一种调节超薄切片机标本块与刀距的简易装置

在使用超薄切片机时,调节标本块与刀之间的距离时往往会遇到一些困难。开始切片时,如舉两者之间距离过大,会造成切片机之标本臂往返运动而切不到切片;反之,如果把标本块的顶端调节到超过刀口的位置,则又会因一刀切得太厚而损坏了刀口和标本。为了解决这个问题,我们参考了LKB修块机等有关资料,制作了一个简易的照明装置(图1a)。该     

石蜡切片刀的改进研究

以手术刀片代替传统的切片刀,通过肝、肾、脾、肺、心肌、气管等器官所作的对比性切片试验表明,该切片刀不仅达到了原有切片刀的性能,还能做1—3微米半薄切片。染色后在10×10、10×40显微镜下,整个切片完整无损,厚度均匀,各类细胞结构清晰易辨。该切片刀不需磨鐾,省时省力,操作简便,经济实用。特别适合基层实验室的组织及病理学的教学科研工作。     

冰冻切片的H&E和LFB染色技术的优化及其在自身免疫疾病中的应用

该文旨在探讨基于冰冻切片样品进行苏木素–伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和快蓝(luxol fast blue,LFB)染色方法的优化及其在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)组织病理分析中的应用。取正常及EAE建模后的C57BL/6小鼠脊髓样品各5份,每份脊髓样品一分为二,分别制成冰冻切片和石蜡切片样品,通过设置不同优化条件对这两组切片进行HE和LFB染色,比较两组切片染色的结果。石蜡切片经过HE染色和LFB染色后细胞的形态结构和组织结构清晰,冰冻切片HE染色和LFB染色后细胞结构清晰度几乎和石蜡切片一致,进一步将该方法应用于分析β-arrestin2基因敲除对于小鼠EAE发生中的病理变化,发现能够很好地重复出基因敲除加重EAE疾病这一现象。冰冻切片染色优化后,基于冰冻切片进行HE染色和LFB染色可以达到石蜡切片类似的效果,并且实验过程简洁快速,大大缩短了实验时间,提高了效率,可以较好地应用于分析自身免疫疾病病理变化,该优化方法将在自身免疫疾病特别是多发性硬化动物模型的研究中有广泛的应用。     

怎样使磨刀石磨平

切片刀是显微切片中非常重要的工具。如何保持切片刀的锋利,除了加强对切片刀的保护和熟练的磨刀技术外,磨刀石的平滑与否也是非常重要的。一般市售的磨刀石外观上平滑无疵,但加上滑润剂就显出高低不平了,如果用这样的磨刀石磨切片刀,其刀刃不但不会锋利反而会把刀口磨成弧线,影响切片。所以新磨刀石必须经过磨平加工。方法是将金刚砂(研磨粉,分800、1000、1400号     

玻璃板快速磨刀的改进方法

玻璃板快速磨刀的改进方法长期以来组织切片刀在制片方法中是不可缺少的工具，磨刀是从事制片技术的一项很重要的基本技术。切片刀的锋利也是提高制片质量的保证。传统性多样型号油石磨刀方法，国产和进口自动磨刀机磨刀法，都未真正解决切片刀的锋利程度问题。为了解决这...     

低能离子束辐照植物样品质量损失研究

采用50 keV的N+对100 滋m厚的芸豆切片和75 滋m厚的Mylar(聚乙烯对苯二酸酯)高分子膜辐照,辐照剂量从1×1015 ions/cm2到1×1017 ions/cm2。利用高灵敏度的天平测量样品辐照前后的质量,得到了辐照后样品的质量变化。结果表明,当离子剂量大于3×1016 ions/cm2时,切片样品的质量明显减少,并且质量损失随辐照剂量增加而增加;但Mylar膜样品在辐照剂量达到7×1016 ions/cm2时仍没有测量出明显的质量变化。由测量的质量损失计算出50 keV的N离子轰击切片样品时溅射产额约为560 atoms/ion。结合植物样品的结构和分子组成特性对这种辐照引起的高溅射产额现象作了分析。     

定量电子束显微分析中生物薄样品的质量损失

对多种生物薄样品和标样进行电子探针X射线能谱显微定量分析,分别以电子束轰击后样品的O Kα峰计数和介于4.2-6.2keV区间的连续X－射线计数变化监测质量损失,结果显示样品O Kα峰计数减少幅度大于连续X－射线计数减少幅度,在相同的分析条件下,各样品质量损失程度不相同（P＜0.05）。培养肝癌细胞冷冻干燥超薄切片、明胶冷冻干燥超薄切片、BSA薄膜、氨基塑料超薄切片、红细胞冷冻干燥超薄切片和卵黄高磷蛋白薄膜样品的质量损失分别为33％、28％、26％、18％、13％和13％,以上结果提示：以O Kα峰计数的减少监测样品的质量损失较敏感,在进行生物薄试样定量EPMA时应对各样品的质量损失进行相应校正。     

辣根过氧化物酶标记与样品后染色联用在微观脑联结组学中的应用

三维电子显微成像(volume electron microscopy)是微观尺度脑联结组学(micro-brain connectomics)研究的主要研究手段.自动卷带式连续超薄切片-收片系统(automated tape-collecting ultramicrotome,ATUM)及扫描电镜序列成像系统的联合应用,是三维电镜成像中一种重要的技术手段.该方法利用卷带式收集超薄切片,形成完整的样品切片库,进而在后续成像中形成样品三维电镜成像数据库.根据ATUM系统镜外切片-收片、保留样本切片库等特点,对相应的生物样品制备方法进行改进,包括树脂配方及树脂渗透方式改良,神经元细胞膜辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)稀疏化标记与样本切片库后染色联用——从而很大程度上减少样品切片的褶皱率,并使得在整体高衬度的样品图像库中高效地识别神经元身份成为可能,最终获得符合脑联结组学所需的高质量成像数据.     

玻璃刀刀槽接缝的密封

因玻璃刀价格便宜,制作简单,又容易获得非常锋利的刀刃,故在超薄切片中广为使用。用玻璃刀切片,一般都要在它的背部装上一个被称之为刀槽或水槽的不漏水的小容器,它通常用胶带缠绕而成。用胶带制成的刀槽必须将它与玻璃刀的接缝密封,否则就会漏水。密封剂一般为石腊,但用石腊密封必须事先融化,融化时还会污染空气,而且密封质量欠佳,容易漏水,对技术不熟练者尤其如此。尽管这样,国内许多电镜室或实验室还在继续使用,因此在电镜技术日新月异发展的今天,改进刀槽密封方法就显得十分必要。现将我们多年来采用的密封方法介绍如下:     

长江刀鲚与池塘人工养殖刀鲚性腺发育的初步观察

2006～2008年间采集了长江刀鲚(Coilia nasus)及池塘养殖刀鲚共104尾,对其生物学指标进行了测定,并对不同月份、不同江段的刀鲚性腺发育状况进行了初步比较观察。组织切片观察显示:在江阴段长江刀鲚从4～7月份卵巢从Ⅱ期发育到Ⅳ期;同一时期(7月份)安庆段刀鲚精巢和卵巢的成熟系数略高于江阴段,但差异不大。池塘养殖雄性刀鲚在6月、9月基本处于增殖期,精小叶腔中存在一定量的精子细胞,但未见性成熟个体。对于雌性,在12月份卵巢处于Ⅱ期,而6月份卵巢能发育至Ⅳ期晚期,此时卵巢的成熟系数显著高于同年5月份江阴长江刀鲚和7月份安庆段刀鲚。综合组织切片结果认为:长江刀鲚的性腺发育成熟度可能与所处江段关系不大,而不同洄游群体的性腺发育情况可能相同;在人工池塘养殖状态下,部分刀鲚的卵巢至少能够发育到Ⅳ期晚期。     

一种重包埋方法的应用

目前普遍使用的简单定向方法,是先在包埋对使样品定向,以后再将聚合好的包埋块切一张大面积的1—2微米的厚切片,经光学显微镜检查找出所需要的部位,做好标记,然后对照厚切片修整样品再作超薄切片。Grimley 曾报道一种简单的重包埋方法,将包埋的组织块简单地切成一张1—8微米的厚片,贴在盖玻片上染色后,在光学显微镜下找出需要进行电镜观察的部位,标上记     

奶牛胃内投放磁铁的试验观察

因误食铁物所引起的创伤性心包炎、网胃炎是奶牛的一种常见病。该病一般药物治疗疗效差,死亡率高,影响牛奶生产。1969年,在无产阶级文化大革命推动下,我们和中国科学院物理研究所合作,进行了奶牛胃内投放磁铁,吸附误食铁物的试验,研究投放磁铁后能否防止铁物穿透胃壁减少炎症和对奶牛消化、生殖、泌乳等机能的影响。     

两种方法制备的脑组织切片激光共聚焦显微镜成像效果的比较研究

该文比较研究了振动切片法与冰冻切片法制作的脑组织切片的质量及其激光共聚焦显微镜成像的效果。振动切片法通过灌流固定、取小鼠脑、琼脂糖包埋后利用振动切片机连续冠状切片。冰冻切片法通过蔗糖脱水、OCT包埋液氮骤冷后利用冰冻切片机连续冠状切片。制备的脑组织切片进行免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察成像效果。结果表明,与冰冻切片相比,振动切片法简单快速,且制片质量较高,脑组织切片无冰晶形成,抗原免遭破坏,组织结构较完整,更适用于脑组织样品的激光共聚焦显微镜的成像观察。     

介绍一种半薄切片定位样品的办法

介绍了一种半薄切片定位样品的方法。此法与前人的方法不同之处在于位于载玻片之上被重新包埋于塑料环内的切片与载玻片的分离方法。具体操作步骤是：切片被包埋聚合好后,立即从60～65 ℃温箱内被转入冰箱冷冻室中(-18 ℃)放置5～10分钟。然后,将载玻片从冷冻室中取出,轻推塑料环,即可使包埋在塑料环内的切片与载玻片分离。这一方法成功地解决了样品中靶细胞的发育时期确定和样品丢失问题,而且还有简单、易操作和成功率高等优点。     

介绍一种半薄切片定位样品的方法

介绍了一种半薄切片定位样品的方法。此法与前人的方法不同之处在于位于载玻片之上被重新包埋于塑料环内的切片与载玻片的分离真人处步骤是“切片被包埋聚合好后,立即从６０￣６５℃温箱内被转入冰箱冷冻室中（－１８℃）放置５￣１０分钟。然后,将载玻征从冷冻室中取出,轻推塑料环,即可使包埋在塑料环内的切片与载玻片分离。这一方法成功地解决了样品中靶细胞的发育时期确定和样品丢失问题。而且还有简单、易操作和成功率高等优     

切片机刀的代用品——单面刀片

国产单面刀片经显微镜检查,刀刃光滑平直无损伤,可以和完好的切片机刀相媲美.在使用寿命上,虽然比不上切片机刀,但是,单面刀片价廉,刀刃有损伤或者变钝,可不再研磨,换上一个新的就能继续工作.单面刀片如果装置得当,可以提高切片机的性能.比如,我们使用的切片机,是50年代我国的第一批产品——双线牌切片机.可是安上单面刀片以后,切5—6微米厚的组织连续切片,厚薄均匀,粘连成带,效果很好.切3微米的切片(睾丸组织),结果也不错.为什么会有这样的效果呢?据我们初步的分析来看,可能和单面刀片刃口的倾斜角度比较小有一定关系. 经过测量和计算,切片机刀刃的倾斜夹角是34°,单面刀片是9°.角度小的刀刃,若安装合理,切削的阻力减小,石蜡不易卷缩,组织蜡片粘连得也就比较整齐.但是,应该指出,单面刀片要以下述步骤进行装     

光学相干成像技术无创监测Er:YAG激光消融后人牙本质表面变性层

为探讨利用光学相干成像技术(OCT)定量评估Er:YAG激光消融后牙本质表面特征的可行性,以人无龋第三磨牙为试验样品,制备牙本质圆盘,用50μs超短脉宽Er:YAG激光在水喷雾下垂直切削牙本质表面,对照组为金刚砂球钻切削和砂纸抛光组,OCT观察表层性状及测量表层光强改变,组织病理切片分析表层结构;表面切削后使用37％磷...     

透射电子显微镜(TEM)在孢粉学研究中的应用

透射电子显微镜作为常规的显微镜工具,已被广泛运用于观察研究生物组织超微构造,20世纪60年代开始在生物化石的研究中得到应用,特别是孢粉学,如大孢子、花粉、疑源类等的研究。通过对处理后的化石样品进行超薄切片,可观察到生物组织中保存下来的有机质壁及内含物的显微构造,对孢粉系统分类学及个体发育学的研究有重要的作用。即使是古生代的或更早期的生物样品也有一些保存下来的有价值的组织可供于超微构造的研究,只是样品在进行前期处理及超薄切片过程中会遇到一些技术问题。文章简要阐述这些具体技术问题。     

位相分辨偏振灵敏光学相干层析术:组织双折射特性的成像与定量分析

我们研制了一种基于光纤的位相分辨偏振灵敏光学相干层析成像系统。该系统中的偏振状态控制设量在参考臂而非光源臂上,因而使得光抵达样品的传输效率大大提高。鉴于光源的部分偏振性,入射于样品上的光含有任意偏振状态的分量,通过对参考光偏振状态的调制,就可相干地提取对应于入射光四种正交偏振状态并经样品后向散射的光信号。基于斯托克斯矢量夹角在无损光纤系统传输的变换不变性,我们能利用测量臂中光信号的斯托克斯参数来确定双折射样品深度分辨的位相延迟信息。利用所研制的偏振灵敏光学相干层析成像系统,不仅确认了韧带和软骨的双折射性质,而且定量分析了不同条件下韧带的双折射变化．研究结果表明：韧带松弛可使其双折射特性明显减弱,而韧带经拉伸后,其双折射特性的变化却不明显。     

第11届国际生物奥林匹克竞赛(2000)实验试题

实验一植物形态,解剖和分类学 亲爱的参赛者,这个实验室包括两组独立的试题,你将可以从试题１或试题２的任何一组开始,３０ｍｉｎ后从一组试题转答另一组试题。 请你确认给你的在你桌子上的考卷与你的实验任务一致。 国家 姓名 编号 试题１．制作植物组织切片,鉴定组织类型,解释结构 材料：植物组织样品 设备：刀片染料载片和盖片显微镜 （１０×和４０×） １．制备叶片样品１的横切片,如果需要可使用泡沫塑料支持物切片（在泡沫塑料中切开叶片,从中可获得切片）。并制备水浸切片。观察组织,选择正确代号填在１ａ．和１ｂ．的空白…