DNA指纹技术

ＤＮＡ指纹技术丁志山（杭州大学生物科学与技术系，３１００１２）ＤＮＡ指纹术是分于生物学各种新兴技术的一种，它融合了ＲＦＬＰ、ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移等先进技术。用它可检测出大量ＤＮＡ位点的差异性，成为继ＲＦＬＰ后当今最先进的分子水平上的遗传标记系...     

DNA指纹技术的应用及局限性

DNA指纹图谱是一种在一单一实验中可检测出大量DNA位点差异性的分子生物学技术。自1985年Jeffeys et al,从人的肌红蛋白位点获得第一个多位点探针并用于检查人类基回的VNTRs以来,由于各种高水平探针如微卫星探针、寡聚核苷酸探针的相继问世,使DNA指纹技术在动植物科学研究、遗传疾病的诊断、基因图谱的绘制,遗传标记的寻找及法医学等方面得到广泛应用,充分表现了此技术的优越性。当然此技术还需进一步完善。     

莲藕品种DNA指纹图谱的绘制

采用RAPD技术对14个莲藕品种进行遗传多态性分析,用5个Operon引物和80个SBS的RAPD引物进行筛选,从中选出来自SBS的RAPD-C13和RAPD-D15扩增出的8条多态性条带,绘制了14个品种的DNA指纹图谱,在该图谱中每个品种均有各自特异的DNA指纹。     

AFLP:DNA指纹分析的有力手段

AFLP（扩增片段长度多态性）是一种基于PCR的高分辨DNA指纹分析方法,是一种新的DNA分子标记技术,与其它标记技术相比,它具有相对全家简便,快速,可靠的优点,本文阐述了AFLP的原理,方法及其技术关键指标,综述了AFLP目前在微生物学,植物学等方面的应用。     

大明竹属遗传多样性ISSR分析及DNA指纹图谱研究

利用对竹类有较好多态性的18条引物及已优化的ISSR反应体系和扩增程序,分析大明竹属25种竹的遗传多样性。研究结果：共扩增出重复性好的多态位点高达88.3%,平均每个引物扩增8.61个,DNA分子量在160-3000 bp,此25种竹类的平均遗传距离为0.5006,变异幅度为0.1486-0.7191,说明大明竹属具有高的遗传多样性,种间遗传相对复杂。ISSR结果聚类分析,在遗传距离0.5396处将25种竹划分为3类,与形态分类结果大致一致,说明ISSR技术能精确检测大明竹属部分植物的遗传多样性及亲缘关系,有助于该属的分类。试验用U807、U815、U835、U836、U840、U841、U844 7条引物构建大明竹属25种竹的数字指纹识别码,为大明竹属部分植物的分类及种质鉴定提供参考。     

用DNA指纹法研究野生天鹅种群的遗传分化

DNA指纹技术自问世以来,已被广泛地用于法医学上个体识别和亲缘关系的鉴定。此外,人源DNA指纹探针(即多位点型小卫星探针)还被用于动植物等的研究,特别是在研究动物的繁育规律方面成效显著。近一两年来,DNA指纹技术也在分子水平上用来研究种群分化,为物种起源研究开辟了新的途径。本文利用人源多位点型小卫星探针,对分布在英国和美国的四种天鹅(小天鹅、疣鼻天鹅、大天鹅和喇叭天鹅)的种群结构和天鹅小卫星的分化初步进行了研究。用酶HaeIII和探针pSPT19.6分析了分布在英国的疣鼻天鹅种的两个群体(洛锡安群体和阿伯茨伯里群体)的DNA指纹图,结果表明两群体之间的遗传变异性大于群体内的遗传变异性;洛锡安群体内小卫星的变异程度较高。虽然小卫星在基因组中的作用尚不清楚,但某些天鹅小卫星在种间发生了分化,因而同一个种内不同个体的DNA指纹图有一些共同的特征,导致DNA指纹图的物种特异性。DNA指纹分析表明:小天鹅、大天鹅和喇叭天鹅在遗传上比较接近,而疣鼻天鹅与它们在遗传上相距较远,这与原来对天鹅种下分类情况是一致的。就遗传变异程度而言,在英国仕林布里奇的小天鹅为最高,英国卡拉乌尔洛克的大天鹅次之,英国阿伯茨伯里的疣鼻天鹅居第三,美国蒙大拿的喇叭天鹅最低。我们认为,基因迁移和遗传漂变对     

鸡的DNA指纹与屠宰性能的相关性研究

利用SR92A系鸡与萧山♀鸡的杂交一代群体,以EA（禽内源性反转录病毒片段）为探针,限制性内切酶为EcORI,探讨DNA指纹与若干屠宰性能之间的相关性。结果表明EAV指纹图谱中,长度约为4kb的条带J与SR92A系×萧山鸡杂交后代75日龄的活重、屠宰重、半净膛重、爪重、胸肌重、头重、大腿重有显著负相关,无J带的个体与有J带的相比,75日龄活重平均高出280克,屠宰重高出257克,半净膛重高出216克,胸肌重高出16．71克,分别高达28．57％、28．87％、28．76％和54．00％。若在亲本中选择无条带J的个体建立无J带的后代群体,根据算式：△W＝（XJ-－XJ ）×N×FJ 预测,选择效果和经济效益显著。     

小小卫星DNA阳性克隆的鉴定及DNA指纹分析

提取四种近交系小鼠的肝脏ＤＮＡ,分别用ＨｉｎｆＩ和Ｈａｅ　Ⅲ酶切。用３３．１５和本课题组克隆的小鼠小卫星阳性克隆ＤＮＡ片断作探针,用［α－３２Ｐ］ｄＣＴＰ随机引物标记,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,获得了理想的小鼠ＤＮＡ指纹图谱。初步确定阳性克隆ＤＮＡ片断Ｖ２具有较好的多态性,可作为小鼠基因组小卫星探针,用于实验动物的遗传监测、基因连锁分析和小鼠遗传图谱的研究。     

DNA指纹在近交系动物遗传污染检测中的应用

在用ＤＮＡ指纹为建立葡萄胎动物模型选择动物的过程中,发现“三种”不同来源的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠的ＤＮＡ指纹出现了明显差别。与标准的保种品系Ｂ１和Ｂ２有１２ｋｂ各缺铁了一条ＤＮＡ片段,Ｂ１还缺失了６．６ｋｂ的片段,而在６ｋｂ处Ｂ１和Ｂ２都增加了一条ＤＮＡ片段。     

中国南瓜海南农家品种间的遗传特异性分析和DNA指纹图谱构建

在收集中国南瓜海南农家品种的基础上,本研究应用ISSR和SRAP标记技术对28份海南农家品种间的遗传特异性进行了分析,并构建指纹图谱,为中国南瓜海南农家品种鉴定、评价、保护和利用提供科学依据。结果表明,所供试的品种间存在显著的遗传特异性,具有特殊的遗传基础或背景,所筛选的6个ISSR引物和11对SRAP引物共产生了10个特异标记和11条唯一缺失带;应用ISSR引物组合UBC807/UBC814/UBC844/UBC868和UBC808/UBC814/UBC844/UBC868,以及SRAP引物组合Me1/Em2 Me1/Em10 Me2/Em3和Me1/Em1 Me1/Em10 Me8/Em3分别绘制了四张28份中国南瓜海南农家品种的DNA指纹图谱,所构建的DNA指纹图谱直观、简单。ISSR标记和SRAP标记技术可有效应用于中国南瓜海南农家品种DNA指纹图谱的构建和遗传特异性鉴定。     

DNA指纹图谱法在哺乳动物和鸟类遗传研究中的应用

DNA指纹图谱法(DNA fingerprinting)是1980年中期发展起来的一种新的实验方法。短暂的几年,该方法得到迅速发展和完善,并在鸟类、人类和其它哺乳动物的遗传研究中得到广泛应用。 在人类染色体中,含有许多分散的具有串联重复单位的微小卫星区(minisatellite)。在这些区域中,由于重复单位的数目和重复拷贝数的等位性不同,所以许多卫星区表现出高度多态性(high polymorphism)。1985年,Jeffreys等人发现,这些区域可通过一种10—15碱基对的核心序列来检测。他们从人肌红蛋白基因的卫星区分离出单一重复单位,该重     

罗伯逊易位群体遗传结构的DNA指纹分析

用微卫星探针（GGAT）4得到了罗伯逊易位猪群体内共9个家猪品种的DNA指纹图。1－9品种依次为：13／17罗伯逊易位纯合子猪群体、13／17罗伯逊易位杂合子猪群体、13／17罗伯逊易位杂合子猪互交所得到的正常核型猪群体（杂交0号）、丹系长白猪群体、加系双肌臂杜洛克猪群体、加系双肌臀大约克猪群体、加系双肌臀长白猪群体、丹系长白猪与13／17易位杂合子猪产生的杂交后备猪群体（杂交1号）、杜洛克猪与13／17易位杂合子猪产生的杂交后备猪群体（杂交2号）。根据指纹带型计算了每个群体的相似系数（F）、平均等位基因频率（Q）、最底平均杂合率（H）和遗传距离指数（D）。9个品种的相似系数介于0．546－0．931,根据各品种之间的遗传距离指数作出矩阵图,并据此绘制出品种间亲缘关系树状聚类图。     

DNA指纹技术新进展

DNA指纹技术从原理上可以分为两大类:即传统的以Southern杂交为基础的RFLP技术和以聚合酶链式反应(PCR)为基础的一系列分子标记技术。RFLP需要样品DNA的量较大,对微量被测样品无能为力。至于与PCR相结合的RAPD、AP-PCR和DAF等技术则由于引物相对较短,对实验条件非常敏感,每一轮实验都需要筛选最合适的反应体系,增加了实验周期和复杂度。近几年新出现的AFLP(Am-pilified Fragment Length Polymorphism)、LP-RAPD(Long Primer RAPD)和DALP(Direct     

甘薯质体遗传方式的DNA指纹图谱分析

用DNA指纹图谱分析了甘薯（Ipomoea batatasLam.)徐薯18和AB78-1品系及它们的正反交子代叶绿体DNA,结果显示子代叶绿体DNA指纹均与母本相同,而未发现与父本或双亲相同的指纹图谱,因此在该杂交组合中质体遗传方式为母系遗传,这个结论与先前根据细胞学研究所推测的甘薯质体遗传试不同。表明旋花科植物可能并不存在一个一致的父系或双亲质体传递模式。DNA指纹图谱分析用于质体遗传的研究尚未见报道,本文对其优越性进行了讨论。     

DNA指纹图谱法及其应用

DNA指纹图谱法是利用卫星DNA作探针,探测不同生物的卫星区,产生相应的DNA指纹图谱的杂交方法。它是八十年代中期发展起来的最新技术。短暂几年,该法得到迅速发展和完善,并在法医学、人类遗传学以及鸟类和其它哺乳类的遗传研究中得到广泛应用。     

葡萄品种DNA指纹数据库的构建及遗传多样性分析

利用SSR分子标记技术对314份葡萄品种进行了DNA指纹数据库构建和遗传多样性分析,为葡萄品种鉴定、亲缘关系分析和植物品种权保护提供科学依据。结果表明:9对引物共扩增出199个等位基因,多态性位点为199个,多态性比率达100%,每个标记检测到的位点数在17~31之间,平均为22.1个;多态性信息含量(PIC)值变幅在0.793~0.886之间,平均值为0.839。本研究发现3组同名异物品种和9组疑似同物异名品种,除此之外的290份品种中,70份品种仅需1对引物即可区分开,其余品种需要引物组合来实现品种之间的区分。最少选用8对引物即可完全区分开290份葡萄品种。最终利用8对多态性SSR引物构建了314份供试材料的DNA指纹数据库,聚类分析结果表明:263份二倍体供试材料可被分为真葡萄亚属和圆叶葡萄亚属两大类,而真葡萄亚属又被分为15个亚类。51份多倍体供试材料被分为3组,聚类结果与供试材料已知的系谱来源基本吻合。     

甘薯质体遗传方式的DNA指纹图谱分析

用DNA指纹图谱分析了甘薯(Ipomoea batatas Lam.)徐薯18和AB78-1品系及它们的正反交子代叶绿体DNA,结果显示子代叶绿体DNA指纹均与母本相同,而未发现与父本或双亲相同的指纹图谱,因此在该杂交组合中质体遗传方式为母系遗传.这个结论与先前根据细胞学研究所推测的甘薯质体遗传方式不同,表明旋花科植物可能并不存在一个一致的父系或双亲质体传递模式.DNA指纹图谱分析用于质体遗传的研究尚未见报道,本文对其优越性进行了讨论.     

大熊猫DNA指纹分析材料的初步研究

以圈养大熊猫４个家系,１３只个体的３１份粪便,尿液以及甲醛固定的睾丸组织等作材料,输出血液,被毛进行ＤＮＡ指纹分析,结果表明,同一个体的血液,被毛,粪便,尿液,以及甲醛固定的睾丸组织材料的ＤＮＡ指纹图谱完全一致。