CapG的表达对结直肠癌细胞增殖、迁移能力的影响

为探讨巨噬细胞加帽蛋白(Cap G)在结直肠癌组织中的表达及对癌细胞增殖、迁移的影响,选取2016年2月至2017年2月我院收集的91份结直肠癌标本,同时选取癌旁正常组织(5 cm)作为对照,采用免疫组化法检测Cap G表达;同时选用结直肠癌HCT116细胞分为空白对照组、阴性对照组和观察组,阴性对照组转染阴性序列,观察组转染靶向Cap G序列,采用MTT法和Transwell细胞迁移实验检测细胞增殖及迁移能力。结直肠癌组织Cap G阳性表达率为76.92%,明显高于癌旁正常组织,差异比较有统计学意义(p0.05);不同癌变部位、分化程度及TNM分期患者Cap G阳性表达率比较差异有统计学意义(p0.05);空白对照组、阴性对照组和观察组转染后A值比较差异无统计学意义(p0.05);观察组穿膜细胞数分别为(55.20±8.42)个,明显低于空白对照组和阴性对照组(p0.05);空白对照组和阴性对照组穿膜细胞数比较差异无统计学意义(p0.05)。结直肠癌组织中Cap G表达明显升高,表达水平与癌变部位、分化程度及TNM分期有关,同时Cap G表达与结直肠癌细胞迁移有关。     

Rspo1、LGR5、NF-κB/p65在胃癌中的表达及其临床意义

目的 通过检测特异性顶部盘状底板反应蛋白1(Rspo1)、富含亮氨酸的重复G蛋白偶联受体5(LGR5)与核转录因子κB/p65(NF-κB/p65)在人胃癌中的表达水平及与临床病理因素及预后之间的关系,并分析三者在胃癌发生发展中发挥的作用。方法 免疫组织化学SP法测定Rspo1、LGR5及NF-κB/p65在115例胃癌组织标本及20例正常组织标本中的表达。结果 Rspo1、LGR5、NF-κB/p65在胃癌中表达较正常组织增高;Rspo1、LGR5、NF-κB/p65的表达与浸润深度、TNM分期、淋巴结及远处转移有关,同时Rspo1表达与肿瘤大小、LGR5表达与肿瘤大小及分化程度有关;胃癌组织中Rspo1与LGR5、NF-κB/p65的表达呈正相关;Kaplan-Meier分析显示Rspo1、LGR5和NF-κB/p65表达阳性组3年生存率均低于阴性组;单因素Cox分析提示肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、Rspo1、LGR5、NF-κB/p65阳性是影响胃癌患者预后的危险因素;多因素Cox分析提示淋巴结转移、远处转移、Rspo1及LGR5阳性是影响胃癌患者预后的独立危险因素。结论 Rspo1、LGR5、NF-κB/p65的表达与胃癌的发生发展有关;Rspo1-LGR5在激活Wnt/β-catenin通路的同时可能激活NF-κB通路,二者对胃癌发展有协同作用。     

MXRA5在结直肠癌中的表达及其意义

目的:在我们的前期实验中,我们运用质谱技术研究新鲜培养的结直肠癌和对应的正常黏膜蛋白组学差异时发现基质重建相关蛋白5(MXRA5)在两者之间的表达有明显的差异,而目前并没有关于MXRA5是否可以作为结直肠癌肿瘤标志物的研究;本实验的目的是探索MXRA5在结直肠癌中的表达情况以及其临床意义.方法:运用免疫组化和实时定量PCR技术,对MXRA5在结直肠中的表达情况进行检测,并分析其与临床病理特征的关系.结果:MXRA5在结直肠正常组织、腺瘤和肿瘤中的免疫评分有明显差异(P＜0.05),而且MXRA5的阳性表达与肿瘤的分期和大网膜转移明显相关.基因水平MXRA5的表达没有发现明显差异.结论:我们的研究结果证实了MXRA5在肠癌组织中存在异常表达,并且可能是结直肠癌早期诊断或者大网膜转移的肿瘤标志物.     

胃肠黏膜G蛋白偶联受体5阳性细胞研究进展

干细胞和再生医学的研究已成为自然科学中最为引人注目的领,人类已在胚胎干细胞、部分成体干细胞如骨髓造血干细胞方面取得进展,但在其他成体干细胞研究,特别是胃肠黏膜干细胞研究领进展甚少.富含亮氨酸重复序列的 G 蛋白偶联受体5(LGR5)是 G 蛋白偶联受体超家族的成,在胃肠黏膜隐窝基底有少量表达,其阳性细胞可在体内分化为胃肠黏膜所有类型的细胞,被认为是可能的胃肠黏膜成体干细胞.LGR5阳性细胞的研究,对组织工程、消化道疾病发病机制研究、干细胞治疗、肿瘤治疗等方面有重要意义.     

人白细胞抗原G在结直肠癌中的表达及意义

目的：在蛋白水平检测人白细胞抗原G（HLA-G）在结直肠癌组织中的表达,探讨HLA-G分子在结直肠癌不同分级和不同分期中的表达差异及在肿瘤逃逸中作用。方法：用免疫组织化学法检测结直肠癌和癌旁正常结直肠组织HLA-G的表达情况,用SPSS13.0软件、Kruskal-Wallis test进行分析。结果：HLA-G分子在结直肠癌组织中的表达率为42.3%（41/97）,在癌旁正常结直肠组织的表达率为0（0/20）;HLA-G分子表达与结直肠癌临床TNM分期（P〈0.05）和组织学分级（P〈0.01）相关。结论：HLA-G分子在结直肠癌组织中表达上调,且与结直肠癌的侵袭性生长密切相关;HLA-G分子可能下调宿主对肿瘤细胞的免疫应答反应,使肿瘤细胞逃避机体的免疫监视。     

结直肠癌中c-erbB-2和E-cadherin蛋白表达与临床病理关系

为了探讨c-erbB-2和E-cadherin（E-cad）蛋白表达与结直肠癌浸润转移的关系及相关性.应用免疫组织化学技术,检测90例结直肠癌中c-erbB-2和E-cad蛋白表达.结果表明：90例结直肠癌中c-erbB-2和E-cad蛋白阳性表达率分别为52.2%（47/90）和46.7%（42/90）.c-erbB-2高表达及E-cad低表达与结直肠癌Dukes分期、浆膜浸润和淋巴结转移均呈正相关（P〈0.05）.结直肠癌中c-erbB-2表达与E-cad表达呈负相关（P〈0.05）.c-erbB-2和E-cad表达与结直肠癌浸润转移密切相关.联合检测其蛋白表达可作为判断结直肠癌预后的客观指标.     

具核梭杆菌协同Cdk5促进结直肠癌细胞迁移

目的以结直肠癌细胞SW480作为研究载体,分析具核梭杆菌(F.nucleatum)对Cdk5和STAT3途径相关基因及其炎症因子表达的影响,阐明F.nucleatum协同Cdk5促进结直肠癌形成和发展的分子机制。方法以结直肠癌细胞SW480作为研究载体,运用Western Blotting、qPCR、免疫组化和细胞划痕等实验研究F.nucleatum和Cdk5对结直肠癌形成的影响。结果免疫组化结果显示,癌组织Cdk5阳性表达率明显高于癌旁组织(t=8.218,P0.01)。细胞划痕实验结果表明,F.nucleatum菌液作用的结直肠癌细胞迁移率明显高于对照组(24 h:t=5.868,P0.01; 48 h:t=6.941,P0.01)。Western Blotting结果显示,F.nucleatum协同Cdk5可能通过STAT3通路调控结直肠癌细胞凋亡。qPCR结果显示,F.nucleatum菌液作用的结直肠癌细胞的炎症因子表达明显高于对照组(IL-6:t=5.542,P0.05; COX2:t=16.893,P0.01; TNF-α:t=16.963,P0.01; IL-8:t=3.733,P0.01)。结论 F.nucleatum协同Cdk5促进了结直肠癌细胞的迁移。     

CAFs调控MAPK/ERK5通路抑制结直肠癌HT-29细胞凋亡

为探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制,本研究通过组织贴壁法从结直肠癌组织中分离CAFs,并验证CAFs中α-SMA的表达;通过Transwell建立CAFs和结直肠癌细胞系HT-29共培养系统,CCK8检测结直肠癌HT-29细胞活力;流式细胞术检测HT-29细胞凋亡率;通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测结直肠癌细胞中VEGF的mRNA和蛋白表达以及ERK5磷酸化水平。与对照NFs相比,α-SMA在结CAFs中表达显著增加(p0.01)。CCK8结果表明CAFs促进结直肠癌细胞的增殖;流式结果显示CAFs能抑制细胞凋亡;Real-time RT-PCR和Western blotting结果显示CAFs促进结直肠癌细胞内VEGF的mRNA和蛋白表达,并促进ERK5磷酸化。本研究初步表明,CAFs激活MAPK/ERK5通路和VEGF的表达,可促进结直肠癌HT-29细胞增殖。     

FOXG1在结直肠癌侵袭及转移中的作用及机制

构建叉头框G1(Forkhead box G1,FOXG1)的慢病毒干扰(shRNA)质粒及表达质粒,通过敲低和过表达FOXG1探讨其对结直肠癌细胞上皮-间质转化EMT的作用及其机制。应用Western blotting检测FOXG1在RKO、SW480、SW620、LOVO、DLD-1五种结直肠癌细胞中蛋白的表达水平,设计并合成FOXG1的shRNA片段(shFOXG1),运用DNA重组技术获得重组质粒,经双酶切技术及测序方法鉴定后进行慢病毒的包装、纯化及稳定转染,经筛选后获得稳定的结直肠癌细胞株,通过Western blotting和qRT-PCR技术检测FOXG1敲低和过表达效率及EMT关键因子E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、Snail、Twist mRNA和蛋白的变化,光学显微镜观察敲低后细胞形态学变化,通过划痕实验检测迁移能力变化,Transwell检测侵袭迁移能力的变化。5种结直肠癌细胞中,FOXG1在RKO细胞中蛋白表达量最高,而在DLD-1细胞中表达量最低,与对照组相比较,在RKO细胞中敲低FOXG1,细胞形态由长梭型变成了类圆形或者多边形,细胞极性和紧密连接增加,细胞迁移距离明显降低,侵袭转移穿过小室的细胞数也明显减少,EMT关键因子E-cadherin表达增高,Vimentin、Fibronectin、Snail、Twist表达降低,过表达FOXG1组则相反。FOXG1在结直肠癌中高表达,这种基因的高表达能够促进结直肠癌细胞的侵袭和转移,对结直肠癌细胞的EMT起着重要的调控作用。     

TRAF4调控人结直肠癌细胞增殖的机制研究

目的:研究TRAF4影响结直肠癌细胞增殖的分子机制。方法:MTS和软琼脂集落形成实验检测基因沉默TRAF4后对结直肠癌细胞生长及相关信号通路的影响,检测TRAF4表达下调后结直肠癌细胞的糖酵解变化及己糖激酶II的表达和结直肠细胞对5-Fu的敏感性。结果:基因沉默TRAF4抑制结直肠癌细胞的停泊依赖和停泊非依赖增殖,抑制EGF诱导的Akt活化,下调结直肠癌细胞糖酵解,抑制己糖激酶II的表达,增加结直肠癌细胞对5-Fu的敏感性。结论:TRAF4通过调控糖代谢影响结直肠癌细胞增殖。     

通关藤苷G通过ATM-CHK2-p53信号通路抑制结直肠癌细胞增殖

为了探讨通关藤苷G(tenacissoside G,TG)对人结直肠癌细胞增殖的影响及其分子机制,本研究采用CCK-8和平板克隆检测通关藤苷G对结直肠癌RKO和LoVo细胞增殖水平的影响,并利用流式细胞仪观察细胞周期变化、彗星实验检查DNA损伤情况、免疫荧光检测γ-H2AX表达水平以及Western blot检测细胞周...     

CD15 mRNA和nm23H1 mRNA表达与结直肠癌转移和预后的关系

为了探讨评估结直肠癌预后指标.应用催化信号放大-原位杂交技术,研究90例结直肠癌组织中CD15和nm23H1的mRNA表达,并结合随访资料分析.结果表明,在结直肠癌中CD15和nm23H1的mRNA阳性表达分别为84.4%和66.7%.CD15mRNA高表达及nm23H1mRNA低表达与结直肠癌浸润程度、淋巴结转移和肝脏转移状况密切相关.提示CD15和nm23H1的mRNA表达均可作为预测结直肠癌侵袭转移和客观评估患者预后的生物学指标.     

结直肠癌PTEN基因表达及与p-ERK相关性研究

目的 研究结直肠癌中的PTEN、p-ERK蛋白的表达及相互关系,初步探讨它们在结直肠癌的发生发展中的生物学意义.方法 应用免疫组织化学染色快捷法,检测40例结直肠癌组织、18例结直肠腺瘤、13例结直肠正常黏膜中PTEN蛋白、和p-ERK蛋白的表达情况,比较PTEN蛋白表达与临床病理指标的关系,及其与p-ERK蛋白表达的相关性.结果 1.结直肠癌癌组织PTEN蛋白表达的阳性率(57.5％)明显弱于腺瘤(72.2％)及正常组织(100％),组间比较差异有显著性(P＜0.05),其表达水平与结直肠癌的分化程度、淋巴结转移、浸润深度、Dukes分期有关,与患者的性别、年龄,肿瘤大小及位置无关(P＞0.05)2.结直肠癌组织p-ERK蛋白表达的阳性率(72.5％)明显高于正常结直肠黏膜组(0.00％)及腺瘤组(66.6％),组间比较差异有显著性(P＜0.01),其表达随结直肠癌侵润深度增加、淋巴结转移、Duke分期的进展而增高.3.PTEN蛋白表达强度与p-ERK蛋白表达强度之间呈负相关(r=-0.452,P＜0.05).结论 提示抑癌基因PTEN的表达与结直肠癌生物学行为密切相关;在结直肠癌发生、发展过程中,可能由于PTEN蛋白的低表达或失表达不能有效抑制ERK磷酸化,使细胞发生癌变,并促进癌变细胞的浸润、转移.     

miR-195-5p在结直肠癌和肺癌细胞中的功能差异性研究

目的:分析miR-195-5p在结直肠癌和肺癌组织及相应肿瘤细胞中的表达差异和功能差异。方法:通过starBase数据库调取癌症基因组图谱(TCGA)中miR-195-5p表达数据,分析其在结直肠癌和肺癌组织中的表达差异;采用人结直肠癌细胞系SW620、小鼠结直肠癌细胞系MC38、人肺癌细胞系A549和小鼠肺癌细胞系344SQ进一步分析miR-195-5p在不同肿瘤细胞中的表达差异;采用CCK-8法检测miR-195-5p过表达对SW620和A549细胞增殖的影响;采用Transwell实验检测mi R-195-5p过表达对SW620和A549细胞侵袭与迁移能力的调控差异。结果:生物信息学分析结果显示miR-195-5p在结直肠癌组织中显著高表达,而在肺癌组织中的表达量却低于正常对照;与组织表达结果类似,结直肠癌细胞中miR-195-5p的表达量显著高于肺癌细胞;过表达miR-195-5p抑制人肺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭,而在人结直肠癌细胞SW620中结果却截然相反。结论:miR-195在不同类型的肿瘤中表达不同,功能也存在差异,不能简单地概括为一种抑癌因子或致癌因子,miR-195在肿瘤中的作用仍有待进一步研究。     

ICAM-1和CD44v6在结、直肠癌中的表达及临床意义

目的:了解ICAM-1和CD44v6在结、直肠癌中的表达,探讨它们与结直肠癌侵袭与转移的关系.方法:应用免疫组织化学pv-9000二步法检测ICAM-1和CD44v6在40例结直肠癌和30例大肠良性腺瘤组织中的表达情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系.结果:40例结、直肠癌和30例大肠良性腺瘤中,ICAM-1的表达阳性率分别是72.5%(29/40)、33.3%(10/30),CD44v6的表达阳性率分别是88.9%(27/40)、26.7%(8/30). ICAM-1和CD44v6的表达与年龄、性别、肿瘤细胞分化程度无关,但与淋巴结转移、Dukes分期具有相关性(p<0.05).有淋巴结转移、Dukes分期在C+D期者,ICAM-1和CD44v6的表达阳性率均明显升高.ICAM-1和CD44v6在大肠良性腺瘤中呈低表达或不表达.ICAM-1和CD44v6两者均阳性表达时,其预测结、直肠癌淋巴结转移的特异性升高,有一定的临床意义.结论:CD44v6和ICAM-1的阳性表达预示结直肠癌具有较强的侵袭转移能力,可作为预测结直肠癌转移潜能的生物学指标.     

ATAD3A在结直肠癌组织中的表达及其对细胞生长的影响

目的:探讨三磷酸腺苷酶家族蛋白3A(ATAD3A)在结直肠癌组织中的表达情况,并验证其对结直肠癌细胞RKO和HCT116生长的影响。方法:收集结直肠癌患者配对癌与癌旁组织115例,通过免疫组化方式验证ATAD3A在结直肠癌组织与癌旁的表达差异。采用慢病毒转染和si-RNA干涉的方式构建ATAD3A过表达和敲低肠癌细胞系,并采用MTS,流式检测细胞周期和细胞凋亡等方法验证ATAD3A对结直肠癌细胞系RKO和HCT116的影响。结果:ATAD3A在结直肠癌组织中表达较癌旁组织显著升高(P0.001)。在结直肠癌细胞系RKO和HCT116中过表达ATAD3A后,细胞增殖能力明显增强,处于S期的细胞比例明显增加,而且细胞凋亡数量明显减少。反之,在上述肠癌细胞中干涉ATAD3A后,细胞增殖能力减弱,细胞大部分停滞于G1期,而且凋亡细胞数量明显增多。结论:ATAD3A在结直肠癌组织中表达升高,且ATAD3A通过促进细胞增殖、细胞周期进程和抑制细胞凋亡等方式促进肠癌细胞的生长。     

TS、Ki-67及P53在结直肠癌原发灶及转移淋巴结中的表达及与5-FU化疗敏感性的关系

目的探讨结直肠癌原发灶及转移淋巴结中胸腺嘧啶核苷酸合成酶(thymidylate synthase,TS)、Ki-67和p53表达差异性,并探究其对预测5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)敏感性的价值。方法选取有淋巴结转移的结直肠腺癌患者33例,采用免疫组织化学方法检测结直肠癌淋巴结转移灶及原发灶中TS、Ki-67和P53的表达情况。结果 TS高表达、p53和Ki-67在转移淋巴结的表达率显著高于原发灶;较好预后的即对5-FU化疗敏感的病例共7例,其中在转移淋巴结及原发癌中TS均为低表达率,p53、 Ki-67为阴性表达。结论转移淋巴结中的p53、TS、Ki-67的表达情况同原发灶相比有异质性变化,转移淋巴结TS表达情况可以预测结直肠癌患者对5-FU化疗敏感性,p53的表达情况或许可预测结直肠癌患者对5-FU的化疗敏感性,Ki-67表达与5-FU化疗敏感性的关系仍需要进一步研究。     

结直肠癌组织RABEX-5、LASS2、HOXB7蛋白的表达及临床意义

摘要 目的：探讨结直肠癌组织Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子-5（RABEX-5）、人源长寿保障基因2（LASS2）、同源异型盒基因B7（HOXB7）表达与临床病理特征及预后的关系。方法：选择2013年10月至2015年4月期间在我院接受治疗的105例结直肠癌患者作为研究对象。检测其结直肠癌组织以及癌旁组织中RABEX-5、LASS2、HOXB7表达,分析RABEX-5、LASS2、HOXB7表达与临床病理特征的关系,采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同RABEX-5、LASS2、HOXB7表达患者总生存率的差异,Cox比例风险回归分析结直肠癌患者预后的影响因素。结果：与癌旁组织相比,结直肠癌组织中RABEX-5、HOXB7表达阳性率上调,而LASS2阳性率下降（P<0.05）。LASS2表达与TNM分期、浸润深度和淋巴结转移有关（P<0.05）,而RABEX-5、HOXB7表达与TNM分期和淋巴结转移有关（P<0.05）。RABEX-5、HOXB7表达阳性患者的生存率分别低于RABEX-5、HOXB7表达阴性患者,而LASS2表达阳性患者的生存率高于LASS2表达阴性患者（P<0.05）。结直肠癌患者预后的影响因素包括TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、RABEX-5阳性表达、LASS2阴性表达和HOXB7阳性表达（P<0.05）。结论：在结直肠癌组织中RABEX-5、HOXB7阳性率升高,而LASS2阳性率下降,且与TNM分期以及淋巴结转移密切相关。RABEX-5、LASS2、HOXB7表达与结直肠癌患者的生存和预后联系密切。     

应用高分辨率熔解曲线分析石蜡标本中KRAS基因突变

目的:KRAS基因在结直肠癌患者突变率为30％～50％,并且KRAS基因状态与抗EGFR抗体疗效的密切相关.常用的直接测序法其检测灵敏度低、容易出现假阴性结果.采用高分辨率溶解曲线分析法检测结直肠癌中KRAS基因突变,探索其应用于临床检测的可行性.方法:本文收集20例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本,应用高分辨率熔解曲线方法检测KRAS基因突变(2,3号外显子).将KRAS基因突变型DNA(p.G12D)和野生型DNA梯度混合稀释,突变型DNA浓度分别为40％、20％、10％、2％,进行高分辨率熔解曲线方法进行检测,并将扩增产物进行直接测序,比较两种方法的灵敏度.结果:在20例结直肠癌患者中检出5例2号外显子突变,p.G12D 2例,p.G12V 2例,p.G13D 1例,3号外显子未检出突变.HRM方法检测基因突变的检出限可达2％,直接测序法检测基因突变的检出限为20％.结论:HRM法比直接测序法灵敏度高,能精确检测出结直肠癌石蜡标本中低浓度的KRAS突变,有望应用于临床基因突变检测.     

EMB低表达通过促进细胞周期G1/S期转变促进结直肠癌细胞的增殖

结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是一种危害人类健康的恶性肿瘤.跨膜糖蛋白Embigin(EMB)是免疫球蛋白超家族成员之一,参与调控肿瘤细胞的增殖和迁移,然而,其在结直肠癌进展中的作用和机制仍不清楚.本研究旨在分析EMB在结直肠癌中的表达及其临床意义,研究其对结直肠癌细胞增殖的影响及其作用机制.免...