用基因枪法将GUS基因导入烟草脱外壁花粉及其瞬间表达

以β－葡糖苷酸酶（β－ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ,ＧＵＳ）基因作为报告基因,用基因枪法将其导入烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）脱外壁花粉和作为对照系统的完整花粉,探讨了启动子及不同轰击条件对外源基因瞬间表达的影响,比较了二者的转化频率。结果表明：玉米花粉特异启动子能启动ＧＵＳ基因在脱外壁花粉和完整花粉中表达,而ＣａＭＶ３５Ｓ启动子则不能。靶距离越近,着弹率越高,ＧＵＳ基因瞬间表达频     

紫云英细胞转化条件的研究

研究了紫云英（ＡｓｔｒａｇａｌｕｓｓｉｎｉｃｕｓＬ．）细胞遗传转化的条件。根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）经含乙酰丁香酮的低ｐＨ／ＰＯ３－４ 诱导培养后,用来感染紫云英下胚轴原生质体,随后的细胞ＧＵＳ瞬间表达活性显著提高,间接证明了上述预培养诱导活化了细菌ｖｉｒ基因,促进了Ｔ－ＤＮＡ 向植物细胞转移。在ＰＥＧ介导的ＤＮＡ 转移中,较高的ｐＨ 和Ｃａ２＋ 浓度能够提高细胞ＧＵＳ活性。质粒ＤＮＡ 浓度及启动子类型对外源基因在植物细胞内表达也有一定影响。采用外植体－农杆菌共培养法,获得ＧＵＳ和ＮＰＴ Ⅱ基因稳定表达的紫云英转化植株     

雪花莲外源凝集素基因转化番茄

将含有雪花莲外源凝集素基因（ＧＮＡ）的质粒ｐＲＳＳＧＮＡ１通过冻融法转化到根癌土壤杆菌９Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）菌株ＬＢＡ４４０４中。采用叶盘法转化番茄（Ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｏｎ ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ Ｍｉｌｌ．）栽培品种“Ｃ８”、“Ａ３９”和“Ａ５３”,获得了含ＧＮＡ基因的４３株转化植物株。通过卡那霉素抗性鉴定、ＮＰＴⅡ基     

牛生长激素基因在马铃薯中的表达

将牛生长激素基因ｃＤＮＡ 与Ｐａｔａｔｉｎ ＣｌａｓｓＩ启动子及ＮＯＳ３终止子连接,构建了表达载体ｐＰＢＧＴ． 用直接法将表达载体转入农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ） ＬＢＡ４４０４（ｐＲＡＬ４４０４）菌株, 用此菌株转化马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ）得到再生植株． 经ＮＰＴⅡ活性检测,总ＤＮＡ ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ证明目的基因已整合到马铃薯基因组中．ＲＮＡ 点杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ表明牛生长激素基因已在转基因马铃薯块茎中转录和表达     

可育的抗除草剂溴苯腈转基因小麦

报道了采用微粒轰击（Ｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅ ｂｏｍ ｂａｒｄｍ ｅｎｔ） 幼胚将除草剂抗性基因导入小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍａｅｓｔｉｖｕｍ Ｌ．）的转化研究。实验共使用了１３ 个小麦品种, 从开花后１４～１８ ｄ 的籽粒中剥取幼胚, 植物表达质粒含有ＣａＭＶ ３５Ｓ启动子控制的除草剂溴苯腈抗性基因ｂｘｎ 以及筛选标记基因ＮＴＰⅡ。采用高压放电基因枪,用质粒ＤＮＡ 包被的钨粒轰击预培养３ ｄ 的幼胚。在含有卡那霉素类似物ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ Ｇ４１８ｓｕｌｐｈａｔｅ 的ＭＳ培养基上, 经过多步骤筛选和分化, 从８００ 多个幼胚中获得了１６ 株转化苗。除草剂抗性鉴定和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析证明, 其中４ 株为转基因植物,具有溴苯腈抗性, 并且自交可育。转化工作从分离幼胚到转化苗鉴定完毕, 最短时间为６ 个月, 因此, 该方法是一项快速有效的基因导入技术     

根癌农杆菌对甘蓝型油菜的转化及转基因植株的再生

用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ）共培养法把外源基因导入甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉ－ｃａ ｎａｐｕｓＬ．）主要栽培品种“云北２ 号”,获得转基因植株。所用外植体为带有１—２ ｍ ｍ 子叶柄的完整子叶,根癌农杆菌为Ａ２０８ＳＥ（ｐＴｉＴ３７－ＳＥ, ｐＲＯＡ９３）。Ｔｉ质粒ｐＲＯＡ９３ 带有ＮＰＴⅡ及ＧＵＳ嵌合基因。共培养２ 天后转到附加２５ ｍ ｇ／Ｌ卡那霉素的分化培养基（ＭＳ＋ ４．５ ｍ ｇ／ＬＢＡＰ）上。ＡｇＮＯ３ 和羧苄青霉素促进芽的分化,头孢霉素则有抑制作用。最高转化频率为２７％ 。把分化出的茎芽切下,插入含有２５ ｍ ｇ／Ｌ卡那霉素的生根培养基中。羧苄青霉素不利于根的形成。把完整抗性植株移入盛土壤的盆中,生长状况良好。测定β－葡糖苷酸酶活性,８４％ 明显高于对照。以ＮＰＴⅡ基因作探针进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析,证实外源基因已插入到植物细胞基因组中     

细胞分裂素基因（T—cyt）启动子驱动下的GUS基因在烟草和马铃薯中的表达

构建了来自根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ） Ｔ－ＤＮＡ 的细胞分裂素基因（Ｔ－ｃｙｔ）启动子驱动下的ＧＵＳ基因的表达质粒,并用以转化烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｗ ３８）和马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏ－ｓｕｍ Ｌ． ｃｖ． Ｄｅｓｉｒｅｅ）,研究其在转基因植物中表达的定位。结果表明,Ｔ－ｃｙｔ启动子在转基因植株的根、茎、叶、块茎和萌发的种子中均可表达。其中在茎和块茎中的表达是不均一的：在维管束部分表达较强,在侧芽或叶柄的生长点及块茎的芽生长点表达活性较高。此外,在培养基中加入０．１ ｍ ｇ／ＬＢＡＰ,转基因烟草茎中ＧＵＳ基因的表达活性增强,而对ＮＡＡ 没有明显的反应。看来某些外源植物激素对Ｔ－ｃｙｔ启动子的活性有一定的诱导作用     

罢生植物根转的丛枝菌根真菌Ⅱ.

本文主要报道了野生植物根围Ｇｌｏｍｕｓ属的１７个种,聚球囊霉Ｇ．ａｇｇｒｅｇａｔｕｍ Ｓｃｈｅｎｃｈ＆Ｓｍｉｔｈ。苏格兰球囊霉Ｇ．ｃａｌｅｄｏｎｉｕｍ（Ｎｉｃｏｌ．＆Ｇｅｒｄ．）Ｔｒａｐｐｅ＆Ｇｅｒｄ,近明球囊霉Ｇ．ｃｌａｒｏｉｄｕｅｕｍＳｃｈｅｎｃｋ＆Ｓｍｉｔｈ,明球囊霉Ｇ．ＣＬＡＲＵＭ ｎＩＣＯＬＳＯＮ＆Ｓｃｈｅｎｃｋ,缩球囊霉Ｇ．ｃｏｎｓｔｒｉｃｔｕｍ Ｔｒａｐｐｅ,透光球囊霉Ｇ．ｆａｓｃ     

丛枝菌根真菌对植物根尖分生区和根冠细胞的侵染*

一般说来,从枝菌根（ＡＭ）真菌大多数是从植物根系根毛区（成熟区）侵入和扩展的,在显微镜下往往看不到根尖分生区和根冠表皮细胞被ＡＭ真菌侵染的特征。这就很容易给人们造成一种假象,似乎ＡＭ真菌不能侵染根尖分生区和根冠表皮细胞,即它们对ＡＭ真菌是免疫的。然而笔者多次于显微镜下看到ＡＭ真菌侵染根尖分生区和根冠表皮细胞,并形成典型的泡囊、丛枝、菌丝等结构。这一现象导致作者在温室盆栽和大田条件下研究了玫瑰红巨孢囊霉（ Ｇｉｇａｓｐｏｒａ　ｒｏｓｅａ Ｎｉｃｏｌ　＆ Ｓｃｈｅｎｃｋ）、珠状巨孢囊霉（Ｇｉｇａｓｐｏｒａ　ｍａｒｇａｒｉｔａ　Ｂｅｃｋｅｒ　＆　Ｈａｌｌ）、根内球囊霉（Ｇｌｏｍｕｓ　ｏｍｔｒａｒａｄｉｃｅｓ　ｓｃｈｅｎｃｋ　＆　Ｓｍｉｔｈ、摩西球囊霉（Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｓｓｅａｅ （Ｎｉｃｏｌ　＆ Ｇｅｒｄ．） Ｇｅｒｄｅｍａｎｎ　＆ Ｔｒａｐｐｅ）、地表球囊霉（ Ｇｌｏｍｕｓ ｖｅｒｓｉｆｏｒｍｅ（ Ｋａｒｓｔｅｎ）Ｂｅｒｃｈ）和弯丝硬囊霉（ Ｓｃｌｅｒｏｃｙｓｔｉｓ　ｓｉｎｕｏｓａ　Ｇｅｒｄｅｍａｎｎ　＆ Ｂａｋｈｉ）对棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ　ｈｉｒｓｕｔｕｍ　Ｌ．）、烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　 ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）和白     

pINC－lacZ逆转录病毒载体的构建及其在小鼠胚胎干细胞中的表达

小鼠胚胎干细胞系（ＥＳ）是从囊胚的内细胞团中建立起来的多潜能胚胎干细胞系。ＥＳ细胞系目前正广泛用于将基因打靶后的突变和其它遗传变化导入小鼠的种系中。其中,嵌合鼠的获得是非常必要的一步。这就需要用一个可以广泛表达的基因对ＥＳ细胞进行标记。大肠杆菌β－半乳糖苷酶（β－ｇａｌ）基因的表达在细胞水平就能很容易地观察到,而且对哺乳动物细胞没有任何毒害作用,因而是一个被广泛地用于各种细胞基因表达研究中的报导基因。猿类巨细胞病毒早期（ＳｉＣＭＶＩＥ）启动子是一个广泛用于转基因小鼠研究中的强启动子。然而,该启动子在ＥＳ细胞方面应用的报道尚未见到。本研究用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,从ｐｓｖ－β－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ中得到３．７Ｋｂ的ｌａｃＺ基因片断,将其插入到ｐＩＮＣ载体上（Ｆｉｇ．１）,得到ｐＩＮＣ－ｌａｃＺ（Ｆｉｇ．２）。用ＮｏｔⅠ线性化ｐＩＮＣ－ｌａｃＺ后,电击导入ＭＥＳＰＵ－１３细胞中。ＭＥＳＰＵ－１３为本实验室从１２９／Ｔｅｒ品系小鼠的囊胚中建立的一个ＥＳ细胞系。转化细胞在含有２５０μｇ／ｍｌＧ４１８的培养基上培养两周,进行ＭＥＳＰＵ－１３细胞稳定转化子的筛选。在一次转化实验中,从１ｘ１０７个转化的ＭＥＳ     

玉米转座因子Ac在单倍体烟草中转座的研究

把玉米转座因子Ａｃ插入花椰菜花叶病毒３５Ｓ启动子和链霉素抗性基因（ＳＰＴ）之间，构建带嵌合基因Ａｃ∷ＳＰＴ的双元载体ｐＳＡＣ１１。从普通烟草的花粉植株取单倍体组织，通过农杆菌转化法分别转化嵌合基因Ａｃ∷ＳＰＴ和Ａｃ∷ＧＵＳ（来自双元载体ｐＳＬＪ７２１），得到单倍体转基因植株。对转化Ａｃ∷ＳＰＴ的单倍体叶组织进行链霉素抗性分析，同时对转化Ａｃ∷ＧＵＳ的单倍体作ＧＵＳ活性鉴定，分别检测到Ａｃ从Ａｃ∷ＳＰＴ和Ａｃ∷ＧＵＳ处切离。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明，Ａｃ切离后在单倍体基因组的不同位点整合。上述烟草单倍体的转化体系的建立以及对Ａｃ因子转座的分析，将有助于在单倍体细胞中进行转座因子标签研究。     

寄生植物和接种物对丛枝菌根菌接种势的影响

在盆栽条件下研究了丛枝菌根菌（ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ ｆｕｎｇｉ,ＡＭＦ）单孢、多孢和菌根根段接种物及其寄主植物烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）、苏丹草（Ｓｏｒｇｈｕｍ ｓｕｄａｎｅｎｓｅ（Ｐｉｐｅｒ）Ｓｔａｐｆ）和三叶草（Ｔｒｉｆｏｌｉｕｍ ｒｅｐｅｎｓ Ｌ．）对ＡＭＦ Ｇｌｏｍｎｓ ｍａｃｒｏｃａｒｐｕｍ Ｔｕｌ、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｓｓｅａｅ（Ｎｉｃｏｌ＆     

利用激光微束穿刺法将GUS基因导入百脉根并获得转基因植物的研究

利用激光微束穿刺法将ＧＵＳ基因导入百脉根并获得转基因植物的研究周奕华韩厉玲王兰岚宋桂英陈正华（中国科学院遗传研究所北京１００１０１）ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＧＵＳＧｅｎｅｉｎｔｏＬｏｔｕｓａｎｄＡｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆＴｒａｎｓｇｅｎｉｃＰｌａ...     

丛枝菌根真菌对玉米和棉花内源激素的影响

在温室盆栽条件下研究了丛枝菌根（Ａｒｂｕｓｃｕｌａｒ ｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｓ,ＡＭ）真菌：Ｇｉｇａｓｐｏｒａ ｒｏｓｅａ Ｎｉｃｏｌ．＆ Ｓｃｈｅｎｃｋ、Ｇｌｏｍｕｓ ｍｏｓｓｅａｅ（Ｎｉｃｏｌ．＆ Ｇｅｒｄ．）Ｇｅｒｄｅｍａｎｎ ＆ Ｔｒａｐｐｅ和Ｇｌｏｍｕｓ ｖｅｒｓｉｆｏｒｍｅ （Ｋａｒｓｔｅｎ）Ｂｅｒｃｈ对玉米和棉花植株内源激素的影响。结果表明,ＡＭ真菌在正常供水和干旱条件下均能显著提高     

转基因烟草中Bt毒蛋白基因的表达行为

构建了高效植物表达载体ｐＢｉｎＭｏＢｃ,该载体携带超强表达复合启动子ＯＭ及Ω因子控制下的ＣｒｙＩＡ（ｃ）基因。采用根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）介导的方法转化烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）,ＥＬＩＳＡ检测表明,大多数转基因烟草中ＣｒｙＩＡ（ｃ）基因表达量均超过０．１％,最高可达０．２５５％;转基因烟草     

大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的分离及其在抗虫植物基因工程中的应用

大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂属于丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有抗虫特性。从未成熟的大豆（ＧｌｙｃｉｎｅｍａｘＬ．）子叶中提取总ＲＮＡ,然后反转录成单链ｃＤＮＡ,以此为模板,用ＰＣＲ方法扩增出大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂基因,并克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ（＋）的ＳｍａⅠ位点上。序列分析表明：克隆片段大小为６６３ｂｐ,包含了基因完整的编码序列。编码多肽由２１７个氨基酸组成,其中包括Ｎ端２５个氨基酸组成的信号肽序列,１８１个氨基酸组成的成熟蛋白序列和Ｃ端１１个氨基酸组成的液泡定位信号序列。构建了此基因的一系列植物表达载体,用于烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）、水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）、棉花（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）等作物的转化。利用棉铃虫（ＨｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａＨｕｂｎｅｒ）对经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交验证获得的转基因烟草进行了抗虫测试,结果表明,转基因烟草和对照烟草相比,具有明显的抗虫能力。     

GENUS ANTROPHYUM KAULF.FROM CHINA AND NEIGHBORING REGIONS

ＧＥＮＵＳＡＮＴＲＯＰＨＹＵＭＫＡＵＬＦ．ＦＲＯＭＣＨＩＮＡＡＮＤＮＥＩＧＨＢＯＲＩＮＧＲＥＧＩＯＮＳＸ．Ｃ．ＺＨＡＮＧ（Ｔｈｅｈｅｒｂａｒｉｕｍ（ＰＥ）,ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ,ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ,Ｂｅｉ...     

竹节花黄斑驳病毒启动了在棉花维管组织中是一个强启动子

用竹节花黄斑驳病毒（Ｃｏｍｍｅｌｉｎａ Ｙｅｌｌｏｗ Ｍｏｔｔｌｅ Ｖｉｒｕｓ,ＣｏＹＭＶ）启动子－ｇｕｓ嵌合基因和ＣａＭＶ３５Ｓ－ｇｕｓ嵌合基因通过根癌土壤杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ Ｔｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）ＬＢＡ４４０４介导分别转入棉花（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ ｈｉｒｓｕｔｕｍ Ｌ．ｃｖ．Ｊｉｎｇｍｉａｎ７,Ｊ７Ｇ）,诱导再生了棉花转基因植株。Ｇ     

双价抗虫基因陆地棉转化植株的获得

利用根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ（ＳｍｉｔｈｅｔＴｏｗｎｓｅｎｄ）Ｃｏｎｎ）介导法将含有豌豆外源凝集素（ｐｅａｌｅｃｔｉｎ,ＰＬｅｃ）基因和大豆Ｋｕｎｉｔｚ型胰蛋白酶抑制剂（ｓｏｙｂｅａｎＫｕｎｉｔｚｔｒｙｐｓｉｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒ,ＳＫＴＩ）基因的双价抗虫基因植物表达载体ｐＢｉｎＬＫ用于陆地棉（ＧｏｓｙｐｉｕｍｈｉｒｓｕｔｕｍＬ．）栽培品种“新陆早１号”、“新陆中２号”、“冀合３２１”和“辽９”的转化。棉花无菌苗下胚轴经过与根癌农杆菌共培养、卡那霉素抗性愈伤组织的筛选、体细胞胚状体的诱导和植株再生等阶段成功地获得了双价抗虫基因陆地棉转化植株。ＮＰＴⅡ的ＥＬＩＳＡ检测、ＰＣＲ鉴定和ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测证实,两个外源抗虫基因同时存在于再生植株基因组内。抗虫测试结果表明,转基因棉株对棉铃虫（ＨｅｌｉｏｔｈｉｓａｒｍｉｇｅｒａＨｕｂｎｅｒ）幼虫具有较强的抗性     

人基因使猪减少脂肪

美国农业部（ＵＳＤＡ）（Ｂｅｌｔｓｖｉｌｅ,ＭＤ）的研究者采用ＧｅｎｅｍｅｄｉｃｉｎｅＩｎｃ．’ｓ（ＴｈｅＷｏｏｄｌａｎｄｓ,ＴＺ）公司的胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）基因培育出体脂减少的猪。此项研究将ＩＧＦ－１转基因猪与导入生长激素（ＧＨ）基...