DNA序列分析的若干新技术

DNA序列分析在基因工程和分子生物学研究中一直是一项重要的手段。近几年DNA序列分析有许多新的改进,特别是对于Sanger的酶法测序,因为该法一直被广泛采用。 我们知道,在酶法测序中,DNA聚合酶和DNA片段的标记是两大关键步骤。因此本文着重讨论与这两方面有关的新技术,并对若干测序用的重要新试剂也略加介绍。     

概述DNA测序技术的现状及进展

概述ＤＮＡ测序技术的现状及进展邓炜,柴建华（复旦大学遗传研究所,上海２００４３３）关键词ＤＮＡ测序自１９７７年Ｓａｎｇｅｒ建立“ＤＮＡ双脱氧链未端终止测序法”以来,ＤＮＡ序列测定已成为实验室中常规技术。Ｓａｎｇｅｒ因此而第二次荣膺诺贝尔奖。由于有了成...     

显示DNA的改良染色在图象分析系统中的应用

在人体和动物组织中的核酸染色技术应用较为深入，通过图象分析系统对ＤＮＡ含量测定，而提供了可靠的依据。为了能够使ＤＮＡ组化染色技术，更好的适应图象分析系统的定量研究需要，因此我们对显示ＤＮＡ的染色方法进行了实验对照研究。选用在室温下的高浓度盐酸对细胞水解充足作用，而得到较好效果。改进了Ｓｃｈｉｆｆ＇Ｓ染色液配制，减少染色时间和程序，结果证明了染色稳定可靠，色彩对比度较强，适用于图象分析系统的应用。     

DNA提取对微生物多样性测序分析的影响

运用高通量测序技术分析复杂样品中微生物种群的变化情况,已经成为目前微生物研究领域的热点问题之一。而微生物的样品准备,如DNA提取和16S可变区的扩增等,对于测序完成后的数据分析以及微生物原始群落组成的影响是至关重要的。采用国产试剂盒(天根土壤微生物基因组提取试剂盒)和进口试剂盒(MOBIO土壤微生物基因组提取试剂盒)分别对土壤样品和羊瘤胃食糜样品进行DNA提取。然后选取总DNA起始量为25ng,对16S V3可变区进行PCR扩增和文库构建,最后通过数据分析比较不同试剂盒提取的DNA对微生物多样性变化的影响,包括OTU数目、稀释曲线、微生物数量及物种种类等。研究发现,在相同DNA模板量和PCR条件下,进口试剂盒提取的DNA能够获得更多的微生物种类。     

生命条形码新秀：DNA微型条形码技术

近些年来,DNA条形码技术为便捷的物种鉴定提供了很大的帮助,但随着该技术的发展,也出现了一系列的问题。微型条形码技术是作为DNA条形码技术的补充而出现的一项新兴技术,具体是指通过通用引物扩增出比细胞色素c氧化酶I号基因全序列更短的一段序列,并通过该序列进行物种鉴定、分类等研究工作。作为一项新兴技术,其优点包括,适用于部分降解的DNA样品的目的基因扩增,能够很好地解决环境混合样品多样性的调查等。但是,该技术所选DNA片段非常短,因此标记序列包含的遗传信息有限,在鉴定的精确度方面和COI全条形码存在一定的差距。本文在总结前人研究的基础上,简要概述了微型条形码技术的优缺点,并对其未来在害虫分子识别方面的应用做了初步探讨。     

提高DNA序列测定的准确性方案

目前 ,ＤＮＡ测序的核心仪器是使用荧光染料标记的、具有ＣＣＤ光学系统的ＤＮＡ测序仪 ,其工作原理主要包括 :用不同的荧光染料确定Ａ、Ｇ、Ｃ和Ｔ这 4种碱基的延伸反应 ,通过激光的激发 ,每种染料可以发射出不同的电信号 ,测序仪收集这些光波信号后 ,通过计算机数据分析 ,可得到相应的碱基序列。利用这种方法 ,所有 4种染料可在同一凝胶泳道中检测和辨别 ,消除了因泳道之间迁移率的差异所引起的误差 ,增加了测序的精确度 ;同时 ,可以增加在同一块凝胶上所能分析的模板ＤＮＡ数量。毛细管电泳技术的应用可使测序样品的加样自动化 ,且无须用…     

几种耐热DNA聚合酶的比较

耐热DNA聚合酶广泛应用在PCR技术。本文将常用的几种耐热DNA聚合酶分为三大类,对它们的性质、差异、用途做一个简单的介绍。     

DNA芯片技术

ＤＮＡ芯片技术是近年出现的ＤＮＡ分析技术,其突出特点在于高度并行性、多样性、微型化和自动化［１～５］。高度的并行性不仅可大大提高实验的进程,并且有利于ＤＮＡ芯片技术所展示图谱的快速对照和阅读。多样性是指在单个芯片中可以进行样品的多方面分析,从而大大提...     

图像分析系统在小儿白血病细胞DNA定量分析中的研究

白血病细胞 DNA图像分析可为白血病的诊断、了解白血病细胞的分化程度、判断疗效 ,提供一个新的生物学定量参考指标。本文采用真彩色图像分析系统对 33例小儿白血病和 1 0例非血液病的骨髓涂片进行了 DNA定量分析研究 ,现将结果报告如下。1 .对象和方法1 .1　受检对象　 90～ 96年本院住院患儿首次骨髓涂片　 ( 1 )急性淋巴细胞白血病 ( ALL组 ) 1 8例 ,男性 1 0例、女性 8例、年龄 1～ 1 2岁 ,平均 5 .5岁。其中 L - 1型 1例、 L- 2型 1 5例、 L- 3型 2例。 L-2型病人 3例各有 4次骨髓涂片 ,可供动态分析。( 2 )急性非淋巴细胞白血病…     

无需凝胶电泳的DNA快速分析仪器——WAVE DNA片段分析系统

随着基因组计划的深入进行 ,对ＤＮＡ的分析技术提出了更高要求。目前分离和分析ＤＮＡ片段的标准方法是聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳 ,这种现代电泳技术仍然是一个繁琐冗长的程序 ,不易自动化 ,难于提高分析效率。而且 ,用于检测ＤＮＡ序列变异的基于凝胶的方法 ,其重复性和精密度都不理想。最近 ,出现了一种自动化的可用于检查ＤＮＡ序列改变和ＤＮＡ片段分析的工具 ,其名称为转基因组ＷＡＶＥＤＮＡ片段分析系统。这个系统是第一个商用的ＤＮＡ序列变异检测和ＤＮＡ片段分析的自动化技术。其特点是高通量筛选单核苷酸多态 (ＳＮＰ)和短串…     

DNA测序技术的发展历史与最新进展

DNA测序技术是现代分子生物学研究中最常用的技术。从1977年第一代测序技术的出现,经过30多年的发展,DNA测序技术取得重大进展,以高通量为特点的第二代测序技术逐步成熟并商业化,以单分子测序为特点的第三代测序技术也已经出现。介绍每一代测序技术的特点,并重点介绍了第二代测序技术及其应用。展望新的测序技术对于未来生物学研究及人们自身健康与人类疾病等方面研究的影响。     

一种快速有效纯化DNA序列分析模板的方法

介绍一种ＤＮＡ序列分析模板的快速、有效的纯化方法。该法对ＤＮＡ模板的回收率可达９５％以上。多次测序结果表明,此法与其他常规纯化方法相比,具有简便、快速、有效、可靠等优点,其测序结果电泳带清晰,无模糊带及“鬼带”出现,重复性及稳定性较好。     

一种纯化双链DNA测序模板的有效方法

以变性质粒ＤＮＡ为模板的核苷酸序列分析（又称双链ＤＮＡ测序）的结果会受到诸多因素的影响。然而,模板的制备及其纯度显得尤为重要。本试验对以三种方法纯化的质粒为模板的测序结果作了比较,结果显示．能为普通实验室所采纳的二氧化硅吸附法操作上简单、重复性好,其结果可与Ｍ１３顺序分析系统相媲美。     

微型DNA条形码在水产类物种掺假检测中的应用

水产类物种掺假导致了商业欺诈、食品安全等问题,建立一种快速高效的水产类物种掺假检测技术迫在眉睫.目前,标准DNA条形码(FDB)在水产类物种掺假检测中已经得到了广泛应用,但是食品加工中的高温、高压、反复冻融和酸碱变化等因素均会使DNA发生降解,导致标准DNA条形码扩增失败.微型DNA条形码(MDB)可以利用相对较短(＜...     

PCR介导的DNA序列系统分析在系统动物学中的应用

ＰＣＲ介导的ＤＮＡ序列系统分析在系统动物学中的应用王亚明，周开亚（南京师范大学生物系南京２１００９７）关键词：ＤＮＡ序列分析，系统发育，系统动物学，分子进化在过去的几十年中，系统学（Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ）研究得到了革命性发展，其原因有三个：首先是基...     

应用ABI PRISMTM310测序仪进行快速且经济的DNA测序

目的 使DNA测序更快速且经济。方法 根据测序模板的不同采取相应的测序方法。视具体情况调整测序反应条件,改进仪器的操作方法,减少测序反应体系及合理使用试剂,结果 对测序模板,测序条件和仪器操作的优化,可缩短测序时间,充分利用试剂,可降低测序成本。结论 在保证测序质量的前提下,不仅快速而且经济。     

DNA 测序技术领域的相关政府投入分析

DNA测序技术是遗传工程的核心技术之一,发展快速和低成本的基因测序技术成为研究焦点。美国、欧盟等发达国家和地区大力支持DNA测序技术的创新研究,并投入了大量的科研经费。在美国,国家卫生研究院(NIH)下属的国家人类基因组研究院(NHGRI)、美国能源部(DOE)以及美国科学基金委(NSF)等机构是进行DNA测序技术相关项目经费分配的主要政府部门。DNA测序作为生命科学研究的关键技术也是欧盟框架计划资助的重要内容之一,其以多个欧洲国家间合作以及产学研合作的形式开展。中国在DNA测序技术领域也开展了一些研究。     

DNA序列分析新进展

自从生物学家发现DNA是生命的遗传物质之后,便迫切地想知道它是如何携带信息及控制遗传的.这取决于对DNA分子中的碱基序列的分析.序列分析对于发现旧的基因,促进基因工程的发展有着重大意义.本世纪七十年代,世界上许多生物实验室相继进行这方面的研究.1977年,英国的Sanger序列测定的末端终止法,随后,Maxam和Gilbert等人提出