虾嗜水气单胞菌噬菌体的分离鉴定和应用

为分离获得致病性嗜水气单胞菌烈性噬菌体,鉴定和研究其生物学特性,为克氏原螯虾细菌性疾病的防治和治疗提供依据,研究以患病克氏原螯虾分离到的致病性嗜水气单胞菌为宿主菌,从湖泊水体中分离到多株噬菌体,对其中一株烈性噬菌体Ph-0进行了生物学特性的分析,包括噬菌斑形态的观察,最佳感染复数的测定,一步生长曲线的绘制,热稳定性的测...     

大熊猫、小熊猫和黑熊血红蛋白的组份分离、结晶及氨基酸组成分析

 聚丙烯酰胺凝胶电泳和羧甲基纤维素柱层析都表明大熊猫(Ailuropodmelanoleuca)、小熊猫(Ailurus fulgens)和黑熊(Selenarctos thibetanus)的血红蛋白各有两个组份。在近似的条件下得到了它们的晶体。三种动物血红蛋白的氨基酸组成相似,而且N-末端氨基酸都是Val。有待进一步测定全部氨基酸顺序,以揭示它们之间的异同和亲缘关系。