用土壤杆菌确立了玉米性状转化技术

日本烟草产业(JT)遗传育种研究所研究员石田祐二等利用植物病原菌根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefacience)确立了玉米性状转化技术,于7月15日在东京召开的组织培养学会发表。 以前利用土壤杆菌的基因导入技术(Agrobacterium法)是适用于向双子叶植物中导入基因的简便的导入法。但是不适用于向单子叶植物中(Agrobacterium不能作为宿主)导入基因。JT公司1994年开发了世界第一个使用土壤杆菌向单子叶植物水稻中稳定地导入基因的技术。这次确认用同样的方法也能向玉米中     

首次确立使用土壤杆菌的水稻性状转化技术

日本烟草产业遗传育种研究所研究员樋江井祐弘、主任研究员小鞠敏彦等使用根癌土壤杆菌进行水稻性状转化获得成功,并确立了稳定的基因导入技术。使用根癌土壤杆菌确立单子叶植物的性状转化技术在世界还是首创。 目前水稻的性状转化使用电击法等进行。但该法只适用于从原生质体可再生植株的品种,另外还有在     

日本制纸公司将向植物导入多种基因技术在海外的独占权转让给英Zeneca公司

《日经生物技术》１９９９年６月７日第１５页报道：日本制纸公司６月３日宣布,将该公司开发的向无标记型植物导入多种基因的技术“ＭＡＴ载体系统”转让给英国Ｚｅｎｅｃａ公司。转让给英国Ｚｅｎｅｃａ公司的权利是不包括树木和水稻的,除日本以外其他地区植物的独立实...     

用新基因导入法转化玉米性状

英国Zeneca公司的美国Zeneca公司(特拉华州Wilington)的研究组开发使用碳化硅结晶的基因导入法,转化玉米性状获得成功。 据Zeneca公司负责广告的Meredith McHone-Pierce说,该公司的ICI Seeds Research Center的研究组将标记基因插入玉米,培育出有完全结实能力的基因重组体。将来打算导入昆虫病原菌Ba-     

诱导根癌土壤杆菌vir区基因表达信号分子的构效研究

以根癌土壤杆菌为介导的外源基因转化系统是目前应用最为广泛和有效的植物基因转化系统。根癌土壤杆菌D质粒毒性区。irA、virB、。irC、。irD。。irE、。irG6个基因位点,在外源诱导性信号分子的作用下,表达出转移DNA（T－DNA）复合物,整合人植物细胞核基因组中。利用根癌土壤杆菌这种天然的转化机制,已获得双子叶转基因植株。但单子叶植物难以被根癌土壤杆菌转化,某些研究者认为这是由于单子叶植物缺乏促使根癌土壤杆菌产生趋化运动以及诱导。ir区基因表达的信号分子［‘」。我们从幼穗分化期至抽穗扬花期水稻中分离获得2种高效…     

导入几丁酶基因育成抗葡萄白粉病的葡萄

日本《农业技术》,１９９９年５４卷３期第４Ｎ～５Ｎ页报道：葡萄以白粉病为主的、黑痘病、灰霉病、霜霉病等各种丝状菌病,是葡萄栽培的大问题。对此,日本果树试验场的山本等把取自水稻的几丁酶基因导入葡萄,育成抗葡萄白粉病的葡萄。方法是从葡萄品种‘新玫瑰香’的培养细胞育成不定胚,与具有水稻几丁酶基因（ＲＣＣ２）的土壤杆菌共培养,用抗菌素选择得到的重组不定胚再分化成植物体,将几丁酶基因导入葡萄,对获得的许多再生植物体驯化、育成。首先,用ＰＣＲ法确认已导入基因,从中选择了８个性状转化葡萄个体作扦插苗,将约１０…     

基因重组改良水稻

日本《农业技术》,１９９９年５４卷６期第４４３页报道：日本三重县农技中心向基因导入难的水稻品种“越光”导入外来基因取得成功,概率高达２０％以上。所用的载体是由来于通常使用的ＰＢ１０１的Ｐ１Ｇ１２１Ｈｍ（具有匀霉素抗性、内含子ＧＵＳ基因）。其要点是在短时期（约３周间）诱导分裂旺盛的细胞,感染土壤杆菌。获得的基因重组水稻生长健壮,结实正常,自殖的第１代种子也能向导入性质的后代遗传。利用这种方法,导入绿色萤光蛋白质（ＧＦＰ：ＧｒｅｅｎＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ）基因,照射近紫外线时,无论水稻…     

水稻双元细菌人工染色体载体系统转化体系的建立

普通双元载体己被广泛碰用于农杆菌介导的植物转化,但这类载体通常只能转移5～20kb的外源DNA片段;而双元细菌人工染色体（BIBAC）载休可以弥补普通双元裁体的不足,通过它已在烟草、番茄等双子叶植物中实现了大片段DNA（150kb）的转移。BIBAC载体在单子叶植物转化中的应用尚未见报道。面于单、双子叶植物间以及大、小片段转化间的转化体系存在明显差异,常规的农杆菌介导的水稻转化体系不能适应BIBAC系统转化的要求。因此,建立适于BIBAC系统的水稻转化体系是十分必要的。通过比较不同的受体材料,不同的预培养、其培养条件,不同的去除农杆菌及选择阳性愈伤的方式等对转化效率的影响,建矿了适合水稻BIBAC系统的转化体系。该体系的技术要点包括：以水稻品种H1493为转化受体：以含毒性辅助质粒pCH32的LBA4404菌株（HP4404）为侵染菌株;预培养的培养拱pH5．6：以N6A代替AAM悬浮农杆菌：侵染菌液浓度为OD600=1．0;共培养温度为24℃;采用过渡（Resting）培养除去农杆菌;采用二步法进行选择等。基于PCR检测、Southern印迹分析的结果表明,BIBAC载体所携带的插入片段及标记基因已整合到转化植株的基因组中。这个体系的建立为在水稻中利用BIBAC系统进行大片段DNA转化奠定基础。     

农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展

农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段,其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点,转化机理以及对单子叶植物转化的研究进展作一概述。     

农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展

农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段, 其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点,转化机理以及对单子叶植物转化的研究进展作一概述     

DNA直接导入植物细胞

现在已经有一系列体细胞技术和分子技术来补充常规的植物育种技术。外源基因的引入和表达现在被用于:调整植物生理和发育的一些基本过程;向植物引入商业上重要的性状如抗虫、抗除草剂等,插入一些在体细胞杂交时有用的可选择的显性标记基因。一些DNA直接转移的技术已经建立,包括将DNA用化学法或电激法导入分离的原生质体中,及用注射和高速离子将DNA导入整个组织中。DNA直接转移法适用于稳定和瞬间基因表达研究,并且运用了各种各样的载体,包括那些用作基因克隆的载体。虽然用DNA直接转化法时稳定转化的频率相当低,但是它适用于那些对农杆菌转化无效的植物,尤其是单子叶植物。     

利用基因重组技术培育抗病毒甘薯

日本《农业技术》,１９９９年５４卷４期第７Ｎ～１１Ｎ页报道：甘薯带状粗皮病严重危害甘薯,向甘薯导入ＳＰＦＭＶ－Ｓ病毒外壳蛋白质基因,可以培育带状粗皮病抗性甘薯。向植物导入基因的方法,一是利用农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）,在质粒上对夹于２５ｂｐ的Ｔ－ＤＮＡ两末端序列的目的基因编入植物染色体;二是使用电激、聚乙二醇（Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、粒子枪等直接导入。对于甘薯基因重组的研究情况概要如下。１　向甘薯导入ＳＰＦＭＶ－Ｓ外壳蛋白质基因１．１　甘薯基因重组方法。一是Ａｇｒｏｂａ…     

基因枪在水稻遗传转化中的应用及其转化技术的优化

1983年Zambryski等人用根瘤农杆菌介导法进行烟草基因转移,获得了世界上首例转基因植株.随后,应用DNA直接导入技术如电击法(electroporation)和PEG介导法(PEG—mediated)成功地获得了转基因水稻植株.近年来,随着基因枪技术的建立和发展,水稻遗传转化成功的报道逐年增多.目前基因枪技术在植物遗传转化中的应用超过了根瘤农杆菌介导和其它转化方法的应用.这是因为基因枪转化技术不受植物种类的限制,不需要以原生质体作为转化的受体,可以将外源基因直接导入细胞、组织或器官,因而克服了根瘤农杆菌     

重组植物培育法的开发

日本制纸公司成功地开发了不残留标识基因(标记基因)而可导入多重基因的植物基因重组技术。首先用烟草确立了该技术,接着又用白杨高效率地获得性状转化体,这项基因导入技术被命名为MAT(Multi-Auto-Transformation)载体系统。日本制纸公司将其技术应用于白杨和桉树、松树等制纸用树木的重组育种。该公司用基因重组抑制木质素的生物合成系,进行树木育种(适合纸浆化的),要抑制木质素生物合成系,进行单基因操作是不够的,所以开发了多重基因导入法。     

水稻遗传转化研究进展

水稻遗传转化的主要方法,包括农杆菌介导法,基因枪法,电激法,PEG法等,论述了用于水稻转化的各种外植体,影响水稻遗传转化和植株分化的各种因素,各种标记基因及相应的选择方法和外源基因在转基因水稻中的遗传规律,比较了常用启动子在水稻中的表达强度,一些已转移到优良水稻品种中的有益农艺性状基因,如抗病、抗虫、抗除草剂等,介绍了它们在水稻品种改良中所发挥的作用。     

将双元载体的使用权转让给Calgene公司

荷兰的植物生物技术企业MOGEN International公司将植物基因重组的双元载体使用权转让给美国Calgene公司。荷兰Leiden大学教授Robert Sohilperoort研究室开发了这个系统,MOGEN公司获得独占使用权。据该公司宣称,这个系统的专利最近在美国得到认可,10月23日获得欧洲专利。据说也向日本提出申请。广泛用于植物特别是双子叶植物基因重组的Ti质粒是巨大的质粒,在编入有用基因时费时。因此,把编入有用基因的部位和向植物细胞导入有用基因所必需的部位分为2个的系统是双元载体(binary vec-     

无载体主干序列的bar和cecropin B 基因表达框共转化水稻

基因枪等直接转化法可将去除质粒载体主干序列的外源基因表达框导入植物基因组,消除质粒主干序列对植物基因组的影响,同时由于转基因分子较小,比较容易实现多个基因的共转化,在植物基因工程育种上有重要的应用价值,研究了基因枪介导外源基因表达框（包括启动子、基因开放阅读框和终止子）转化水稻的影响因素和转基因的整合模式,结果表明：（1）基因枪介导外源基因表达框转化水稻的频率约在0.1%～0.5%之间,非选择标准基因与选择标记基因的共转化频率约为50%～60%,增加基因表达框DNA浓度可提高转化率。相同基因构建物对不同品质水稻的转化率不同,基因构建物的侧边序列对基因枪转化的品种差异可能具有重要影响。（2）非选择标记基因cecropin B表达框在水稻基因组内整合模式简单,仅有1～3个拷贝;筛选标记基因bar表达框却比完整质粒转化后的整合模式复杂得多,插入拷贝数在4～14个之间,线形基因表达框的游离DNA末端和CaMV 35S启动中子重组热点介导的转基因重组可能是导致bar基因表达框复杂整合的重要原因。     

用甘蓝螟确认导入BT毒素基因的水稻耐虫性

植物工程研究所培育导入并表达苏云金芽孢杆菌(BT)杀虫蛋白δ内毒素转基因水稻获得成功,用导入基因的第二代水稻叶确认了对水稻害虫甘蓝螟的耐虫性。摄食了重组水稻叶的甘蓝螟阻碍生长或死亡。δ内毒素可作为微生物农药BT 剂的杀虫成分。含有该编码基因的耐虫性植物,在日本开发还是首次。详细情况在10月18～20日名古屋召开的日本育种学会上发表。     

三菱油化学公司用基因电脉冲导入法加速氨基酸生产菌的分子育种

日本三菱油化学公司中央研究所使用电脉冲法,确立了短时间内将基因导入工业上用来生产氨基酸、核酸等的棒型细菌黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)的方法,并将于下月上旬在名古屋召开的农艺化学会上发表。使用了电脉冲法,只需2～3天就能获得重组菌,使棒型细菌的分子育种所需时间大幅度缩短,而且非常省事。向棒型细菌导入基因以前使用的方法必须溶解细胞壁,然后用药剂导入基因(原生质体法)。因再生细胞壁比较费时,获     

黄瓜的重组育种

在世界占首位的种苗公司、埼玉原种育成会利用基因重组技术培育黄瓜种子,并从2年前就与植物工学研究所合作。在4月召开的第81届日本育种学会联名发表了黄瓜组织培养的再生和使用土壤杆菌导入外源基因的研究成果。向黄瓜导入基因再生植物体的技术基础研究基本结束。据植物的工程研究所讲,还没有互换共同进行育种的正式合同,正在观察事业计划调制时间表。如签订合同,植物工程研究所对黄瓜进行基因操作,提供母本,埼玉原种育成会决定使其母本与手中?娴哪