首页 | 本学科首页   官方微博 | 高级检索  
相似文献
 共查询到20条相似文献,搜索用时 31 毫秒
1.
山羊β—乳球蛋白基因5‘侧区的克隆,测序和序列分析   总被引:3,自引:1,他引:2  
采用PCR方法,首次从中国山羊肝组织扩增出β-乳球蛋白基因的5'侧区867bp片段,其中包括770bp的启动子和97bp的部分第一外显子,再克隆测序。然后,我们用计算机分析比较了山羊βLG基因的5'侧区与绵羊的和乳牛的同源性,分别为94.6%和88%。还发现上述三该区域中的转录因子结合位点及其序列都很相似。而已知绵羊与乳牛的βLG基因启动子可指导外源基因在转基因动物中组织选场划性地高效表达,这提  相似文献   

2.
采用PCR方法,首次从中国山羊肝组织扩增出β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,βLG)基因的5’侧区867bp片段,其中包括770bp的启动子和97bp的部分第一外显子.再克隆测序。然后,我们用计算机分析比较了山羊β相似文献   

3.
乳球蛋白 (BLG)是反刍家畜的一种主要乳清蛋白质。将外源基因置于BLG 5′调控区下游 ,能够控制外源基因在动物乳腺的组织特异性表达。现已清楚在BLG 5′端有多个乳核因子 1(NF1)和转录因子Stat5的识别位点 ,此外还存在多个激素作用位点[1 ] 。具有这些调控成分的BLG 5′翼端 (5′flanking)能够控制外源基因在乳腺的表达 ,但受整合位点、外源基因结构以及转基因拷贝数及其排列方式的影响[2 ] 。研究结果表明 ,仅含有 5′调控区的乳腺表达构件 ,还不能使外源基因的表达达到内源性BLG的表达水平 ,因为在 5′远端(…  相似文献   

4.
为探讨应用转基因动物乳腺生物反应器高效表达人凝血因子IX(human clotting factor IX,hFIX)的可行性,构建了包括山羊β-酪蛋白基因启动子和外显子l、内含子1、外显子2共约6.7kb片段以及hFIX全长cDNA序列和部分经改造的内含子l的乳腺表达载体,通过转基因技术获得12个原代转基因小鼠(9♀,3♂),整合率为11.2%.经EuSA和western b1ot鉴定8只转基因母鼠乳汁中有hFIX的表达并拥有很高的凝血活性,其中一只的表达量高达52.9mg/L,其凝血活性亦高达279.2%.FISH实验表明不同的转基因小鼠外源基因整合于小鼠的不同染色体上.结果证明所构建的山羊β-酪蛋白基因启动子乳腺表达载体能有效指导hFIX基因在小鼠乳腺中高效表达,并能保持hFIX的生物活性.  相似文献   

5.
黄赞  颜景斌等 《遗传学报》2002,29(3):206-211,T001
为探讨应用转基因动物乳腺生物反应器高效表达人凝血因子Ⅸ(human clotting factor Ⅸ,hFⅨ)的可行性,构建了包括山羊β-酪蛋白基因启动子和外显子1、内含子1、外显孔子2共约6.7kb片段以及hFLX全长cDNA序列和部分经改造的内含子1的乳腺表达载体,通过转基因技术获得12个原代转基因小鼠(9♂,3♀),整合率为11.2%,经ELISA和Western blot鉴定8只转基因母鼠乳汁中有hFⅨ的表达并拥有很高的凝血活性,其中一只的表达量高达52.9mg/L,其凝血活性亦高达279.2%,FISH实验表明不同的转基因小鼠外源基因整合小鼠的不同染色体上,结果证明所构建的山羊β-酪蛋白基因启动子乳腺表达载体能有效指导hFⅨ基因在小鼠乳腺中高效表达,并能保持hFⅨ的生物活性。  相似文献   

6.
该研究构建了由黄瓜素基因5′端310bp启动子序列驱动β-葡萄糖醛酸酶(GUS)报告基因的植物表达载体pPZP-CGN,通过花粉管通道法将植物表达载体pPZP-CGN导入甜瓜,并采用荧光法定量测定转基因植株中GUS活性。结果显示,gus基因在果实中高表达,而在根、茎、叶等组织中表达活性很低,表明黄瓜素基因上游310bp启动子具有指导外源基因在果实中高效特异表达的特性。  相似文献   

7.
内含子的位置不影响转基因的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
内含子在转基因动物的基因表达中具有重要作用,以乳清酸蛋白(WAP)基因5′区为调控序列,人基因组G-CSF基因为目的片段,将WAP基因第一内含子插入G-CSF基因5′端,构建成转基因动物乳腺表达载体。将其直接注射到小鼠乳腺,在泌乳期表达出人G-CSF。表明内含子在5′端的位置不影响转基因的表达,同时也表明内含子对表达有一定的作用。  相似文献   

8.
目的:克隆奶山羊β-乳球蛋白(BLG)基因5'、3'调控区,并对其进行序列分析。方法:从徐淮奶山羊组织中提取基因组DNA,采用高保真长模板PCR法克隆得到奶山羊BLG基因4.2kb的5'调控区和1.8kb的3′调控区;将纯化后的PCR产物克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定和序列测定验证克隆的正确性。结果:部分序列分析表明,奶山羊BLG基因5'区与GenBank中登录的山羊和绵羊BLG基因5'区的同源性分别为100%和95%,3'区的同源性分别为99%和93%;克隆得到的奶山羊BLG基因调控区与山羊BLG伪基因显著不同,二者5'区和3'区的同源性分别为83%和88%。结论:克隆得到的奶山羊BLG基因调控区可用于构建乳腺特异性表达载体,用于外源基因在转基因动物乳腺中的高效表达。  相似文献   

9.
cIts857基因的克隆、修饰及温敏诱导表达载体   总被引:1,自引:1,他引:1  
从噬菌体λDNA(cIindlts857Sam7)克隆出990bP的cIts857基因,经缺失,点突变等修饰改造和DNA序列测定,获得了带有自身启动子区的修饰型cIts857基因(770bp)。进而利用它构建大肠杆菌表达载体pBLMVL2和一套含3种不同阅读框架linker区的表达载体pBLMFV4、5B、6。上述表达载体;用于表达人工合成的牛生长激素(bGH)、人干扰素-γΔC-13和酵母pho85等外源基因,都观察到这些基因产物的温敏表达。这些表明,克隆、修饰并组建到表达载体中的λ噬菌体cIts857基因表达出具有功能作用的转录阻遏蛋白,使上述PL启动子控制下的大肠杆菌表达载体可经温敏诱导而高效表达外源基因产物.  相似文献   

10.
番茄rbcS3A启动子控制的GUS融合基因在转基因水稻中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
为研究不同启动子用于转基因水稻,克隆了番茄Rubisco小亚基rbcS3A基因的5′上游调控区,构建了由rbcS3A启动子引导的GUS嵌合基因,并经农杆菌介导导入到水稻中。对转基因水稻植株中GUS活性的定性与定量测定结果表明,rbcS3A启动子可驱动GUS报告基因在转基因水稻植株茎和叶组织中高效表达,而在根和种子等器官中不表达或表达活性极弱,表现出一定的组织特异性。在转基因水稻中,番茄rbcS3A启动子驱动外源基因的表达不受光诱导。  相似文献   

11.
通过PCR方法从羊肝总DNA中获得了羊-β乳球蛋白(BLG)基因第一和第二内含子,以羊β-乳球蛋白基因(BLG)5’区5kb为调控序列,构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体载体。对540枚小鼠受精卵进行显微注射,经PCR和Southern blot检测,获得6只整合有人La-tPA的转基因小鼠,整合率为32%。同时研究了转基因在小鼠体内的表达。Northern blot分析表明,在一些转基因鼠乳  相似文献   

12.
组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)转基因鼠的建立   总被引:2,自引:0,他引:2  
用羊β-乳球蛋白基因(BLG)5区5×103b(103b,旧称kb)为调控序列,构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体(La-tPA)载体.对540枚小鼠受精卵进行显微注射,经PCR和Southernblot检测,获得6只整合有人La-tPA的转基因小鼠,整合率为32%.这为未来利用转基因动物生产La-tPA提供依据  相似文献   

13.
人体ε-珠蛋白基因5′旁侧DNA序列对该基因时空表达与调控起着十分重要的作用。本文运用凝胶电泳阻抑法,DNaseI足印法和Southwesternblot分析法发现在胚胎型红白血病细胞株K562细胞中有一个特异的核蛋白因子(简称ε-SSP,其分子量大约为80kD),它能专一地与人体ε-珠蛋白基因5′旁侧一个红细胞专一和发育时期特异的正调控元件(ε-PREII,-446bp到-419bp)相结合。竞争实验表明该因子与ε-PREII的结合能被人体ε-珠蛋白基因启动子区DNA片段(-177bp到+1bp)所竞争;同时也能被人体β-类珠蛋白基因远侧端调控元件LCR中的DNaseI超敏感点I核心区DNA片段(-10965bp到-10681bp)与超敏感点II核心区DNA片段(-14993bp到-14718bp)所竞争。我们的结果提示了ε-SSP不仅是一个与红细胞专一性和发育时期特异性相关的反式调控因子,而且它可能介导远侧端调控元件(LCR)与近侧端调控元件启动子之间的相互作用,共同调节ε-珠蛋白基因在胚胎期的表达。  相似文献   

14.
葡萄叶绿体rbcL基因的结构分析   总被引:2,自引:0,他引:2  
以玫瑰香葡萄(Vitisvinifera L.)为材料,克隆了含有叶绿体rbc L基因的3.1 kb Bam HⅠ片段,构建了该基因的限制性酶切图谱,测定了该基因的核苷酸序列。所测的核苷酸序列总长度为2004 bp,其中基因的编码区为1428 bp,编码一个含475 个氨基酸的蛋白质,其分子量约为53 kD;测定基因的5上游含启动子的部分共358 bp,包括- 10 区(TAAAAT)、- 35区(TTGCGC)和SD 序列(GGAGG);基因的3下游区共218 bp,含有3 个转录茎环终止结构。玫瑰香葡萄rbc L基因编码区的核苷酸序列与烟草、矮牵牛、菠菜、苜蓿、水稻和玉米之间的同源性分别为91.5% 、91.4% 、90.2% 、89.8% 、86.3% 和84.5% ;推导出的氨基酸序列的同源性分别为92.2% 、91.6% 、92.2% 、93.7% 、93.5% 和90.1% 。  相似文献   

15.
cIts857基因的克隆,修饰及温敏诱导表达载体   总被引:7,自引:5,他引:2  
从噬菌体λDNA克隆出990bp的cIts857基因,经缺失,点突变等修饰改造和DNA序列测定,获得了带有自身启动子区的修饰型cIts857基因(770bp)。进而利用它大肠杆菌表达载体pBLMVL2和一套含3种不同阅读框架Iinker区的表达载体pBLMFV4、5B、6。上述表达载体,用于表达人工合成的牛生长激素、人干扰素-γ△C-13和酵母pho85等外源基因,都观察到这些基因产物的温敏表达。  相似文献   

16.
以AcNPV凋亡抑制基因p35为探针,与LsNPVDNA的限制性片段和LsNPVDNAEcoRV片段杂交,发现EcoRV5.5kb片段有强烈的杂交信号。将此片段亚克隆后,测定了1244bp序列,发现一个完整的ORF,推导的302个氨基酸与AcNPVp35蛋白有70.4%的氨基酸同源性,证明所测ORF为LsNPV的p35基因。结构分析发现其5′端有早期基因启动子元件GC、ACGT和TATAbox。有22bp的顺向重复序列,包括由两个重叠的TATAbox和上下游两个ACGTmotif组成的两套启动子元件,这些结构特征与AcNPV的凋亡抑制基因十分相似。  相似文献   

17.
目的:克隆奶山羊β-乳球蛋白(BLG)基因5'、3'调控区,并对其进行序列分析.方法:从徐淮奶山羊组织中提取基因组DNA,采用高保真长模板PCR法克隆得到奶山羊BLG基因4.2 kb的5'调控区和1.8 kb的3'调控区;将纯化后的PCR产物克隆到pGEM-T Easy载体中,经酶切鉴定和序列测定验证克隆的正确性.结果:部分序列分析表明,奶山羊BLG基因5'区与GenBank中登录的山羊和绵羊BLG基因5'区的同源性分别为100%和95%,3'区的同源性分别为99%和93%;克隆得到的奶山羊BLG基因调控区与山羊BLG伪基因显著不同,二者5'区和3'区的同源性分别为83%和88%.结论:克隆得到的奶山羊BLG基因调控区可用于构建乳腺特异性表达载体,用于外源基因在转基因动物乳腺中的高效表达.  相似文献   

18.
绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中的表达   总被引:5,自引:1,他引:4  
将改良的绿色荧光蛋白(GFP)基因,插入到植物表达载体中,构建双CaMV35S启动子驱动下的植物表达载体pBIGFP,在Kam浓度为20mg/L的筛选培养基上,用含有pBIFP质粒的根癌农杆菌LBA4404感染青蒿叶片,获得5个抗Kan阳性丛生芽系。Southern blotting分析表明,外源GFP基因已整合到青蒿转基因芽G-1系的基因组中。在OLYMPUS-BH2型荧光显微镜下,观察到转基因  相似文献   

19.
用羊β-乳球蛋白基因(BLG)5’区5*10^3b(10^3b,旧称kb)为调序列,构建了乳腺表达组织纤溶酶原激活剂突变体载体。对540枚小鼠受精卵进行显微注射,经PCR和Southernblot检测,获得6只整合有人La-tPA的转基因小鼠,整合率为32%。  相似文献   

20.
为研究玉米(Zeamays L.)19kD醇溶贮藏蛋白(zein)基因启动子种子特异性表达的控制区段,将全长694bp的启动子进行5’端缺失,共得到6个缺失突变体,长度分别为488bp、378bp、302bp、152bp、124bp和85bp。将6个片段分别与报告基因gus连接构建成表达载体pDGB系列,经土壤农杆菌(Agrobacterium)介导转化,引入烟草。GUS活性检测证明,488bp启动子片段能促使gus基因在种子中特异表达。378bp、302bp、152bp和124bp片段启动子引导的gus基因在烟草根、叶柄、种子中均可表达。  相似文献   

设为首页 | 免责声明 | 关于勤云 | 加入收藏

Copyright©北京勤云科技发展有限公司  京ICP备09084417号