核酸的酸变性研究——Ⅲ.在酸变性过程中核酸“融点”的观察

(一)我们进行了DNA,大分子RNA及sRNA在加酸变性过程中“融点”及融化曲线改变的比较,当pH下降时三种核酸的融点都逐渐下降,大分子RNA与sRNA的融化曲线类似,而与DNA的不同。(二)经过加酸变性再恢复中性时,大分子RNA及sRNA的“融点”与融化曲线皆恢复较好,DNA则不能完全恢复。(三)根据DNA在加酸变性后再恢复中性时的融化曲线看,可以认为DNA在加酸变性后两链并未完全解开,可能留有“核心”部分。此核心部分“融点”高,估计含有大量的鸟便嘌呤-胞嘧啶链。另外在融化曲线中部有明显的热稳定区存在。(四)由DNA的加酸变性及加热变性后再恢复中性的融化曲线特征比较,两者极为相似,说明此两种变性作用所造成的结果是一致的。(五)由sRNA在加酸变性过程中融点与融化曲线的特征看来,所有变化皆与大分子RNA一致,而不与DNA一致,说明sRNA在溶液中的结构与大分子RNA相似而与DNA不同。     

兔出血症病毒核酸的某些理化性质的研究

本文对我国无锡分离的兔出血症病毒A_2R-3毒株核酸的某些理化性质进行了研究。采用孚尔根染色、二苯胺反应和核酸酶解实验证实病毒核酸为DNA类型。吖啶橙染色、甲醛反应、核酸酶S_1消化和核酸热变性实验表明病毒核酸为单链型。核酸电泳呈单一组分。电境观察显示核酸分子链呈线状,平均长度约为2.15μ。计算分子量约为2.1—2.5×10~6d。核酸碱基组盛为A25.34、T29.37、G23.85、C21.43、(G C)克分子百分比值为45.28。结合以前的报道、我们认为:兔出血症病毒可以归类于细小病毒科。     

玉米幼苗萎蔫过程中某些理化性质变化的研究

玉米幼苗在暂时性萎蔫期间失水速率相对较慢,可溶性糖,脯氨酸等渗透调度物质的积累较多,ＳＯＤ活性增加,而在永久性萎缩期间失水速率较快,渗透调节物质减少,ＳＯＤ活性下降,在玉米幼苗萎蔫的全过程中,叶绿素,蛋白质含量及ＣＡＴ,ＰＯＤ活性等迅速下降,质膜透性增大,膜脂过氧化加剧。     

可溶性核糖核酸的研究 Ⅰ.金属离子对可溶性核糖核酸酶解稳定性的作用

(1)各种金属离子对大腸杆菌RNase活力的影响不同,Mg~++不仅沒有抑制作用而且是大腸杆菌RNase表現活力的必需因素。Ca~(++)与Ag~(++)相似,Co~(++)对酶活力影响較小,而Ni~(++)則有抑制作用。(2)在Mg~(++)、Ca~(++)或Na~+等存在下,大腸杆菌RNase和牛胰RNase降解SRNA的速度远比HRNA为慢;利用Mg~(++)对这两种RNase活力的影响不同,在Mg~(++)存在与否下,比較SRNA与HRNA降解速度的結果指出,SRNA的二級結构是其酶解緩慢的主要原因,而Mg~(++)等金属离子对稳定其二級結构起着重要的作用。这种作用在60℃仍然存在。(3)SRNA影响RNase对HRNA的降解。这种現象可能用酸溶性核苷酸与RNA一起沉淀的作用解释,但也不能完全排除两个結构相似底物(SRNA与HRNA)同时存在相互竞爭的可能性。(4)对SRNA不能为其他核酸降解酶完全降解或降解速度緩慢的原因及其生理意义进行了討論。     

可溶性核糖核酸的研究——Ⅱ.脱氨作用对可溶性核糖核酸性质的影响

(1)脫氨SRNA的ε(p)及超离心沉降行为皆与SRNA相似。脫氨SRNA的紫外吸收高峰及低峰皆稍向短波长方向移动。Mg~(++)使SRNA产生紫外低吸收效应,尿素使SRNA的光吸收值增高;在同样条件下,Mg~(++)及尿素对脫氨SRNA紫外吸收值影响极小。脫氨SRNA易为Ba~(++)等金属离子所沉淀,在pH5—7.2范圍內,0.083MBaCl_2即可使脫氨SRNA沉淀約90%,而SRNA的沉淀尚不足10%。脫氨SRNA經碱或牛胰RNase水解后,則不再能为BaCl_2所沉淀。温度对BaCl_2沉淀脫氨SRNA与SRNA有显然不同的影响。(2)用大腸杆菌RNase和牛胰RNase两种酶水解脫氨SRNA与SRNA时,Mg~(++)可以提高这两种酶对前者的降解速度,而对后者起稳定作用。(3)大腸杆菌RNase降解脫氨SRNA可以得到黄嘌呤、次黄嘌呤及尿嘧啶三种单核苷酸,降解SRNA可以得到腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤及尿嘧啶四种单核苷酸。     

核酸杂交技术及其在肿瘤研究中的某些应用

1957年 Warner 等首先发现 polyA 与 polyU能形成稳定的双链结构,但当时未引起人们的重视。直到1960年 Doty 等发现肺炎双球菌的双链 DNA 可以通过物理的方法解离成二条单链,又可再聚成双链。这才使 Spiegelman 等按     

核酸化学结构的研究——Ⅰ.1-氟-2,4-二硝基苯与可溶性核糖核酸的反应

(一)本工作报告了FDNB与RNA的作用条件,并研究了不同断裂程度的RNA和FDNB的反应。(二)对DNP-在大肠杆菌S-RNA分子中的结合位置通过紫外线吸收光谱和牛胰RNase以及蛇毒磷酸双酯酶的降解作用做了探讨,由实验结果推断:DNP-似结合在S-RNA末端5′-G核苷酸的磷酸单酯上。(三)本文说明DNP-的结合量可以用来计算S-RNA的链长及分子量;也可以利用DNP-标记pG末端,以便利于该末端核苷酸排列顺序的研究。     

核糖核酸结构的研究 Ⅰ.小型两向电泳层析方法

进行核糖核酸結构的研究,除需要特异性強的核酸酶外,还必須具备分离酶解产物的良好方法。关于RNA~(**)酶解产物的分离,前人曾經使用过Dowex-1、ECTEOLA、DEAE、DEAE-Sephadex等阴离子交换剂进行柱层析,并取得不少成果,柱层析法虽有其优点,但时間长,工作量大,耗样品量多,且分离效果也不十分滿意,例如,A_pC_p、     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅰ.可溶性核糖核酸的结构分析和一种测定核苷酸分布的方法

(一)利用不同工具酶和化学因素对于核酸的特异降解作用,提出一种简便的系统分析S-RNA RNase I降解物的方法。方法共分四个步骤,连续在纸上进行,可以测定末端以及—PypCpNp—,—PypUpNp—,—PypApNp—,—PypGpNp—,—PupApNp—,—PupGpNp—,—PupCpNp—,—PupUpNp—在核酸链中的分布。(二)对大肠杆菌S-RNA的内部结构进行了分析,得到以下结论:(1)在S-RNA链中,嘧啶或嘌呤核苷酸有“成堆”的排列。属于这种排列的核苷酸,嘧啶占总嘧啶量的56.5%;嘌呤占总嘌呤量的56.4%。(2)S-RNA经RNase I降解后多核苷酸片段(Pup)_nPyp中,嘧啶端C>U,C/U比值为1.5;嘌呤端G>A,G/A比值为1.2。(三)大肠杆菌S-RNA根据本方法分析结果计算,由76±1核苷酸残基组成(未包括(?)Up),分子量约为25000±1000,与应用核碱组成分析计算的结果基本符合。(四)根据—PupCpNp—与—PypGpNp—以及—PupUpNp—与—PypApNp—的测定值基本相同一点,讨论了S-RNA双螺旋结构,核碱成G—C、A—U对排列的可能性。并估计在S-RNA链中,少数不成对排列的碱基,可能分布于嘧啶或嘌呤“成堆”的链节中。     

脂蛋白代谢的研究——Ⅰ.脂蛋白脂肪酶的分离、提纯及其某些性质的研究

脂蛋白脂肪酶(LPL)是脂蛋白代谢中的关键酶之一。它分解富含甘油三酯的脂蛋白中的甘油三酯为甘油和脂肪酸。本文利用Heparin-Sepharose-Cl-6B亲合层析法直接分离、提纯了牛奶中的LPL。本方法操作简单,流程较短,分离效果较佳,重复性较好。提纯倍数为7,300,比活为14,000单位/毫克蛋白,回收率为13%左右。经鉴定在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈现一主要蛋白带,分子量为65,000道尔顿。酶反应的最适底物浓度为4～8毫克,最适pH为8.3～8.5。该酶能被VLDL和HDL激活,LDL和apoA-I无影响。鱼精蛋白和1.0M NaCl有抑制作用。肝素有降低该酶对抑制剂等不利因素的敏感性。牛奶LPL已初步应用于人血清脂蛋白代谢的研究。     

脂蛋白的研究 Ⅰ.人血清β脂蛋白的大量分离的新方法及其某些性质的研究

(1)本文利用大分子D.S.与β脂蛋白复合物的性质对血清β脂蛋白的大量分离及其某些性质进行了研究。(2)自制D.S.可以在中性pH与人血清β脂蛋白形成不溶的复合分子。该复合分子可以溶解于12%NaCl溶液中,并可用纯化学的方法分离,释放自由β脂蛋白。(3)该脂蛋白溶液经纸上电泳、琼脂凝胶电泳及琼脂免疫电泳的鉴定均证实为纯净的β脂蛋白,只有一种免疫性,不再含有可觉察出的D.S.。经超速离心分析,主要含有S,2—6的低密度脂蛋白及少量S_f值较高的β脂蛋白。(4)新鲜的β脂蛋白为草黄色液体,平均浓度为1克/100毫升,在可见光400—500mμ波长有三个明显的吸收峰,在紫外光275mμ波长有一吸收峰。于2℃冰箱保存二周或在4℃浓缩均不致产生沉淀。(5)本文对D.S.-β脂蛋白复合分子的性质进行了初步研究,并对其结合方式作了简单的讨论。(6)本文提供了一个简单、温和、不用长时间超速离心而可大量分离和浓缩血清β脂蛋白的化学方法。     

小鼠腹水瘤病毒(SRSV)及其核糖核酸的纯化和某些性质的研究

从感染NIH3T3小鼠成纤维细胞上清液中分离小鼠腹水瘤病毒,用蔗糖密度梯度离心法纯化。从新鲜病毒中取小鼠腹水瘤病毒RNA,并用酚-氯仿抽提和蔗糖梯度分离。各组分的沉降系数(S)和分子量通过超速离心凝胶电泳分析测定。SRSV RNA主要由两组分组成,一是沉降系数约60～70S(热处理后约35S),还有少量18S和28S,另一是4～5S。35S组分在体外能指导无细胞蛋白的合成。     

猪生长激素的提纯及其生物学活性和某些理化性质的研究

通过调pH抽提、硫酸铵分级分离和DEAE-纤维素柱层析等方法从猪垂体中提取了生长激素。平均产率约为0.5g生长激素/1000g鲜垂体。用去垂体大白鼠胫骨测定法测得共促生长效应为1.84。提取的生长激素在高pH不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳时呈现两条带;Sephadex G75柱层析得到一个峰;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现一条带,其分子量约为21,900道尔顿;聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳呈现五条带,主带在pH7.8处;DNS法测定其N-末端氨基酸为苯丙氨酸一种。此外,还测定了它的氨基酸组成。     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅱ.可溶性核糖核酸的RNase Ⅰ降解产物的双向电泳层析图谱

(一)应用双向电泳层析图谱法分析了大肠杆菌S-RNA的RNase I降解产物。结果表明成堆排列的嘧啶核苷酸占核酸重量的17.1%;二核苷酸占12.7%。成堆排列的嘧啶约占嘧啶总量的45—60%左右,证明在S-RNA分子中核苷酸的分布是不均一的。(二)在76个核苷酸链中成堆排列的嘧啶核苷酸残基,—PypCpNp—,—PypUpNp—分别是13.7和5.5;在低聚核苷酸中,—GpCp—,—ApCp—,—GpUp—和—ApUp—分别是2.5,2.O,1.4和1.1。Pyp(?)Up占1.1。(三)核苷酸在S-RNA链中的排列形式不符合按无规排列的计算结果,说明核苷酸的排列具有一定程度的规律性。     

以双链核糖核酸为基因组的病毒的研究 Ⅰ.家蚕细胞质多角体病毒的简易纯化及其性质

以双链核糖核酸为基因组的病毒寄主范围很广,如哺乳动物的呼肠病毒,昆虫的细胞质多角体病毒,植物的水稻矮缩病毒,以及某些微生物的病毒,已经发现有十余种之多。研究这类病毒的感染及复制特性在理论上和实际上都具有重要的意义。本文对家蚕细胞质多角体病毒的纯化,提供了一个简易的方法——分子筛凝胶柱层析,其特点是简便,适于大量制备。纯化病毒制剂经紫外光吸收测定、凝胶电泳及电镜观察都表明是均一的。生物感染活力LD_(50)为1.11×10-~(10)克/头。     

附子多糖FⅠ的分离纯化及部分理化性质研究

白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE-C32柱层析分离,再通过Sephadex G-200柱层析进一步纯化,得到一种纯白色粉末状多糖,糖含量为97%,平均分子量为2.6×105,熔点为270℃.经完全酸水解、薄层层析、红外光谱分析,证明为葡聚糖.     

限制性核酸内切酶Bsp 63Ⅰ的纯化及性质研究

用Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ６３菌为材料,经ＤＮＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅＦ３ＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ两步亲和层析,将Ｂｓｐ６３Ⅰ纯化到均一程度。酶比活力达６１４００Ｕ／ｍｇ蛋白。用凝胶过滤法测得该酶分子量为１１３８００。该酶样品在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中呈现为一条蛋白带,并测得其亚基分子量为５６８００。用ＤＮＳ－Ｃｌ法测得该酶Ｎ－末端氨基酸为丙氨酸。上述结果表明该酶分子是由两个相同亚基组成。     

以双链核糖核酸为基因组的病毒的研究——Ⅰ.家蚕细胞质多角体病毒的简易纯化及其性质

以双链核糖核酸为基因组的病毒寄主范围很广,如哺乳动物的呼肠病毒,昆虫的细胞质多角体病毒,植物的水稻矮缩病毒,以及某些微生物的病毒,已经发现有十余种之多。研究这类病毒的感染及复制特性在理论上和实际上都具有重要的意义。本文对家蚕细胞质多角体病毒的纯化,提供了一个简易的方法——分子筛凝胶柱层析,其特点是简便,适于大量制备。纯化病毒制剂经紫外光吸收测定、凝胶电泳及电镜观察都表明是均一的。生物感染活力LD_(50)为1.11×10~(-10)克/头。     

芹菜夜蛾核型多角体病毒D克隆株某些理化性质的研究

DNA of Syngrapha falcifera nuclear polyhedrosis virus D-clone(Sfa-D clone) was extracted and digested by three kinds of restriction endonuclease,We calculated its molecular weight and measure its melting temperature,G C%, virus particle and polyhedrin were purified.The structural polypeptides and polyhedrin are analysed by SDS-PAGE.