基于数据挖掘分析ONECUT2基因在胃癌的表达及与幽门螺杆菌感染的相关性

目的分析ONECUT2基因在胃癌中的表达及其与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的相关性。方法 (1)利用Oncomine数据库、TCGA数据库分析ONECUT2基因在胃癌中的表达,R软件包进行基因的共聚类微阵列数据分析。(2)利用Kaplan-Meier Plotter数据库和GEPIA数据库分析ONECUT2差异表达与胃癌患者预后的关系。(3)利用生物信息学功能注释数据平台DAVID对胃癌中与ONECUT2基因表达正相关的前200个基因进行功能富集分析。(4)利用GEO数据库中的数据分析H.pylori感染与ONECUT2表达的相关性。结果 (1)Oncomine数据库中的数据在胃癌、膀胱癌等8种肿瘤中共有14项研究显示ONECUT2基因在肿瘤组织中的高表达;其中胃癌相关的有两项(t=6.064,P0.000 1;t=4.335,P0.000 1);TCGA数据库的数据也证实胃癌中ONECUT2高表达(t=6.680,P0.001)。(2)胃癌中ONECUT2与EHF、FUT6、TNFRSF11A、RSAEF、EPCAM等20个基因有较高的共表达。(3)GO分析发现胃癌中ONECUT2富集在分子结构活性等相关的基因功能上;而KEGG富集分析发现ONECUT2富集于紧密连接功能等6个通路。(4)Kaplan-Meier Plotter数据库中207676-at芯片结果显示ONECUT2高表达组患者远期生存率下降(P0.001);GEPIA数据库中的分析结果同样显示ONECUT2高表达组患者其总体生存率(P0.05)和无病生存率(P0.01)下降。GEO数据库中GSE74577(P=0.005)、GSE70394(P=0.034)和GSE25146(P=0.036)三个数据集均显示H.pylori感染AGS和GES-1细胞系后ONECUT2表达上调。结论 ONECUT2在胃癌中高表达,且与胃癌一类致癌原H.pylori感染相关。ONECUT2高表达组患者远期生存率下降,表明其与胃癌发生发展密切相关,可能成为胃癌治疗的新靶点。     

幽门螺杆菌对胃癌前期阶段胃上皮DNA同源重组修复关键蛋白的影响

目的 通过检测胃癌前期阶段幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H. pylori）阳性和阴性患者胃黏膜组织中DNA损伤标志物H2AX及同源重组（homologous recombination,HR）修复关键蛋白MRE11、Rad51、CtIP表达水平,评价H. pylori感染在胃癌前期阶段对HR精确修复的影响。方法 选择2017年3月至9月行胃镜及病理检测的165例H. pylori阳性和阴性患者,取胃黏膜上皮组织,石蜡包埋切片,行HE染色,根据世界卫生组织标准和更新的悉尼标准,划分病理类型。然后应用免疫组织化学染色方法检测H. pylori和DNA损伤标记蛋白及HR修复关键蛋白表达水平,并行统计学分析。结果 胃黏膜上皮细胞中H2AX的表达,在CSG、CAG和IM阶段,H. pylori阳性组表达高于阴性组（Mann-Whitney U=1116.5,P=0.001;Mann-Whitney U=185.0,P=0.018;Mann-Whitney U=214.5,P=0.041）,在Dys阶段,H. pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义（Mann-Whitney U=35.5,P=0.964）;MRE11的表达,在CSG、CAG阶段,H. pylori阳性组表达高于阴性组（Mann-Whitney U=1117.0,P=0.001;Mann-Whitney U=201.0,P=0.002）,在IM、Dys阶段,H. pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义（Mann-Whitney U=171.0,P=0.568;Mann-Whitney U=41.5,P=0.616）;Rad51的表达,在CSG、IM阶段,H. pylori阳性组表达低于阴性组（Mann-Whitney U=490.0,P=0.002;Mann-Whitney U=73.0,P=0.007）,在CAG、Dys阶段,H. pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义（Mann-Whitney U=101.0,P=0.404;Mann-Whitney U=24.0,P=0.291）;CtIP的表达,在CSG、IM阶段,H. pylori阳性组表达低于阴性组（Mann-Whitney U=593.0,P=0.044;Mann-Whitney U=58.5,P=0.001）,在CAG、Dys阶段,H. pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义（Mann-Whitney U=84.0,P=0.136;Mann-Whitney U=18.5,P=0.102）。结论 在胃癌前期发展阶段,H. pylori感染导致人体胃上皮细胞DNA损伤,却抑制部分HR修复通道关键蛋白表达,从而可能抑制精确的HR修复,增加细胞恶变几率。     

不同类型幽门螺杆菌对GES-1细胞Cx32、Cx43表达的影响

目的观察不同类型幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）对人胃黏膜上皮细胞系GES-1细胞间隙连接蛋白（Connexin,Cx）32和43表达的影响,探讨与Cx32、Cx43表达异常有关的H.pylori菌株类型。方法将临床培养分离的不同H.pylori菌株类型包括东亚型CagA＋H.pylori、西方型CagA＋H.pylori及CagA-H.pylori与GES-1细胞共培养24 h及48 h,对照组不加H.pylori培养24 h及48 h。采用间接免疫荧光方法（IIF）及计算机图像分析技术检测GES-1细胞Cx32、Cx43表达。结果对照组24 h和48 h及加H.pylori各组24 h GES-1细胞Cx32、Cx43表达阳性率均为100%,东亚型CagA＋H.pylori组48 h Cx32、Cx43表达阳性率均低于对照组、CagA-H.pylori组和西方型CagA＋H.pylori组（P〈0.05）;对照组24 h和48 h Cx32、Cx43绿色荧光位于细胞膜,西方型CagA＋H.pylori组和东亚型CagA＋H.pylori组24 h和48 h Cx32绿色荧光大部分位于细胞膜,少部分位于细胞浆,Cx43绿色荧光大部分位于细胞浆,少部分位于细胞膜;东亚型CagA＋H.pylori组和西方型CagA＋H.pylori组24 h及48 hCx32、Cx43表达强度低于对照组和CagA-H.pylori组（P〈0.05）,且东亚型CagA＋H.pylori组较西方型CagA＋H.py-lori组减弱更明显（P〈0.05）。结论 H.pylori下调GES-1细胞Cx32、Cx43表达,以CagA＋H.pylori菌株特别是东亚型CagA＋H.pylori菌株作用更明显。     

幽门螺杆菌感染细胞模型的建立及感染相关microRNAs的筛选鉴定

目的：建立稳定的幽门螺杆菌（H.pylori）感染人胃上皮细胞模型;筛选并鉴定H.pylori感染相关microRNAs（miRNAs）的表达,为深入研究感染相关miRNAs的调控作用机制奠定基础。方法：将H.pylori标准株按MOI=100：1感染人胃上皮细胞,通过检测炎性细胞因子及炎症反应关键酶的表达综合评价感染模型;采用博奥公司miRNAs V3.0芯片分析细胞感染前后miRNAs表达谱变化,运用实时定量PCR技术和Northern杂交对表达显著差异的miRNAs进行分析鉴定。结果：H.pylori感染细胞24 h后,细胞分泌促炎细胞因子IL-8显著升高（P〈0.01）;启动炎症反应的关键酶COX-2的表达明显增加。芯片数据显示：H.pylori感染引起超过2倍显著差异表达的miRNAs包括：表达上调的PREDICTED-MIR191、miR-155、miR-92b、miR-30b、miR-146a、miR-16等,和表达降低的miR-181b、miR-324。实时定量PCR和Northern杂交结果显示感染相关miR-155和miR-146a在H.pylori感染细胞模型中表达均显著增加（P〈0.01）。结论：miR-155和miR-146a在感染细胞模型中的表达增加提示二者可能参与H.pylori感染的免疫调控过程。     

幽门螺杆菌感染与细胞自噬的研究进展

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H. pylori）是一种革兰阴性微需氧病原菌,也是定植于人类胃黏膜上皮中最特异的一种致病菌。它与人消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及胃黏膜相关组织淋巴瘤（MALT）等疾病密切相关。此后又发现H. pylori可能是一种兼性胞内菌,该菌可能通过自噬在胃上皮细胞和巨噬细胞中得以生存、繁殖并引起慢性持续性感染。本文根据近年发表的自噬相关文献,对H. pylori感染不同细胞后自噬对其存活的影响以及H. pylori不同配体引起的自噬调节作一综述。     

幽门螺杆菌(SS1)感染及其胃炎的小鼠模型

目的 :建立感染幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H pylori)SS1株BALB/c小鼠感染模型 ,研究H pylori胃内定植及胃黏膜病理变化。 方法 :BALB/c小鼠胃内分别接种体外培养的H pyloriSS1株 (实验组 )或PBS(对照组 ) ,组织学方法评价H pylori定植及胃黏膜病理变化。结果 :所有对照组小鼠胃组织未见H pylori定植 ,胃组织也未见明显的炎症反应 ;而所有实验组小鼠在感染H pylori 12周后 ,胃黏膜表面的黏液层及胃小凹顶端可见大量H pylori,胃体及胃窦交界处、胃体及胃底交界处最多 ;胃组织可见到不同程度的炎性反应 ,感染H pylori 2 4周后 ,胃组织炎性反应加重。结论 :用胃内接种方法建立了小鼠H pylori感染及其相关性胃炎的模型。     

LncRNA MIR4435-2HG调控miR-138-5p/HMGA1轴对胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨LncRNA MIR4435-2HG对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制.方法 培养正常人胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞系AGS、SGC7901、BGC823和BGC803,AGS细胞分为对照组(正常培养细胞)、si-con组(转染乱序无意义阴性序列)、si-MIR4435-2HG组(转染MIR44...     

DEC205在幽门螺杆菌感染胃上皮细胞中的表达

目的：探讨幽门螺杆菌及其热休克蛋白60（H．pylori—HSP60）感染与胃上皮细胞表面DEC205受体的关系。方法：分别用H．pylori、H．pylori-HSP60及E．coliLPS刺激胃上皮细胞KATOIII,利用免疫荧光染色技术观察KATOIII细胞表面DEC205蛋白的表达变化,再利用RT—PCR技术,观察细胞中DEC205mRNA对上述抗原刺激后的变化。结果：H．pylori、H．pylori—HSP60及E．coliLPS的刺激明显引起细胞表面DEC205蛋白的表达以及细胞内DEC205mRNA的产生。结论：H．pylori感染与胃上皮细胞表面的胞吞受体DEC205有着密切的关系。     

胃微生物菌群与幽门螺杆菌感染的胃贲门腺癌发病相关性分析

目的 研究胃微生物菌群与胃贲门腺癌发病的相关性。方法 选择2016年4月—2018年4月在本院就诊的胃贲门腺癌（GCA）患者109例。患者均经病理科组织病理确诊为GCA。对照组为健康人群100例,根据有无H. pylori检出将对照组和GCA组患者分为有H. pylori和无H. pylor,其中对照组有H. pylori检出19例,无H. pylori检出81例,GCA组有H. pylori检出53例,无H. pylori检出56例。用胃镜采集标本,胃镜采集镜下正常的贲门胃黏膜。样本取材后置于无菌冻存管放入液氮中保存,使用16S rRNA的方法进行胃黏膜微生物种类检测。结果 GCA组患者幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）感染比例明显高于对照组,无论有无H. pylori感染的对照组人群中,丰度较高的菌属是不动杆菌（Acinetobacter）,罗斯氏菌（Rothhia）,嗜血杆菌（Haemophilus）,拟杆菌（Bacteroides）,链球菌（Streptococcus）,韦荣球菌（Veillonella）,普氏菌（Prevotella）。无H. pylori组内,GCA组样本中普氏菌（Prevotella）、瓦氏菌（Shewanella）、盐单胞菌（Halomonas）丰度明显高于对照组,有H. pylori组内,GCA组样本中普氏菌（Prevotella）、瓦氏菌（Shewanella）、盐单胞菌（Halomonas）、卟啉单胞菌（Porphyromonas）、梭杆菌（Fusobacterium）丰度明显高于对照组,不动杆菌（Acinetobacter）明显低于对照组。有H. pylori的GCA组样本中普氏菌（Prevotella）、瓦氏菌（Shewanella）、盐单胞菌（Halomonas）、卟啉单胞菌（Porphyromonas）、梭杆菌（Fusobacterium）丰度明显高于无H. pylori的GCA组,不动杆菌（Acinetobacter）明显低于无H. pylori的GCA组。结果还发现GCA与普氏菌（Prevotella）、瓦氏菌（Shewanella）、盐单胞菌（Halomonas）、卟啉单胞菌（Porphyromonas）、梭杆菌（Fusobacterium）正相关,与不动杆菌（Acinetobacter）负相关。结论 GCA患者胃内菌群数量和结果与健康人群存在明显差异,H. pylori可能影响胃内菌群结构在GCA发病中发挥作用。     

幽门螺杆菌对胃上皮细胞间隙连接超微结构的影响(英文)

通过实验和临床观察幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）对胃上皮细胞间隙连接超微结构的影响,从细胞间隙连接角度探讨H.pylori致癌机制.将不同H.pylori菌株与BGC-823细胞共培养24h或48h,用原位固定与原位包埋法透射电镜观察细胞间隙连接超微结构变化.对70例胃癌患者,用快速尿素酶试验、碱性品红染色和14C尿素呼气实验检测H.pylori,PCR法检测H.pyloriCagA基因,及透射电镜观察胃上皮细胞间隙连接超微结构变化.结果显示,未加H.pylori组BGC-823细胞可见较多细胞连接及连接复合体,加H.pylori各组细胞的连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度均小于未加H.pylori组,而细胞间隙最小宽度大于未加H.pylori组（P〈0.001或P〈0.005）,且CagA＋的NCTCJ99组、临床株GC01组和NCTC11639组细胞连接数、单位周长连接数均小于CagA-的NCTC12908组（P〈0.001或P〈0.05）,NCTCJ99组与临床株GC01组细胞单位周长连接长度短于NCTC12908组（P〈0.001）.胃癌患者H.pylori感染组细胞连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度均小于无H.pylori感染组,细胞间隙最小宽度大于无H.pylori感染组（P〈0.001）,且CagA＋H.pylori感染者细胞连接数、单位周长连接数与单位周长连接长度均小于CagA-H.pylori感染者,细胞间隙最小宽度大于CagA-H.pylori感染者.上述结果表明,胃上皮细胞间隙连接改变与H.pylori感染,特别是CagA＋H.pylori感染有关.     

DNMT在幽门螺杆菌感染与非感染胃粘膜组织的差异表达

DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase, DNMT）是表观遗传学研究热点. 本文分析DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B、 DNMT3L在成人胃粘膜的表达,并初步研究DNMT抑制剂对胃粘膜细胞的影响. 免疫组织化学法对60例成人胃粘膜组织分析发现 ,5种DNMT均在组织中表达,以DNMT2、DNMT3B表达率较高,DNMT3L、DNMT3A次之,DNMT1较低.进一步分析发现,幽门螺杆菌 感染与非感染的胃粘膜组织有DNMT表达差异,以感染组中DNMT1、DNMT2、DNMT3B表达增强较显著. 免疫荧光法及Western免 疫印迹法对胃粘膜细胞株GES 1分析发现,5种DNMT亦在细胞中表达;且DNMT1为胞核胞浆共表达,DNMT2为胞核表达, DNMT3A、DNMT3B、DNMT3L为胞浆表达. 噻唑蓝比色法研究GES-1发现,DNMT抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷可抑制GES 1增 殖,并呈时间剂量依赖. 研究提示,DNMT在成人胃粘膜表达并发挥作用,幽门螺旋杆菌感染可能与DNMT表达异常相关.     

人参皂苷Rg5对胃癌细胞周期和侵袭的影响及其机制

目的:观察ginsenoside-Rg5 (Rg5) 对胃癌细胞周期和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:采用不同浓度人参皂苷ginsenoside-Rg3 (Rg3)和Rg5 (10、20、30、40、50 μmol/L) 处理人正常胃粘膜细胞GES-1和胃癌细胞株AGS、MKN-45 24 h,每个浓度设3个复孔。通过CCK-8检测细胞存活率。通过流式细胞仪检测细胞周期、Transwell小室分析迁移和免疫印迹法及ELISA法检测相关蛋白。结果:CCK8 实验结果显示人参皂苷Rg3和Rg5 对GES-1细胞无毒副作用,但可以抑制胃癌细胞AGS和MKN-45的增值。且Rg5抗胃癌细胞的活性强于Rg3。 20 μmol/L Rg5诱导MKN-45细胞发生S期阻滞通过降低CyclinA1/CDK2/PCNA 的表达和升高P21^CIPI蛋白表达。Rg5还可以抑制MKN-45癌细胞的迁移通过降低MMP2和MMP9的表达。WB结果显示Rg5抑制胃癌增殖及迁移主要是通过抑制Notch1蛋白的表达从而调控其下游的周期及侵袭相关蛋白。结论:Rg5抗胃癌细胞活性高于Rg3且通过调控Notch1通路抑制细胞增殖和迁移。     

Urokinase plasminogen activator receptor is upregulated by Helicobacter pylori in human gastric cancer AGS cells via ERK, JNK, and AP-1

The gastric pathogen Helicobacter pylori (H. pylori) is suggested to be associated with gastric cancer progression. In this study, we investigated the effect of H. pylori on urokinase plasminogen activator receptor (uPAR) expression which has been known to correlate closely with gastric cancer invasion. H. pylori induced the uPAR expression in a time- and concentration-dependent manner. Specific inhibitors and inactive mutants of MEK-1 and JNK were found to suppress the H. pylori-induced uPAR expression and the uPAR promoter activity. Electrophoretic mobility shift assay and transient transfection study using an AP-1 decoy oligonucleotide confirmed that the activation of AP-1 is involved in the H. pylori-induced uPAR upregulation. The AGS cells treated with H. pylori showed a remarkably enhanced invasiveness, and this effect was partially abrogated by uPAR-neutralizing antibodies. These results suggest that H. pylori induces uPAR expression via Erk-1/2, JNK, and AP-1 signaling pathways and, in turn, stimulates the cell invasiveness in human gastric cancer AGS cells.     

Helicobacter pylori inhibits gastric cell cycle progression

Helicobacter pylori infection of the gastric mucosa is associated with changes in gastric epithelial cell proliferation. In vitro studies have shown that exposure to H. pylori inhibits proliferation of gastric cells. This study sought to investigate the cell cycle progression of gastric epithelial cell lines in the presence and absence of H. pylori. Unsynchronized and synchronized gastric epithelial cell lines AGS and KatoIII were exposed to H. pylori over a 24-h period. Cell cycle progression was determined by flow cytometry using propidium iodide (PI), and by analysis of cyclin E, p21, and p53 protein expression using Western blots. In the absence of H. pylori 40, 45, and 15% of unsynchronized AGS cells were in G(0)-G(1), S, and G(2)-M phases, respectively, by flow cytometry analysis. When AGS cells were cultured in the presence of H. pylori, the S phase decreased 10% and the G(0)-G(1) phase increased 17% after 24 h compared with the controls. KatoIII cells, which have a deleted p53 gene, showed little or no response to H. pylori. When G1/S synchronized AGS cells were incubated with media containing H. pylori, the G(1) phase increased significantly (25%, P < 0.05) compared with controls after 24 h. In contrast, the control cells were able to pass through S phase. The inhibitory effects of H. pylori on the cell cycle of AGS cells were associated with a significant increase in p53 and p21 expression after 24 h. The expression of cyclin E was downregulated in AGS cells following exposure of AGS cells to H. pylori for 24 h. This study shows that H. pylori-induced growth inhibition in vitro is predominantly at the G(0)-G(1) checkpoint. Our results suggest that p53 may be important in H. pylori-induced cell cycle arrest. These results support a role for cyclin-dependent kinase inhibitors in the G(1) cell cycle arrest exerted by H. pylori and its involvement in changing the regulatory proteins, p53, p21, and cyclin E in the cell cycle.     

miR-372 regulates cell cycle and apoptosis of ags human gastric cancer cell line through direct regulation of LATS2

Previously, we have reported tissue- and stage-specific expression of miR-372 in human embryonic stem cells and so far, not many reports speculate the function of this microRNA (miRNA). In this study, we screened various human cancer cell lines including gastric cancer cell lines and found first time that miR-372 is expressed only in AGS human gastric adenocarcinoma cell line. Inhibition of miR-372 using antisense miR-372 oligonucleotide (AS-miR-372) suppressed proliferation, arrested the cell cycle at G2/M phase, and increased apoptosis of AGS cells. Furthermore, AS-miR-372 treatment increased expression of LATS2, while over-expression of miR-372 decreased luciferase reporter activity driven by the 3′ untranslated region (3′ UTR) of LATS2 mRNA. Over-expression of LATS2 induced changes in AGS cells similar to those in AGS cells treated with AS-miR-372. Taken together, these findings demonstrate an oncogenic role for miR-372 in controlling cell growth, cell cycle, and apoptosis through down-regulation of a tumor suppressor gene, LATS2.     

幽门螺杆菌毒素蛋白CagA诱导的蛋白的差异表达分析及其基因在胃癌组织中的表达

为了研究胃癌细胞中幽门螺杆菌(Hp)毒素蛋白CagA诱导的蛋白差异表达及其基因在人胃癌组织中的表达,用Hp感染胃癌细胞系SGC 7901和AGS及用含CagA基因的表达载体稳定转染SGC 7901细胞, 构建3组实验模型.提取各组细胞的总蛋白进行双向凝胶电泳,筛选3组重叠的差异表达蛋白质斑点进行质谱鉴定.共获得135个差异表达的蛋白质,其中上调蛋白质73个,下调蛋白质62个. 鉴定出10个差异表达蛋白质, 其中有6个差异表达蛋白是首次发现,它们主要参与细胞的能量代谢和信号转导等.最后定量检测了这10个差异表达蛋白基因在人胃癌组织中的表达, 发现有4个基因高表达和1个基因低表达. 本结果将为研究幽门螺杆菌感染引起胃癌的分子机制提供新的线索.     

Reduced intracellular survival of Helicobacter pylori vacA mutants in comparison with their wild-types indicates the role of VacA in pathogenesis

The vacuolating cytotoxin VacA of Helicobacter pylori plays an important but yet unknown role in pathogenesis. We studied the impact of the vacuolating cytotoxin on H. pylori invasion of and survival within AGS cells (human gastric cell line derived from an antral adenocarcinoma). Isogenic vacA and cagA mutants were constructed in a wild-type clinical isolate H. pylori, AF4. An H. pylori VacA-deficient mutant, AF4(vacA::kan), was cultured in significantly lower numbers from AGS cells after 24 h incubation with gentamicin added to the culture medium than were the type I wild-type strain AF4 (P<0.03) and an isogenic cagA mutant (P<0.01). Complementation of the AF4 vacA mutant with broth culture supernatant from wild-type AF4 improved the intracellular survival of the vacA mutant. We conclude that H. pylori's vacuolating cytotoxin improves the intracellular survival of H. pylori within AGS cells, suggesting the role of the vacuolating cytotoxin in H. pylori pathogenesis.