~(60)Coγ-线对人血淋巴细胞DNA和RNA合成能力的影响

T例人血在体外接受~(60)Coγ-_线照射后进行培养,用~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)和~(14)C-尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)作掺入实验,以反映DNA和RNA的合成能力。应用滤膜法收获细胞,液体闪烁计数器测定双标记样品,发现γ-线对DNA和RNA合成的影响有一定规律,即随照射剂量的增加,~3H和~(14)C掺入的放射性呈指数下降。经统计处理分别得到照射剂量和~3H-TdR、~(14)C-UR掺入的放射性计数的对数值两变量间的直线迥归方程。10拉德的照射导致~3H—TdR和~(14)C-UR掺入的放射性计数显著性减少,RNA比DNA合成受抑更明显。     

~(60)钴γ线对骨髓、脾脏造血细胞DNA和RNA合成能力的影响

~(60)钴γ线照射离体的人体骨髓细胞及豚鼠骨髓、脾脏细胞,观察~3H-TdR及~(14)C-UR放射性渗入受抑的情况。实验发现辐射引起渗入活性下降随剂量增高而愈剧,骨髓细胞比脾脏细胞敏感,DNA合成比RNA合成代谢敏感。10拉德剂量导致入骨髓细胞DNA合成能力显著下降。200拉德引起豚鼠骨髓细胞放射性渗入降低48％。     

14MeV快中子和~(60)Coγ线对人血细胞脱氧核糖核酸(DNA)合成的影响

应用人血在体外接受14MeV快中子和~(60)Coγ线照射后进行培养,以~3氢-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)作参入实验以反映DNA合成。采用液体闪烁测量法和放射自显影法发现两种射线对DNA合成的影响呈一定的规律性,即随照射剂量的增加,合成率显著降低。经统计处理分别得到中子和γ线的照射剂量和~3H-TdR参入的放射性脉冲数(或标记百分数)的对数值两变量间的直线回归方程,在中子剂量100～400拉德的范围内,中子/γ的R.B.E.为1.45～1.98。     

14Me V快中子和~(60)Coγ线对人血细胞脱氧核糖核酸(DNA)合成的影响

应用人血在体外接受14MeV快中子和~(60)Coγ线照射后进行培养,以~3氢-胸腺嘧啶核苷(~8H-TdR)作参入实验以反映DNA合成。采用液体闪烁测量法和放射自显影法发现两种射线对DNA合成的影响呈一定的规律性,即随照射剂量的增加,合成率显著降低。经统计处理分别得到中子和γ线的照射剂量和~8H-TdR参入的放射性脉冲数(或标记百分数)的对数值两变量间的直线回归方程,在中子剂量100～400拉德的范围内,中子/γ的R.B.E.为1.45～1.98。     

细胞松弛素B对人胚肺二倍体细胞SL_7和肿瘤细胞CNE、LTEP-78增殖周期的不同影响

CB(1.5微克/毫升)处理正常二倍体细胞SL_7和人肺鳞癌细胞LTEP-78及鼻咽癌细胞CNE,以~3H-TdR掺入和DNA含量变化为指标,观察十天内,核复制动态。SL_7细胞~3h-TdR掺入进行性下降至0,细胞周期被迫阻断(非时相特异性阻留),一部分细胞成为双核。肿瘤细胞LTEP-78和CNE,~3H-TdR掺入受一定程度抑制,但细胞周期移行可以持续,结果,产生一部分多核细胞和染??色体多倍化。CB引起的微丝束解聚与~3H-TdR掺入下降之间,未见到相关性。     

辐射对三种类型的淋巴细胞DNA及RNA合成能力的影响

正常人外周血淋巴细胞,包含不同的亚群,分别执行细胞免疫、体液免疫及维持免疫平衡等重要功能。辐射损伤后免疫功能受抑制。利用同位素双标记技术,以~3H-TdR及~(14)C-UR示踪,观察不同剂量~(60)Co-Υ线照射后,血中三种不同类型的淋巴细胞,在体外培养转化过程中DNA及RNA的合成能力,比较两种标记化合物在不同类型淋巴细胞中的掺入率;并依据辐射对三种不同类型淋巴细胞中,DNA及RNA两种生物大分子合成的受抑程度,反映血     

介绍细胞共培养的两种方法

本文设计了两种共培养装置:微孔底膜套皿和循环培养,观察了培养的小牛肺动脉内皮细胞(PAEC)和肺动脉平滑肌细胞(PASM)在上述装置中的生长情况,并用套皿法观察了两者共培养对~3H-TdR掺入的影响。结果发现,PAEC和PASM在上述装置中生长良好,两者共培养时,PAEC的~3H-TdR掺入明显降低(与对照组相比p<0.05),而PASM的~3H-TdR掺入明显升高(与对照组相比p<0.01)。上述结果表明:本文设计的两种装置可用于细胞共培养,以研究细胞间的相互调节关系。     

大白菜花药培养中花粉早期DNA的合成

应用显微放射自显影技术,在大白菜(Brassica pekinensis Rupr.)花药离体培养初期观察了~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入花粉核及其DNA复制类型。花粉去分化进入第一次孢子体分裂主要发生在DNA合成的单核和非均等分裂的营养核的花粉粒中。 实验证明花粉的DNA合成在低温预处理过程中已经开始,离体花药培养后,大大促进花粉DNA的合成。花粉单核在培养后24小时~3H-TdR掺入达到高峰,花粉有丝分裂产生两个均等子核的最大数量是在培养后48小时。 讨论了花药体细胞组织——绒毡层和药内壁对花粉核DNA合成的影响。     

~(60)Co γ线对肿瘤病人T、B淋巴细胞转化过程中三种大分子合成的效应

应用植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)激活淋巴细胞,以氢-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)、碳一尿嘧啶核苷(~(14)C-UR)和碳-缬氨酸作掺入实验,以分别反映T、B淋巴细胞转化过程中的DNA、RNA和蛋白质的合成能力。共测定了50例肿瘤病人,与正常人比较:T淋巴细胞转化能力明显降低,B淋巴细胞转化能力显著增高。经过一个疗程的~(60)Co照射后T细胞转化比照前又显著降低,B细胞转化比照前又显著增高,三种大分子合成都表现同样的规律,反映了辐射抑制T淋巴细胞DNA和RNA合成,相反地刺激了B淋巴细胞的DNA、RNA和蛋白质的合成。以上的辐射效应随照射剂量和照射野的增加而愈益明显。     

钙调素拮抗剂小柏胺衍生物对成纤维细胞增殖和功能的影响

为了研究钙调素拮抗剂EBB对成纤维细胞增殖和功能的影响,我们观察了经EBB作用后成纤维细胞的生长曲线、~3H-TdR掺入、钙调素水平的变化以及细胞增殖周期中DNA的改变和~3H-脯氨酸掺入。结果表明EBB直接抑制细胞增殖,使钙调素水平下降,DNA合成受阻,并使细胞停滞于生长周期中的G_0+G_1期。另外,胶原合成也受到阻抑。     

甲2巨球蛋白对辐照细胞的保护效应

用~3H—TdR掺入办法观察电离辐射对培养的人成纤维细胞的影响。在0—500cGy钻-60γ射线照射剂量范围内,细胞~3H-TdR掺入计数与照射剂量呈线性关系。y=33745.4e~(-0.0036×)。低浓度α_2M对细胞~3H-TdR掺入没有影响,高浓度α_2M能抑制细胞~3H-TdR掺入。4×10~5细胞经钻-60γ射线500cGy照射后加α_2M制剂,细胞~3H-TdR掺入计数与不照射对照组相比有明显升高(P<0.05)。在照射前加α_2M制剂与对照组相比无明显差别。     

在甜椒(Capsicum frutescens L.)花药培养中~3H-TdR掺入的放射自显影

用甜椒(Capsicum frutescens L.)的两个材料(旅大×黄金勋章),茄门进行花药组织培养。前者的诱导率是13.6%,后者的诱异率是3%。为了了解~3H-TdR在二者中的掺入途径有何差异,所以做了~3H-TdR掺入的放射自显影观察。初步观察有以下几种现象: (1) 旅×黄从3—60小时都有被标记的现象,其中以3—24小时为最多,12小时为标记高峰。在12小时以内,花药表皮、纤维层、绒毡层标记很多。(2) 茄门掺入慢,掺入量也较少,标记高峰不明显。(3) 12小时以后,两种材料的小孢子有少量标记,一般在核上。此时,表皮、纤维层、绒毡层的标记有急剧下降的现象。(4) 甜椒的~3H-TdR掺入途径,可能由表皮向纤维层、绒毡层、小孢子方向进行,与~3H-cAMP结果不一致,药隔维管束部分没有标记。     

骨髓造血细胞动力学研究——小鼠骨髓造血细胞细胞周期的测定

五十年代成功地解决了核乳胶和核素标记化合物的制备,为放射自显影术在生物学研究中的应用创造了必要的条件。1955年Hughes用氚标记胸腺嘧啶核苷(以下简称_3H-TdR)成功(Cronkite et al., 1959),它是参与胞核DNA合成代谢的特异性大分子核苷类标记化合物,为细胞动力学研究提供了新的较好的试剂。但计数标记的核分裂象或标记的细胞数工作量较大。1956年Friedkin等成功地用~14C-TdR先后掺入到鸡胚羢毛-尿囊膜、鸡骨髓、胸腺、睾丸、肺、小肠粘膜、兔胸腺等组织DNA中。以后~14C-TdR广泛用于细胞动力学的研究。它比用~3H-TdR简便、省时,对环境污染易于监测(Cronkite     

氧化修饰脂蛋白刺激人动脉平滑肌细胞DNA合成

动脉平滑肌细胞(SMC)是动脉粥样硬化(As)斑块中的主要细胞, 它的增殖在As的形成过程中极为重要. 在建立人主动脉SMC体外培养法的基础上, 通过 ³H-TdR掺入实验观察了人低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)及高密度脂蛋白(HDL)和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人SMC DMA合成的影响.结果发现,HDL对 ³H-TdR掺入SMC DNA无影响(P>0.05); LDL和VLDL ³H-TdR掺入量明显增加(P<0.05);OX-LDL, OX-VLDL及OX-HDL均使 ³H-TdR掺入DNA显著增加(P<0.01).结果表明,LDL和OX-LDL, OX-VLDL及OX-HDL均能刺激SMC DNA合成,促进SMC增殖.     

渗透胁迫下小麦叶片蛋白质合成与降解的示踪研究

渗透胁迫降低了叶片、特别是生长叶片蛋白质中固定~(14)CO_2及由根系吸收的~(14)C-Gly的掺入率,但同等程度胁迫处理,抗旱品种的掺入率降低幅度小于敏感品种;轻度胁迫后复水,抗旱品种生长叶蛋白质的放射性高于对照,而敏感品种仍低于对照。Poly(A~+)-mRNA的体外翻译测定证明,胁迫时蛋白质合成能力降低的主要原因是Poly(A~+)-mRNA翻译活性的降低。渗透胁迫也促进了叶片蛋白质降解,但与蛋白质合成不同,在成熟叶片中表现得更突出。     

白细胞介素1β抑制心肌成纤维细胞胶原合成并促进其分解

本文应用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-thymidine, 3H-TdR)掺入法及3H-脯氨酸(3H-proline, 3H-Pro)掺入法观察白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)对Spague-Dawley乳鼠心肌成纤维细胞DNA及胶原合成的影响,并用明胶酶谱法和Western blot检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs) MMP-2、 MMP-9活性及MMP-2和MMP-9蛋白表达,用RT-PCR检测MMP-2、 MMP-9的mRNA表达.结果显示:(1)0.1、1、10、100ng/mL的IL-1β作用于细胞24h后,各组3H-TdR掺入量明显较对照组低(P<0.05, P<0.01),同时3H-Pro掺入量明显降低(P<0.05, P<0.01);而0.01ng/mL的IL-1β作用于细胞后,对3H-TdR掺入量和3H-Pro掺入量无明显影响.(2)不同剂量(0.01～100ng/mL)的IL-1β均刺激MMP-2和MMP-9活性升高,并呈剂量依赖性.IL-1β增加MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05, P<0.01).(3)IL-1β(0.01～100ng/mL)刺激MMP-2和MMP-9 mRNA表达升高(P<0.05, P<0.01).以上结果表明,IL-1β通过减少心肌成纤维细胞的细胞分裂来降低胶原的合成,同时促进MMP-2和MMP-9的转录及转录后的表达来促进胶原的分解,提示其在心肌重塑过程中起一定作用.     

血管活性肠肽的新作用

血管活性肠肽(VIP)可刺激培养的神经母细胞进行有丝分裂,促进突起的萌生、加强细胞的存活。用从大鼠15.5日胚的颈上神经节(SCG)分离出的胚胎神经母细胞进行细胞培养,发现VIP可使每份培养细胞的~3H-TdR掺入增加一倍,说明神经母细胞的DNA合成增加。这种增加是由于大量神经母细胞转     

甲硝哒唑对脆弱类杆菌作用机理的研究

采用同位素标记前体体外掺入技术和透射电镜观察方法从DNA. RNA及蛋白质水平上进行了甲硝哒唑对脆弱类杆菌作用机理研究。实验表明:甲硝哒唑几乎能完全抑制~3H-TdR掺入脆弱类杆菌,对~3H-亮氨酸的掺入也具明显的抑制作用,未观察到对RNA合成的影响。透射电镜下观察到,随着甲硝哒唑浓度增加,菌体形态发生明显的改变。     

小鼠淋巴细胞转化微量试验方法的研究

本文报导了小鼠淋巴细胞转化的微量试验方法及其最适转化条件。本实验采用微量培养技术及~3H-TdR掺入法,测定了小鼠脾细胞对 PHA、ConA 的转化水平,并探讨了培养液成分,有丝分裂素浓度、~3H-TdR 掺入时间等因素对小鼠脾细胞转化的影响,获得了比较稳定可靠的实验结果。     

应用液体闪烁计数器测定微量血液淋巴细胞转化的方法

本文介绍关于微量血液淋巴细胞转化的放射性测量法:指尖采血0.05毫升,全血培养37℃,94小时,收获细胞前16小时加入氚-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)0.6微居里。培养结束时洗脱培养液中游离的放射性,然后用三氯醋酸提取细胞中的DNA,用液体闪烁计数器测定其中所含的~3H-TdR 的放射性,即可反映淋巴细胞转化。在125人次的测定中,初步得出输血者淋巴细胞转化的正常值,并发现某些血液病人及肿瘤病人的淋巴细胞转化能力明显降低,电离辐射对它亦有抑制作用。